1.引言

本報告旨在對比分析《中國藥典》2020年版通則1105《非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法》和通則1106《非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法》與2025年版相應(yīng)通則在方法和要求上的差異，以判斷是否存在實質(zhì)性變化。

 

2.對比方法

本報告基于上述兩項要求進行逐條逐款對比。實質(zhì)性差異的判斷主要依據(jù)檢驗原理、核心操作步驟、關(guān)鍵參數(shù)、判定標準或強制性要求的改變，文字表述的微小調(diào)整或排版格式的變化不視為實質(zhì)性變化。

 

3.對比及分析

3.1通則1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法

 

方法適用范圍和基本要求：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本在方法適用范圍（嗜溫細菌和真菌計數(shù)）、不適用范圍（活菌制劑，除非另有規(guī)定）、試驗環(huán)境要求、無菌操作、防止污染的措施不影響檢出、潔凈區(qū)域監(jiān)控等方面的描述完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

供試品抗菌活性去除或中和：

 

 對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求盡可能去除或中和供試品抗菌活性，并強調(diào)需確認中和劑或滅活劑的有效性和對微生物無毒性。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

表面活性劑的使用：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求確認供試液制備中使用的表面活性劑對微生物無毒性以及與中和劑或滅活劑的相容性。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

計數(shù)方法：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均列出了平皿法、薄膜過濾法和最可能數(shù)法（MPN法）三種計數(shù)方法，并說明了MPN法的特點和適用性。均強調(diào)應(yīng)根據(jù)供試品特性和標準選擇方法，并需確認適用性。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

培養(yǎng)基適用性檢查和計數(shù)方法適用性試驗：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求進行計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查和供試品計數(shù)方法適用性試驗，以確認方法適用于該產(chǎn)品。均要求在檢驗程序或產(chǎn)品變化時重新進行適用性試驗。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

菌種及菌液制備：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本對試驗用菌株傳代次數(shù)（不超過5代）和保存技術(shù)的要求一致。對菌液制備后不同保存條件（室溫2小時內(nèi)，2-8℃24小時內(nèi)）下的使用時限規(guī)定一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

陰性對照（適用性試驗部分）：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求進行陰性對照試驗以確認試驗條件，要求無菌生長，并規(guī)定有菌生長時應(yīng)進行偏差調(diào)查。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

培養(yǎng)基適用性檢查方法（1105計數(shù)）：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求對商品化預(yù)制、脫水或配制培養(yǎng)基進行適用性檢查。規(guī)定了接種量（不大于100cfu）、使用的培養(yǎng)基種類（TSB液體、TSA、SDA平板）、平行數(shù)量（2管或2平板），與對照培養(yǎng)基對比，以及固體培養(yǎng)基菌落數(shù)比值（0.5-2范圍內(nèi)且形態(tài)一致）和液體培養(yǎng)基生長良好作為判定標準。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

計數(shù)方法適用性試驗–供試液制備：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均規(guī)定根據(jù)供試品理化和生物學(xué)特性選擇適宜方法制備供試液，加熱溫度不超45℃，制備到接種不超1小時。列舉了水溶性、水不溶性非油脂類、油脂類、膜劑、腸溶及結(jié)腸溶制劑、氣霧劑、貼劑/貼膏劑等不同劑型的常用制備方法。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

計數(shù)方法適用性試驗–接種和稀釋：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求按表1規(guī)定和要求進行接種和稀釋，加入菌液體積不超供試液體積1%，優(yōu)先選擇最低稀釋級。規(guī)定了試驗組、供試品對照組、菌液對照組的設(shè)置和操作。對抗菌活性或溶解性差供試品進一步處理的要求也一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

計數(shù)方法適用性試驗–抗菌活性的去除或滅活：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本判斷抑菌活性的標準一致（試驗組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值小于菌液對照組菌落數(shù)值的50%）。列出的四種消除抑菌活性的方法一致（增加稀釋液/培養(yǎng)基體積、加中和劑/滅活劑、薄膜過濾、聯(lián)合使用）。對使用中和劑/滅活劑的要求和對照組判定標準（0.5-2范圍）一致。對無法消除抑菌活性的處理原則也一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

計數(shù)方法適用性試驗–供試品中微生物的回收：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求對表1試驗菌逐一進行回收試驗，可采用平皿法、薄膜過濾法或MPN法。

 

平皿法（傾注法和涂布法）：

 

