提示 

本文針對不同分散系統，對仿制藥注射劑注冊申報時所需的非臨床研究內容進行介紹，并結合具體審評工作，對試驗設計時的重點關注點及共性問題進行探討，供藥品研發單位及注冊申請人參考。

仿制藥是各國臨床用藥的主體，在降低用藥負擔方面發揮重要作用。如果仿制藥與原研品的有效性和安全性存在顯著差異，可能會給臨床用藥帶來高風險。如何實現與原研產品的質量一致性，是仿制藥研發階段需要解決的重要問題。與其他劑型相比，注射劑因直接進入循環系統，其暴露量和絕對生物利用度較高，更需加強安全性風險控制。本文結合審評實際，針對現階段技術審評中對仿制藥注射劑非臨床安全性評價方面的要求進行全面分析，為研發人員提供參考。

1.仿制藥注射劑評價的基本原則

仿制境內外已上市的原研品，應當與被仿制制劑具有同樣的活性成分、給藥途徑、劑型、規格和相同的治療作用。已上市的原研品中，原料藥信息是公開的，但詳細的制劑處方、工藝和質量控制等方面的信息卻不易獲得。任何差異都有可能導致仿制藥出現安全性、有效性方面的風險，對于注射劑更是如此。因此，仿制藥注射劑的評價首先應關注與原研品物質基礎的一致性。在對仿制藥的審評中發現，部分國外仿制藥進口品種在他國上市時，已完成了與原研品的藥學質量比對和/或臨床生物等效性研究，可確認物質基礎一致性。但國內部分仿制藥由于原輔料質量、工藝流程及質量控制有差異，或者由于緩釋、靶向等特殊劑型，難以確認物質基礎一致性是否導致安全性和有效性的改變，需要進行非臨床評價進一步比對。

仿制藥的非臨床評價是通過正常動物或模型動物，對比仿制藥和原研品在安全性和有效性上的差異。試驗體系建立在嚴格執行《藥物非臨床研究質量管理規范》的基礎上，通過控制動物來源、飼養條件和操作規范等，降低動物自發病變的發生率，減少環境因素對試驗結果產生的影響，保證試驗的準確、穩定，提高非臨床試驗結果對臨床應用的預測程度。非臨床安全性評價有助于加強藥學質量控制，如處方組成、劑型選擇、雜質限度等，進而預測臨床用藥的安全性，探索風險產生原因、機制和控制措施，降低產品上市的安全性風險。

2.仿制藥注射劑的非臨床評價方法

注射劑按分散系統可分為溶液型、脂肪乳、混懸型、納米制劑等，新劑型隨臨床需求仍處于不斷開發中。注射劑的不良反應通常包括注射局部的刺激性以及由雜質、特殊輔料等引起的過敏反應等。此外，根據分散系統的不同，非溶液型的特殊制劑可能出現藥物分散、釋放、吸收和分布上的差異，如緩釋制劑與原研品在釋藥速度和程度上的不一致、靶向制劑與原研品在組織分布上的不一致等，導致臨床有效性和安全性出現問題。因此，非臨床研究應結合受試物自身特點進行合理設計，具體問題具體分析，綜合判斷是否需要展開進一步試驗對一致性進行確證，科學合理地進行評價。

下文將注射劑按分散系統分成溶液型注射劑和特殊注射劑，分別對仿制藥的非臨床研究要求進行綜合。

2.1溶液型注射劑

溶液型注射劑不涉及分散和釋藥等問題，非臨床研究主要需要觀察局部給藥后引起局部和/或全身毒性反應，即溶血性、刺激性、過敏性試驗，觀察臨床應用時可能出現的毒性反應、毒性靶器官和安全范圍，屬于注射劑的一般要求。

2.1.1溶血性試驗

注射劑直接進入血管、皮下或肌肉組織，可能引起免疫性溶血與非免疫性溶血。免疫性溶血是通過免疫反應產生抗體而引起的溶血，包括免疫球蛋白G(IgG)介導的Ⅱ型過敏反應以及IgG和免疫球蛋白M(IgM)介導的Ⅲ型過敏反應;非免疫性溶血包括藥源性的氧化性溶血以及血液穩態的改變而出現的溶血和紅細胞凝聚等。II型和III型過敏反應引起的溶血通常需要結合重復給藥毒性試驗中免疫病理改變綜合評價。仿制藥由于上市藥物研究信息已知，常規可僅采用肉眼觀察的體外試管法來檢驗受試物的溶血性。目前新技術如溶血率法可對溶血程度進行量化，并排除注射劑顏色等干擾，是非臨床安全性評價中的推薦方法。

