Q：臭氧空間消毒，如果開(kāi)展生物指示劑挑戰(zhàn)，一般如何操作？

A：目前合適挑戰(zhàn)臭氧的我們微穹的生物指示劑是3次方的萎縮芽孢桿菌，但是臭氧要干掉3log難度太大，所以一部分用戶是除菌后，再做芽孢計(jì)數(shù)，看具體下降了幾個(gè)log。因?yàn)槌粞跸灸芰Ρ容^弱，尤其除芽孢的能力更弱，所以建議可以采用國(guó)標(biāo)GB28232-2020當(dāng)中的要求，挑戰(zhàn)白色葡萄球菌（8032）3個(gè)log值，就可符合臭氧消毒要求。

Q：一般空間消毒15ppm時(shí)用指示劑并不能完全殺滅，如何判斷殺滅情況？

A：如果是臭氧，那么不能完全殺滅，可以做除菌后的芽孢計(jì)數(shù)，看具體下降了幾個(gè)log，是否符合自身的除菌能力要求。

Q：nf的安全邊界如何理解？

A：化學(xué)藥品注射劑滅菌和無(wú)菌工藝研究驗(yàn)證指導(dǎo)原則-試行版當(dāng)中規(guī)定，“一般在滅菌驗(yàn)證時(shí)，要求滅菌后所有生物指示劑為陰性結(jié)果，則非無(wú)菌概率值NF實(shí)際能夠達(dá)到

10-1-10-2，甚至更低，為了增加滅菌保障的安全邊際，一般取NF=1，即lgNF=0”。

所以這里增加了滅菌安全邊際之后，最后求得的N0值會(huì)比較高，這樣將更高的N0值的生物指示劑滅過(guò)，更能說(shuō)明滅菌效果，這里的滅菌安全邊際指的是這層意義。

（但是就實(shí)際應(yīng)用來(lái)說(shuō)，我們認(rèn)為指導(dǎo)原則當(dāng)中的這句話，有失偏頗，暫時(shí)保留我們的意見(jiàn)，有需要再進(jìn)一步溝通。）

Q：D值會(huì)在儲(chǔ)存運(yùn)輸期間產(chǎn)生波動(dòng)么？

A：路上運(yùn)輸一般為2-3天，短時(shí)間內(nèi)對(duì)D值不會(huì)有影響。而在儲(chǔ)存期內(nèi)，隨著時(shí)間的推移，一個(gè)月，半年，甚至一年，D值會(huì)有下降的趨勢(shì)。在有效期內(nèi)，D值的波動(dòng)在我們的有效控制范圍內(nèi)。

Q：滅菌過(guò)程不能做到100%恒溫，那這樣是不是代表Z值都在變化？

A：Z值是多少，是跟購(gòu)買的該批次的生物指示劑直接相關(guān)，而跟溫度波動(dòng)無(wú)關(guān)。只是說(shuō)Z值的高低，會(huì)對(duì)不同的溫度下的該生物指示劑的D值有所影響。

具體的影響方式，參考如下的公式：DT=D121/10(T – 121) / Z。

Q：運(yùn)輸過(guò)程的溫度及其他因素會(huì)導(dǎo)致到貨的指示劑D值和說(shuō)明書標(biāo)示不一樣嗎？

A：運(yùn)輸過(guò)程短暫影響不明顯，儲(chǔ)存時(shí)的溫濕度對(duì)生物指示劑會(huì)產(chǎn)生影響，尤其是一些特殊的生物指示劑，比如過(guò)氧化氫生物指示劑，對(duì)儲(chǔ)存的溫度和濕度特別敏感，必須嚴(yán)格按照廠家規(guī)定的溫濕度下保存。

Q：產(chǎn)品和BI滅菌后，做BI滅菌效果評(píng)價(jià)，請(qǐng)問(wèn)BI滅菌后可以放多久，再做BI的培養(yǎng)？

A：USP55中有所規(guī)定，在4個(gè)小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基當(dāng)中做生物指示劑的培養(yǎng)。因?yàn)樯镏甘緞┍粶缇魬?zhàn)后，芽孢有可能是處于受損狀態(tài)，盡快轉(zhuǎn)移培養(yǎng)才能避免假陰性的風(fēng)險(xiǎn)。

Q：BI滅菌后可以放5天再去做BI培養(yǎng)嗎？滅菌后的BI需要放冰箱嗎？

A：不可以，按USP55中規(guī)定，要在4個(gè)小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)移培養(yǎng)。滅菌后的BI應(yīng)及時(shí)轉(zhuǎn)移培養(yǎng)，而不是再放回冰箱。

Q：BI已確定，對(duì)應(yīng)的BI的D值和N0初始菌數(shù)已定，那么在進(jìn)行F0＞Fbio判斷時(shí)，F(xiàn)bio計(jì)算中的NF如何確定？有10的0次方、-2次方、-6次方等。

A：首先理解NF的意義，代表的是殘存芽孢數(shù)或者非無(wú)菌概率值。如果一個(gè)BI滅菌結(jié)束后，是有殘存芽孢的，那么做殘存的芽孢計(jì)數(shù)，NF就是計(jì)數(shù)結(jié)果這個(gè)數(shù)值。當(dāng)然更多的應(yīng)用是NF看做非無(wú)菌概率值，所以只有多個(gè)BI被滅菌，同時(shí)有陰性又有陽(yáng)性，自然就可以知道非無(wú)菌概率值NF為多少