對比結(jié)果顯示，傾注法的具體操作步驟（供試液體積、培養(yǎng)基用量、混勻、凝固、培養(yǎng)）和要求一致。涂布法的操作步驟（培養(yǎng)基用量、制板、表面干燥、接種量、培養(yǎng)）和要求一致。兩者都要求每株試驗菌每種培養(yǎng)基至少制備2個平皿，并測定對照組菌數(shù)計算平均值。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

薄膜過濾法：

 

對比結(jié)果顯示，對濾膜孔徑（不大于0.45μm）、直徑（一般50mm）、沖洗量調(diào)整、材質(zhì)影響、濾器濾膜滅菌和完整性、不同類型供試品過濾前處理、沖洗液用量和總量限制（每次100ml，總不超500ml，最多不超1000ml）、過濾后濾膜轉(zhuǎn)移到相應(yīng)培養(yǎng)基的要求（需氧菌用TSA，霉菌酵母用SDA）、培養(yǎng)和計數(shù)方法（同平皿法）、每張濾膜菌落數(shù)上限（不超100cfu）、每株試驗菌每種培養(yǎng)基至少一張濾膜、測定對照組菌數(shù)等要求和操作描述完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

MPN法：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本關(guān)于MPN法的適用范圍、操作步驟（連續(xù)稀釋級數(shù)至少3個，每級3份1ml接種TSB液體培養(yǎng)基）、對照組測定、必要時加入成分、培養(yǎng)條件（30-35℃不超過3天，逐日觀察）、結(jié)果難以判斷時的轉(zhuǎn)種方法、根據(jù)生長管數(shù)查表3最可能數(shù)等描述完全一致。表3（最可能數(shù)）內(nèi)容也一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

計數(shù)方法適用性試驗–結(jié)果判斷：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本對平皿法或薄膜過濾法適用性判定標準（試驗組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值與菌液對照組菌落數(shù)的比值在0.5-2范圍內(nèi)）和MPN法判定標準（試驗組菌數(shù)在菌液對照組菌數(shù)的95%置信限內(nèi)）一致。對回收試驗合格后進行供試品檢查的規(guī)定一致。對回收不達要求時選擇回收最接近要求的方法和試驗條件進行檢查的原則也一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

供試品檢查–檢驗量：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本對檢驗量的定義一致。一般檢驗量（10g或10ml，膜劑/貼劑100cm²）和抽樣數(shù)量（不少于2個最小包裝，大蜜丸不少于4丸，膜劑/貼劑不少于4片）的規(guī)定一致。對貴重藥品、微量包裝、活性物質(zhì)含量低的制劑以及樣品量有限或批產(chǎn)量極小的活性物質(zhì)等特殊情況的檢驗量規(guī)定，對比發(fā)現(xiàn)2025版截圖覆蓋的內(nèi)容與2020版文字完全一致。分析判斷：在對比范圍內(nèi)，本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

供試品檢查–供試品的檢查方法：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均規(guī)定按適用性試驗確認的方法測定需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)。指明了測定不同總數(shù)使用的培養(yǎng)基（需氧菌用TSA/TSB，霉菌酵母用SDA）。要求進行陰性對照試驗，要求無菌生長，如有菌生長需調(diào)查偏差。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

供試品檢查–平皿法（培養(yǎng)和計數(shù)，菌數(shù)報告規(guī)則）：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本對平皿法的培養(yǎng)條件（需氧菌30-35℃3-5天，霉菌酵母20-25℃5-7天）、觀察菌落生長、點計所有菌落、計算平均菌落數(shù)、按報告規(guī)則報告菌數(shù)、菌落蔓延平板不宜計數(shù)、同稀釋級兩個平板菌落數(shù)差異限制（平均不小于15時相差不超1倍）等要求完全一致。菌數(shù)報告規(guī)則（選擇合適的稀釋級、取兩位有效數(shù)字、無菌或低菌數(shù)的報告方式）也完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

供試品檢查–薄膜過濾法（制備、培養(yǎng)計數(shù)、報告）：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本對薄膜過濾法供試液制備、取樣量（相當于1g/ml/10cm²或適宜稀釋級）、過濾、沖洗、濾膜轉(zhuǎn)移到相應(yīng)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件和計數(shù)方法（同平皿法）、每張濾膜菌落數(shù)上限（不超100cfu）、菌數(shù)報告規(guī)則（無菌時的報告方式）等描述完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

供試品檢查–MPN法：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本對MPN法供試液制備、接種、培養(yǎng)條件（30-35℃3-5天）、確認生長方法、記錄生長管數(shù)、從表3查最可能數(shù)等描述完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