2.1.2刺激性試驗

刺激性試驗主要觀察按照臨床擬用途徑給藥時，動物的血管、肌肉、皮膚等部位接觸制劑后是否引起紅腫、充血、滲出、變性或壞死等炎性病變，同時觀察動物的一般狀態、行為、體征等，進行局部與整體的綜合評價。受試藥物濃度不應低于臨床擬用最高濃度，給藥體積不應過小，同時注意給藥次數、速度等對試驗結果的影響。

肌肉刺激性試驗通常選擇兔、大鼠的股四頭肌作為給藥部位。采用同體左右側自身對比法，末次給藥后48～72h進行肉眼觀察和局部組織病理學檢查，通過刺激性反應分級評分，量化給藥局部肌肉組織的病變程度。

兔耳緣靜脈便于注射和觀察，因此通常選擇兔作為血管刺激性試驗對象。可采用同體左右側自身對比法。給藥時間一般不超過7d，可設置恢復期14～21d。對給藥局部及周圍相關部位的反應進行肉眼觀察和組織病理學檢查。通過刺激性反應評分，綜合判斷受試物的血管刺激性及刺激性反應的可逆性和延遲性。按照我國現行的相關指導原則，靜脈注射給藥途徑的注射劑若有藥液滲漏造成血管外組織刺激性的擔憂，可補充肌肉刺激性試驗。日本等國家則考察靜脈注射制劑對血管周的影響，在靜脈注射部位周圍皮下注射0.2mL藥液，觀察血管周刺激性反應。了解血管外刺激性反應的強弱及其恢復情況，可在藥物使用說明中，特別提示準確靜脈給藥的必要性，指導臨床安全用藥。

注射劑皮下、皮內等途徑給藥的刺激性試驗，應結合品種的具體情況和研究中發現的具體問題，采用合理的方法，以提供更有價值的試驗結果，提高試驗的臨床預測性。

2.1.3過敏性試驗

過敏性是注射劑最常見、最嚴重的不良反應。過敏性試驗觀察動物注射給藥后的全身或局部過敏反應。過敏反應分4型，包括由免疫球蛋白E(IgE)介導的速發型Ⅰ型、由IgG介導的細胞毒型或溶細胞型Ⅱ型、由IgG和IgM介導的免疫復合物型或血管炎型Ⅲ型以及由T淋巴細胞介導的遲發型或Ⅳ型。應根據藥物的特點、臨床適應證、給藥方式、發生機制和影響因素等，確定進行何種過敏性試驗。仿制化藥注射劑通常局部給藥后發揮全身作用，主要考察Ⅰ型過敏反應，包括全身過敏性反應試驗和被動皮膚過敏反應試驗，一般情況下僅進行主動全身過敏試驗。某些抗生素或含有特殊輔料的注射劑，視具體情況考慮是否增加其他過敏性試驗。

試驗動物的選擇上，主動全身過敏性試驗通常選豚鼠，而被動皮膚過敏試驗可選大鼠、小鼠和豚鼠。受試物給藥劑量應包括臨床擬用最大劑量或濃度，陰性對照組給予同體積的溶媒，陽性對照組給予合理的激發時間。

2.2特殊制劑

隨著藥物創新步伐的加快，新的注射用產品制劑不斷出現，如微乳、膠束、脂質體等。這些新劑型可能影響藥物的體內藥動學行為，如延長藥物與靶組織或細胞作用的時間，選擇性濃集于靶組織或器官等，以改善療效或減輕全身毒性。但同時，這些新劑型仿制藥易受處方和工藝的影響，活性成分的形態、粒徑等與原研品的微小差異常引起暴露量、組織分布、消除等方面的差異。因此，在特殊制劑申請仿制注冊時，非臨床研究應首先以藥動學對比研究為主線，觀察藥物釋放速度、釋放程度、組織分布、蓄積情況等是否改變，根據其結果確定后續研究項目、給藥方案等。藥動學對比研究可參考原研品已有的研究信息，選擇一種適當的動物(通常采用大動物如犬、猴)單次給藥，與原研品進行生物利用度/生物等效性試驗。藥動學參數包括藥物達峰時間(Tmax)、達峰濃度(Cmax)、血藥濃度-時間曲線下面積(AUC0－t，AUC0－∞)、半衰期(t1/2)等。在無可行的藥動學研究方法時(如無靈敏的血藥濃度檢測方法、濃度和效應之間不存在線性相關)，可以考慮用明確的可分級定量的藥效學指標，通過效應-時間曲線，與原研品進行比較。根據藥物作用特點，還應考慮組織分布、消除的比較研究(如脂質體、微球等在特定組織發揮特定作用等品種)，根據組織分布結果預測安全性上的變化、后續毒理研究的關注點等。藥動學參數的改變提示仿制藥與原研品在有效性和安全性上并不一致，后續應有針對性地進一步進行藥效學、毒理學的全面評價。例如，血藥濃度是否能維持在治療窗之內;暴露量的增加、半衰期的延長是否導致安全性的變化;骨髓分布的增加應在毒理試驗中關注對造血系統的影響等。在毒理學試驗中觀察到預期之外且對安全性評價有重要意義的組織病理學改變時，應考慮進一步進行多次給藥的藥動學試驗，分析毒性反應的藥動學依據，為臨床研究設計提供參考。