這里有一條非常實(shí)用的公式給到我們計(jì)算，NF=ln（n/r），ln為自然對(duì)數(shù)，n為BI的總數(shù)，r為被滅成陰性的BI數(shù)量。如題所問(wèn)，NF到底為100、10-2、還是10-6，這只是對(duì)BI被滅菌后非無(wú)菌概率值的預(yù)估，一般要保證BI被滅成陰性，那么NF取到10-2為宜。

Q： 實(shí)驗(yàn)室里BI除做孢子數(shù)計(jì)數(shù)，還需要純度和鑒定嗎？

A：建議除了做孢子計(jì)數(shù)復(fù)核外，可以看一下存活時(shí)間和殺滅時(shí)間，來(lái)間接核實(shí)一下D值的可靠程度。至于純度和菌種鑒定，我們作為生產(chǎn)廠家已經(jīng)做了此項(xiàng)工作，可以對(duì)我們微穹實(shí)驗(yàn)室做審計(jì)來(lái)確認(rèn)。如果另外再自己做這方面的復(fù)核，增加了自己的負(fù)擔(dān)，并不建議做。

Q：生物指示劑經(jīng)過(guò)過(guò)度殺滅法后觀察顏色，生物指示劑有點(diǎn)位未變色是什么原因？對(duì)應(yīng)點(diǎn)位的保溫時(shí)間及F0值合格。

A：如果指的是化學(xué)指示劑，過(guò)度殺滅后，化學(xué)指示劑有些未變色，這是用來(lái)評(píng)估溫度分布的均勻程度，對(duì)應(yīng)點(diǎn)位的F值都能達(dá)標(biāo)，而且溫度探頭已校準(zhǔn)過(guò)是沒(méi)問(wèn)題的，那么可以推斷化學(xué)指示劑本身有些難以變色，這里不深究。

如果問(wèn)的是生物指示劑，那么培養(yǎng)后未變色，代表的是生物指示劑挑戰(zhàn)滅菌為陰性，這是一個(gè)正常的現(xiàn)象。

Q：生物指示劑從冰箱拿出來(lái)保存時(shí)間有做過(guò)驗(yàn)證嗎，一般能保存多長(zhǎng)時(shí)間？

A：同類型的生物指示劑受溫度、濕度的影響也不同，我們僅僅做了在規(guī)定的保存條件下生物指示劑相應(yīng)的數(shù)據(jù)穩(wěn)定性的測(cè)試，如果脫離保存條件，不好評(píng)估能保存多久，需要長(zhǎng)時(shí)間的監(jiān)測(cè)來(lái)得出可靠的數(shù)據(jù)。

Q：BI滅菌后培養(yǎng)時(shí)，需要放置一支陽(yáng)性對(duì)照共同培養(yǎng)，有時(shí)不能一天內(nèi)全部做完，需要間隔1、2天，需要每次培養(yǎng)都要附帶陽(yáng)性對(duì)照嗎？

A：一般來(lái)說(shuō)同一批次的BI做一次陽(yáng)性監(jiān)測(cè)即可，陽(yáng)性對(duì)照的目的是說(shuō)明芽孢在該培養(yǎng)基當(dāng)中在規(guī)定的溫度下是可以生長(zhǎng)出來(lái)的。其他時(shí)間段做的驗(yàn)證也是同一批次的BI，可以不需要做陽(yáng)性對(duì)照。

Q：審評(píng)老師經(jīng)常會(huì)問(wèn)生物指示劑D值和孢子量應(yīng)符合滅菌驗(yàn)證指導(dǎo)原則，按指導(dǎo)原則 一般NF=1，此種情況下，BI滅菌后可否放冰箱后12h再培養(yǎng)？

A：BI滅菌后USP55中，要求是4個(gè)小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)移培養(yǎng)，所以并不建議放置12小時(shí)后再培養(yǎng)。（詳細(xì)解答可看第3問(wèn)）

Q：D值的測(cè)試責(zé)任屬于誰(shuí)？?jī)?nèi)部確認(rèn)時(shí)怎么從側(cè)面證明？除了存活時(shí)間殺滅時(shí)間的計(jì)算。

A：D值作為BI的一項(xiàng)重要質(zhì)量參數(shù)，按道理來(lái)說(shuō)，理應(yīng)要做復(fù)核，但是D值的檢測(cè)需要用到抗力儀，有條件的是可以進(jìn)行復(fù)核的，沒(méi)有條件目前也只能用存活時(shí)間和殺滅時(shí)間來(lái)做確認(rèn)，間接復(fù)核D值的準(zhǔn)確性，并沒(méi)有其他更好的方法。

Q：最大存活時(shí)間是否可以做為不同滅菌工藝（比如F0≥8）用生物指示劑的選擇依據(jù)？

A：根據(jù)不同的滅菌工藝選擇生物指示劑時(shí)，如何選取一個(gè)合理的D值的BI，應(yīng)該要根據(jù)該滅菌工藝一個(gè)滅菌循環(huán)下來(lái)最低點(diǎn)的累加物理F值來(lái)決定。最大存活時(shí)間可以拿來(lái)跟實(shí)際的物理F值做對(duì)比，可以大致看出我選擇的BI在該滅菌工藝條件下，被殺滅的可能性有多少。