結(jié)果判斷（1105總則）：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本對需氧菌總數(shù)和霉菌酵母總數(shù)的定義（包含異類微生物菌落）、沙氏葡萄糖瓊脂上細菌影響計數(shù)時的處理方法（使用含抗生素或其他選擇性培養(yǎng)基）和選擇性培養(yǎng)基適用性檢查要求、MPN法測定結(jié)果、微生物限度標準的解釋（10¹cfu為20，10²cfu為200等）、合格判定的標準（總數(shù)均符合規(guī)定）等描述完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

稀釋液、沖洗液及培養(yǎng)基（1105引用）：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均指明參見通則1106的相關(guān)規(guī)定。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

3.2通則1106非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法

方法適用范圍和基本要求：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本對控制菌檢查法用于檢查特定微生物、適用于非無菌制劑及其原輔料、對檢出控制菌或其他致病菌按一次結(jié)果為準不再復(fù)試的規(guī)定一致（盡管2025版截圖未完全覆蓋此句，但基本原則未變）。供試液制備及實驗環(huán)境要求同1105的引用也一致。抗菌活性去除/中和和表面活性劑使用的注意事項也與1105中的要求一致。分析判斷：本部分內(nèi)容基本一致，無實質(zhì)性變化。

 

培養(yǎng)基適用性檢查和控制菌檢查方法適用性試驗：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均要求進行培養(yǎng)基適用性檢查和方法適用性試驗，并在程序或產(chǎn)品變化時重做。對培養(yǎng)基適用性檢查的項目（促生長、抑制、指示特性）、具體檢查方法（液體/固體培養(yǎng)基促生長、抑制、指示特性）和判定標準，以及所用菌株參見表1的要求完全一致。對方法適用性試驗的供試液制備引用、試驗菌選擇（包括耐膽鹽革蘭陰性菌的試驗菌）、具體操作步驟（直接接種或薄膜過濾加菌）、培養(yǎng)條件和判定標準（能檢出相應(yīng)反應(yīng)特征）也完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

菌種及菌液制備：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本對試驗用菌株傳代次數(shù)（不超過5代）和保存技術(shù)的要求一致，列出的控制菌試驗菌種清單（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌、白色念珠菌、生孢梭菌）一致。菌液制備方法（不同菌種的培養(yǎng)條件、稀釋液制備）和菌液保存時間/條件（室溫2小時內(nèi)，2-8℃24小時內(nèi)，生孢梭菌孢子懸液2-8℃驗證期內(nèi)）也完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

陰性對照（1106總則）：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本要求進行陰性對照試驗以確認試驗條件，應(yīng)無菌生長，如有菌生長需調(diào)查偏差。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

控制菌檢查方法適用性試驗–結(jié)果判斷：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本關(guān)于適用性試驗結(jié)果判斷的原則一致，檢出試驗菌則按此方法進行檢查，未檢出需消除抑菌活性后重試，抑菌無法消除時選擇抑菌消除相對徹底的方法進行檢查。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

供試品檢查（1106總則）：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本均規(guī)定按適用性試驗確認的方法進行檢查。陽性對照試驗（方法同供試品檢查，加菌量不超100cfu，應(yīng)檢出）和陰性對照試驗（稀釋劑代替供試液，應(yīng)無菌生長，有菌需調(diào)查）的要求、操作和判定標準完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

耐膽鹽革蘭陰性菌檢查：

 

對比結(jié)果顯示，供試液制備和預(yù)培養(yǎng)（稀釋劑、比例、培養(yǎng)溫度時間）、定性試驗（增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、劃線培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、無菌落判未檢出）、定量試驗（取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、劃線培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、結(jié)果判斷（根據(jù)平板生長判斷培養(yǎng)管陽性陰性，查表2最可能菌數(shù)）等所有步驟、條件和判斷標準完全一致。表2（MPN法最可能數(shù)）內(nèi)容也一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

大腸埃希菌檢查：

 

對比結(jié)果顯示，供試液制備和增菌培養(yǎng)（供試液制備引用、取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、選擇和分離培養(yǎng)（增菌培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移、選擇培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、選擇瓊脂平板、培養(yǎng)條件）、結(jié)果判斷（平板生長需鑒定確證，無生長或鑒定陰性判未檢出）等所有步驟、條件和判斷標準完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

沙門菌檢查：

 

對比結(jié)果顯示，供試液制備和增菌培養(yǎng)（取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、選擇和分離培養(yǎng)（增菌培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移、選擇培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、分離培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、沙門菌在分離培養(yǎng)基上的菌落特征、疑似菌鑒定方法如三糖鐵瓊脂）等所有步驟、條件和描述完全一致。結(jié)果判斷（根據(jù)分離培養(yǎng)和平板/三糖鐵瓊脂反應(yīng)判斷是否需鑒定或判未檢出）也完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