2.3共性問題

2.3.1仿制藥開發的必要性

質量一致、安全、有效是仿制注射劑的前提，并非所有上市注射劑都適宜作為被仿制的對象。首先，應充分了解原研品上市信息，如口服藥物已可滿足臨床需求，除特殊需要外，不宜再開發注射劑;肌內注射能夠滿足臨床需要，盡量不選擇靜脈給藥;大容量注射劑的質量控制無法達到粉針的標準，則不宜開發大容量注射劑。此外，仿制廠家多，或具有較高比例不良反應的品種，都應慎重開發。

2.3.2試驗樣品的選擇與暴露

應采用工藝相對穩定、純度和雜質含量能反映臨床試驗擬用樣品和/或上市樣品質量和安全性的試驗樣品，加強受試樣品的分析，保證受試樣品在試驗周期內的質量和配制準確性。同時，根據觀察指標和模型合理性確定適當的動物種屬和試驗體系，以最大程度暴露風險。

2.3.3陽性結果的處理

非臨床安全性評價如果出現陽性結果，首先應對試驗條件進行分析，結合給藥方案、試驗操作、不良反應的性質等多因素進行綜合評價，判斷是否因仿制藥與原研品質量上的不一致導致安全性問題。

給藥方案是安全性評價的關鍵，應兼顧受試物自身特點和臨床用藥情況綜合考慮。如麻醉、細胞毒類等制品，易感動物在臨床用法用量下可引起嚴重不良反應，干擾結果判定;丙泊酚中長鏈脂肪乳注射劑，在臨床擬用濃度或劑量條件下，采用最易產生抗體的給藥途徑腹腔注射給藥后，豚鼠出現麻醉、死亡等現象。因此，建議根據品種特點進行預試驗，調整試驗動物、給藥濃度、體積或給藥速度，篩選出最適合的給藥方案，充分暴露的同時兼顧結果判定。

試驗操作影響安全性評價的質量。試驗人員應密切關注試驗體系是否嚴格遵守《藥物非臨床研究質量管理規范》以及標準操作規程，充分考慮可能影響試驗結果判定的因素。《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則》中強調，化學藥物試驗過程中應進行受試樣品分析，即是充分考慮樣品質量穩定性對安全性評價的影響。

如果出現嚴重影響結果判定的情況，如給藥機械損傷導致嚴重后果，不能因與給藥操作有關就隨意刪減數據，應根據發生率和嚴重程度判斷是否需要再次進行規范試驗，盡量降低給藥操作影響。在闡明其研究方法或技術科學、合理的前提下進行的安全性試驗出現陽性結果時，首先應對結果進行甄別，結合藥物自身特點，區分是否為藥理作用、動物自發性病變或類過敏反應等。在排除上述因素后，應加入原研品對照組進行比較研究，以保證藥物臨床應用的安全有效性。結果出現與原研品不一致的安全性數據時，應結合仿制藥的藥學質控信息情況，重點關注雜質、輔料或理化性質等，對其合理性和必要性進行綜合、全面的評價。

2.3.4參比制劑的選擇

特殊制劑的藥動學比對試驗或溶液型注射劑的刺激性、溶血性和過敏性試驗在出現陽性結果時，需選擇原研品作為參比制劑，進行比較研究。原研品如尚未進口，在原研企業證明其地產化藥品與原研品的一致性后，也可以使用地產化藥品作為參比制劑。如果無法獲得原研品，則可采用在歐盟、美國、日本上市的已通過藥學質量比對和/或臨床生物等效性研究同品種仿制藥。

2.3.5豁免情況

目前，葡萄糖/氯化鈉注射液、甘露醇注射液等藥學質控簡單，申請仿制注冊時不需要提供溶血性、刺激性和過敏性試驗資料。

3.結語

仿制藥在原研品上市的基礎上進行開發，有利于降低用藥支出，節約醫療費用，在保障健康和推動中國醫療衛生事業發展中發揮重要作用。保證仿制藥的安全、有效、質量可控是臨床應用的前提。非臨床評價是仿制藥制劑水平評價過程中的一個重要環節，側面反映藥學質量一致性，同時為臨床研究和應用提供安全性信息。本文總結了仿制藥注射劑的非臨床評價相關內容及共性問題，但現有動物模型和試驗方法尚存在一定的局限性，無法完全提示臨床應用風險。因此，在評價仿制藥的安全有效性時，應具體問題具體分析，針對藥物的自身特點，結合藥學和原研品臨床信息進行評估。同時，鼓勵采用更靈敏的新技術新方法用于非臨床安全性評價，提高臨床預測性。