您當前的位置：檢測資訊 > 法規標準
嘉峪檢測網 2021-08-15 23:05
在新版 2020 年版藥典中， UHPLC 方法正式引入藥典、得到藥典認可。與 HPLC 方法相比，UHPLC 方法分析速度更快、運行成本更低、檢測結果更準確。
液相色譜具有強大的分離、定量能力，是制藥行業最為重要的分析檢測手段之一。然而，2010年版《中國藥典》之前的藥物分析方法基本都是HPLC方法，存在時間長、效率低的缺點。通常分析一個化藥品種至少需要半個小時，而中藥的分離時間往往超過一個小時。
2020年《中國藥典》中色譜柱范圍擴大，可以使用一些粒徑更小、內徑更細的色譜柱。這主要集中在高效液相色譜上，這些色譜柱可以產生更大的壓力，使制藥行業實驗人員可以得到更高的分離效率和分析效果。
這也就官宣 UHPLC 方法正式引入藥典、得到藥典認可。與 HPLC 方法相比，UHPLC 方法分析速度更快、運行成本更低、檢測結果更準確。
UHPLC 是以亞二微米小顆粒、超高柱效的填料為核心的技術。根據范德米特曲線，更小的填料顆粒具有更高的柱效、更快的最佳線速度以及更寬的最佳流速范圍。因此，使用小顆粒的色譜柱，可以得到更高質量的數據結果，并且可以通過提高流速來加快分析速度，而不會造成柱效的降低。另外，UHPLC 節省化學試劑的同時還減少了廢液處理量，大大降低了實驗室的運營成本。
超高效液相的理論基礎
那么，2020版《中華人民共和國藥典》四部HPLC與2015版《中華人民共和國藥典》四部HPLC有那些變化：
說明：
2015：表示2015版藥典的刪除或修改內容
2020：表示2020版藥典新增內容
2020版藥典四部0512
1. 對儀器的一般要求和色譜條件
1.1色譜柱
色譜柱內徑一般為3.92.1-4.6mm,
填充劑粒徑為32-lOμm
超高效液相色譜是適應小粒徑約（2μm）填充劑的耐超髙壓、小進樣量、低死體積積、高靈敏度檢測的高效液相色譜 。
溫度會影響分離效果，品種正文中未指明色譜柱溫度時系指室溫，應注意室溫變化的影響。為改善分離效果，可適提高色譜柱的溫度，但一般不宜超過60℃。
殘余硅羥基未封閉的硅膠色譜柱，流動相 PH 值一般應在2-8之間。烷基硅烷帶有立體側鏈保護，或殘余硅羥基巳 封閉的硅膠、聚合物復硅膠或聚合物色譜柱可耐受更廣泛PH值的流動相，可適合于PH值小2或大于8的流動相。
1.2檢測器
“電霧式檢測器”
1.3流動相
品種正文文項下規定的條件除填充劑種類、流動相組分~在該品種正文項 下注明。”
增加“流動相的洗脫方式”
1.4色譜參數調整
2. 系統適用性試驗
2.1色譜柱的理論數（n）
2.2分離度（R）
2.3靈敏度
建立方法時，可通過測定一系列不同度的供試品或對照品 溶液測定噪比。
2.4拖尾因子（T）
沿與此平行線交點的距離（如圖）。見下圖。
2.5重復性
用于評價色譜系統連續進樣時響應值的重 復性能。采用外標法時除另有規定外，通常取各品種項下的對照品溶液，連續進樣5次，除另有規定外，其峰面積測量值（或內標值或其矯正因子）的相對標準偏應不大于2.0%;采用內標法時，通常配制相80%、100%和120%的對照品視進樣溶液，加人規定量的內標溶液，配成3種不同度的溶液，分至少進樣2次，計算平均因子，其的濃度和/或體積、色譜峰響應和分析方法所能達到的精度水平等，對相對標準偏差應不2.0%的要求可適當放寬或收緊，放寬或收緊的范圍
