抗體偶聯藥物（antibody-drug conjugate，ADC）與傳統的細胞毒藥物相比，具有靶向性強、毒副作用小等優點，在腫瘤治療領域具有廣闊的應用前景。在國內，首個國產ADC在2021年6月獲批上市。隨著時間流逝，ADC受到了越來越多人的關注。作為癌癥治療臨床研究中一類重要的藥物，抗體偶聯藥物通過強效小分子細胞毒素通過化學鍵與單克隆抗體結合，比抗體具有更復雜的結構。
ADC的臨床療效主要取決于連接頭、藥物和藥物的性質，偶聯位點的選擇（賴氨酸、鏈間半胱氨酸、Fc聚糖）以及分析技術的改進。因此了解ADC的物理化學性質和選擇適當的分析技術，以便在制造和存儲過程中對其進行評估和質量監控尤為重要。
然而ADC由高特異性和高親和力的抗體，高穩定性的連接頭以及高效的小分子細胞毒藥物所組成，其分子性質比較復雜，以至于表征更為困難，需要采用多種分析方法進行表征。
抗體藥物偶聯比（DAR）
DAR（drug-to-antibody ratio）是ADC藥物特有的衍生詞，其定義為：藥物/抗體比率，即一個抗體所攜帶載藥數量的平均值，DAR是平衡療效和安全性的結果。抗體藥物偶聯比（DAR）是ADC最重要的質量屬性之一，DAR決定了可以輸送到腫瘤的“有效載荷”，直接的影響了ADC的安全性和有效性。
簡單來說，ADC的效果與DAR直接掛鉤。DAR可以理解為ADC這個魔法子彈所攜帶的載彈量，然而DAR的數值并不是越高越好。高DAR雖然擁有更大的載藥量，但同時也更容易被人體的免疫系統鎖定，從而被當成異物清除體外，減少ADC的有效性。因而大部分ADC藥物的DAR限制在2-4之間。如何讓DAR數值保持在一個合適的點，兼具療效的同時還保持有效性，是目前仍在思索的問題。
DAR表征分析方法
偶聯方式是影響DAR的重要因素，只有選擇合適的偶聯技術，才能讓ADC的毒素均一穩定地連接在抗體上。有多種方法可以用于測量DAR值，根據不同的藥物特性以及結合位點和連接子的結構，需要選取不同的測量方法。
常見的DAR表征分析方法有疏水作用層析(HIC)、反相液相色譜(RPLC)、液質聯用(LC-MS)、紫外-可見(UV/Vis)光譜、毛細管電泳-十二烷基硫酸鈉（CE-SDS）等方法，其中色譜和質譜是檢測DAR值的兩種常用方法。
紫外-可見(UV/Vis)光譜
紫外-可見光譜法（UV-Visible）是目前來說較為簡單的DAR測定方法，這種方法需要抗體和小分子藥物具有不同的最大吸收波長，分別計算二者的濃度進而得到ADC的DAR值，適用于多種ADC。該方法要求藥物和抗體的光譜具有不同的最大吸收波長。UV/Vis基于蛋白質濃度測定技術而來。使用ADC在適當波長下的吸光度和抗體與有效載荷的消光系數，可以確定平均DAR。這項技術簡便易行，因為不需要進行復雜的樣品制備和建立HPLC或MS條件。然而，它要求有效載荷的UV-vis最大吸收值與未結合的抗體的最大吸收值有適當的偏移。而且，這種方法不能確定混合物中單一DAR物種的比例。
基于質譜的分析法
質譜（MS）是另一種常用的ADC表征技術，目前可用的質譜儀通常是基于電噴霧電離（ESI）和飛行時間（TOF）進行檢測，也可與具有擴展質量范圍的Orbitrap相結合。質譜法適用于賴氨酸偶聯的ADC的DAR值測定，包括液相色譜串聯質譜和MALDI-TOF-MS。質譜法可分為變性與非變性電噴霧質譜法，兩種不同的方法均是根據物質的分子量差異進行DAR的分析。抗體偶聯上不同數量細胞毒性小分子后，ADC呈現分子異質性，不同的DAR物質在高分辨質譜的分析下具有不同的質荷比（m/z），然后根據相對應的DAR質譜信號峰強度或峰面積計算平均DAR值。
MS分析法的分辨率很高，足以區分ADC中不同類型的異質體，可用于分離、鑒定和定量檢測不同類型的偶聯分子，因此，可以根據檢測到的具有不同DAR值的異質體的重量的平均值計算平均DAR值。ADC分子因偶聯引入了更多的異質性，所以其MS分析方法較傳統mAb的MS分析方法復雜得多。通常，需要盡可能避免抗體相關特征的干擾，以獲取更多的ADC特異性結構信息。
小結
ADC技術發展至今，已經經歷了三代變革，隨著靶點、連接子、載藥和偶聯技術的不斷發展，ADC愈發成熟。近年來已有了多種DAR分析表征技術，基于紫外-可見光譜、放射性標記、色譜、酶解、質譜等技術的方法均可應用于ADC生產中的過程控制（IPC）或ADC樣品的表征，然而仍然難以建立簡單方便的DAR檢測方法，探索的腳步仍然不能停下。
藥品是為人類健康而生產，研發隨著ADC技術的不斷發展，未來將會有更多結構更復雜的大分子ADC藥物出現，因此還需要持續不斷地優化和迭代分析表征技術。