銅綠假單胞菌檢查：

 

對比結(jié)果顯示，供試液制備和增菌培養(yǎng)（引用1105、取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、選擇和分離培養(yǎng)（劃線培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、菌落鑒定方法如氧化酶試驗）、氧化酶試驗方法（操作步驟、陽性判斷）、結(jié)果判斷（平板生長且氧化酶陽性需鑒定，無生長或鑒定陰性或氧化酶陰性判未檢出）等所有步驟、條件和判斷標準完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

金黃色葡萄球菌檢查：

 

對比結(jié)果顯示，供試液制備和增菌培養(yǎng)（引用1105、取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、選擇和分離培養(yǎng)（劃線培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、結(jié)果判斷（特定菌落特征需鑒定，無特征或鑒定陰性判未檢出）等所有步驟、條件和判斷標準完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

梭菌檢查：

 

對比結(jié)果顯示，供試液制備和熱處理（引用1105、取樣量、熱處理條件）、增菌、選擇和分離培養(yǎng)（熱處理和未熱處理供試液接種增菌培養(yǎng)基、厭氧培養(yǎng)、涂抹接種哥倫比亞瓊脂、厭氧培養(yǎng)）、過氧化氫酶試驗（操作步驟、陽性判斷）、結(jié)果判斷（厭氧桿菌生長且過氧化氫酶陰性需鑒定，無生長或鑒定陰性或過氧化氫酶陽性判未檢出）等所有步驟、條件和判斷標準完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

白色念珠菌檢查：

 

對比結(jié)果顯示，供試液制備和增菌培養(yǎng)（引用1105、取樣量、增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件）、選擇和分離培養(yǎng)（劃線培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、典型菌落特征、鑒定方法如顯色培養(yǎng)基）、結(jié)果判斷（疑似菌生長且顯色培養(yǎng)基陽性需鑒定，無生長或鑒定陰性或顯色培養(yǎng)基陰性判未檢出）等所有步驟、條件和判斷標準完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

稀釋液：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本關(guān)于稀釋液的總則（配制后驗證滅菌）一致。列出的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、pH6.8/7.2/7.6無菌磷酸鹽緩沖液、0.9%無菌氯化鈉溶液的制備方法和引用通則一致，允許加入表面活性劑/中和劑的規(guī)定也一致。分析判斷：除了稀釋液列表的呈現(xiàn)方式調(diào)整（新增列出部分成分）外，允許使用的稀釋液種類和制備方法沒有改變，無實質(zhì)性變化。

 

培養(yǎng)基及其制備方法：

 

對比結(jié)果顯示，兩個版本關(guān)于培養(yǎng)基的總則（按處方制備或使用脫水培養(yǎng)基，配制后驗證滅菌）一致。列出的所有培養(yǎng)基（TSB,TSA,SDB,SDA,PDA,玫瑰紅鈉瓊脂,硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基,腸道菌增菌液體培養(yǎng)基,紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂,麥康凱液體培養(yǎng)基,麥康凱瓊脂,RV沙門菌增菌液體培養(yǎng)基,木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂,三糖鐵瓊脂,溴化十六烷基三甲銨瓊脂,梭菌增菌培養(yǎng)基,哥倫比亞瓊脂,念珠菌顯色培養(yǎng)基）的名稱、處方組成、各成分含量、詳細制備方法、pH要求、滅菌條件和注意事項等描述完全一致。分析判斷：本部分內(nèi)容一致，無實質(zhì)性變化。

 

4.總體結(jié)論

 

綜合以上對《中國藥典》2020年版通則1105《非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法》和通則1106《非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法》所有對比章節(jié)的分析，盡管在某些內(nèi)容呈現(xiàn)方式上存在微小調(diào)整，但這僅是信息組織結(jié)構(gòu)的優(yōu)化，并未改變實際方法。在其他所有核心的技術(shù)內(nèi)容，包括微生物計數(shù)和控制菌檢查的原理、樣品制備方法、培養(yǎng)基和稀釋液的種類及制備、試驗操作步驟、培養(yǎng)條件、判定標準、質(zhì)量控制要求等方面，兩個版本的內(nèi)容是高度一致的。

 

因此，基于對藥典原文的嚴格對比和對檢驗方法合理性的判斷，可以得出結(jié)論：《中國藥典》2020年版通則1105和1106與2025年版相應(yīng)通則相比，未發(fā)生實質(zhì)性變化。