以滿足品種項下檢測需要的精密度要求為準。
3. 測定法
3.1定性分析 全部為新增內容
3.1.1利用保留時間定性 新增內容
3.1.2利用光譜相似度定性 新增內容
3.1.3利用質譜檢測器提供的質譜信息定性 新增內容
3.2定量分析
3.2.1內標法
3.2.2外標法
3.2.3加校正因子的主成分自身對照法
3.2.4不加校正因子的主成分自身對照法
3.2.5面積歸一化法法
增加“如適用，也可使用其他方法如標準曲線法等，并在品種正文項下注明。”
4.多維液相色譜
“多維液相色譜技術”
從以上對比可以看出：
2020版藥典四部HPLC與2015版藥典四部HPLC調整力度之大，前所未有。
1、色譜柱內徑、充劑粒徑發生了改變，色譜柱內徑由3.9-4.6mm調整為2.1-4.6mm，充劑粒徑由3-l0μm為2-10μm；
2、色譜柱新增烷基硅烷帶有立體側鏈保護柱,這些改變擴大了色譜柱的選擇范圍，從事HPLC操作的都知道，色譜柱的類型決定了色譜柱的性質，色譜柱的的長度、粒徑影響分析時間分析效率；
3、在分析具體品種時，保留時間、溶質之間的分離情況、出峰順序等色譜柱的保留行為都可能出現較大的差異，根據當前技術水平調整色譜柱的內徑范圍及填充劑的粒徑范圍更有利于提高樣品的色譜分析質量。
對儀器的一般要求和色譜條件
1、增加“色譜參數調整”大段內容；
2、對固定相、填充劑粒徑柱長、流速、進樣體積、梯度洗脫程序、流動相比例、流動相緩沖鹽濃度、柱溫、PH值從等度洗脫和梯度洗脫兩個方面規定了參數調整范圍，但檢測波長不可調整；
3、樣品分析如進行色譜參數調整，系統適用性應符合要求；
4、應評估色譜參數調整對分離度和檢測結果的影響程度，根據評估結果對調整色譜參數后的方法進行確認；
5、如調整超出2020版藥典四部HPLC中規定的范圍，調整的方法應進行方法學驗證達到可接受水平后方可用于產品的檢驗。
檢測器增加“電霧式檢測器”
液相檢測器分為選擇性檢測器與通用檢測器，電霧檢測器是十幾年來出現的一種新型的檢測器，靈敏度高、檢測極限低，具有兼容性、重現性好的特點，將“電霧式檢測器”納入2020版藥典四部HPLC符合檢測器當前技術發展趨勢。
其他變化
1、流動相增加了“增加“流動相的洗脫方式”，包括等度洗脫、梯度洗脫其他變化。
2、定量分析前新添加了“定性分析方法”如利用保留時間定性、利用光譜相似度定性、利用質譜檢測器提供的質譜信息定性。利用保留時間定性，該方法2015版藥典對于具體品種進行鑒別時應用了該方法，只是未列入HPLC內容，這次列入到HPLC通則。
3、一種新型分離技術“多維液相色譜”列入2020版藥典四部HPLC定量分析，對于復雜性樣品分析的相對于現在使用一維色譜的，拓寬了樣品的分離空間，提高了HPLC系統的分離能力。
2020版藥典四部HPLC與2015版藥典四部HPLC調整力度大,反映了當前國內HPLC檢測技術發展現狀又與國際檢測技術更加協調。
1. 對儀器的一般要求和色譜條件
1.1色譜柱
色譜柱內徑一般為3.92.1-4.6mm,
填充劑粒徑為32-lOμm
超高效液相色譜是適應小粒徑約（2μm）填充劑的耐超髙壓、小進樣量、低死體積積、高靈敏度檢測的高效液相色譜 。
溫度會影響分離效果，品種正文中未指明色譜柱溫度時系指室溫，應注意室溫變化的影響。為改善分離效果，可適提高色譜柱的溫度，但一般不宜超過60℃。
來源：Internet
