1、培養(yǎng)基的滅菌及使用

1.每次配置時(shí)，要注意其生產(chǎn)日期是否在保質(zhì)期內(nèi)，查看其開(kāi)瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質(zhì)，并且未吸潮。

2.培養(yǎng)基配置時(shí)，稱量要準(zhǔn)確，包括鹽水的分裝要準(zhǔn)確。

3.一定要保證現(xiàn)配制現(xiàn)滅菌，未滅菌的配好的培養(yǎng)基不能長(zhǎng)時(shí)間放置，更不可隔夜。

4.滅菌時(shí)要保證恒溫、恒壓，同時(shí)要保證有效滅菌時(shí)間。

5.滅菌過(guò)的培養(yǎng)基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過(guò)3天。而且要遵循“先入先出”原則，先配制的要先使用。

6.在使用時(shí)，要根據(jù)當(dāng)日班次的使用量，用水浴鍋先將培養(yǎng)基融化為液態(tài)，然后及時(shí)調(diào)低水浴溫度（先化好的可從水浴取出，放在水浴鍋鍋蓋上）待用，千萬(wàn)不可長(zhǎng)時(shí)間使培養(yǎng)基處于高溫狀態(tài)。

7.做產(chǎn)品微生物檢測(cè)時(shí)，傾倒培養(yǎng)基溫度在45℃左右，不可過(guò)燙，避免將菌燙死；也不可過(guò)涼，化好的培養(yǎng)基又結(jié)塊凝固，不便于觀察結(jié)果。

8.每瓶培養(yǎng)基均要做空白。

9.盡量集中做樣，避免頻繁打開(kāi)同一瓶培養(yǎng)基瓶塞，增大培養(yǎng)基的污染幾率，出現(xiàn)誤差結(jié)果。

10.培養(yǎng)基剩余過(guò)少時(shí)，可先將其傾倒成空白用板。

2、做樣環(huán)境的維持

一、大環(huán)境（房間）

1.做樣時(shí)，窗戶和空調(diào)要關(guān)閉，或用酒精對(duì)房間進(jìn)行噴霧消毒，避免房間內(nèi)空氣流通影響超凈臺(tái)內(nèi)部環(huán)境（最好在有通排風(fēng)系統(tǒng)的恒溫恒濕無(wú)菌間進(jìn)行操作）。

2.如果在原來(lái)的原料微生物檢測(cè)室進(jìn)行做樣，要定期開(kāi)啟紫外燈，對(duì)房間進(jìn)行殺菌。

二、小環(huán)境（超凈臺(tái)）

1.定期清潔初效過(guò)濾器，要及時(shí)更換。

2.做樣前，將超凈臺(tái)內(nèi)部進(jìn)行清潔，用75%酒精進(jìn)行擦拭消毒，并提前半小時(shí)將超凈臺(tái)紫外燈打開(kāi)，對(duì)超凈臺(tái)內(nèi)部環(huán)境進(jìn)行殺菌。

3.關(guān)紫外燈，開(kāi)風(fēng)機(jī)，調(diào)整合適進(jìn)風(fēng)量，風(fēng)量不可過(guò)低。

4.每次做樣后，要對(duì)超凈臺(tái)內(nèi)部進(jìn)行清理、清潔，并用75%酒精進(jìn)行擦拭消毒。

5.紫外燈根據(jù)其使用壽命要及時(shí)更換。

6.做樣同時(shí)，要做上相應(yīng)菌落檢測(cè)的環(huán)境空白。

7.做樣區(qū)域的選擇：

①一般在距離超凈臺(tái)外沿的 1/3-2/3 區(qū)域進(jìn)行無(wú)菌操作；

②要在酒精燈火焰的外焰保護(hù)區(qū)域進(jìn)行操作。

3、工器具的潔凈度

1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌。

2.做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣專用，不可與其它操作器具混用，使用時(shí)，先用75%酒精消毒，再采用灼燒方式進(jìn)行滅菌。

3.接種針（環(huán)）采用灼燒方式進(jìn)行滅菌，但要注意做樣時(shí)要先將接種針（環(huán)）進(jìn)行冷卻。

4、樣品的采集及檢測(cè)

一、保證采樣器具的無(wú)菌性

1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌，保證恒溫、時(shí)間足夠（但不可時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致玻璃器皿易裂紋而報(bào)廢）。

2.取樣筐：使用前要用75%酒精進(jìn)行噴灑消毒。

3.取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用75%酒精進(jìn)行擦拭消毒。

4.取樣袋：可先用酒精進(jìn)行擦拭消毒，再在超凈臺(tái)用紫外燈照射消毒（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。

5.電子稱表面用75%酒精消毒。

二、人員操作

1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。

2.取樣要具有代表性（隨機(jī)性、目的性、綜合性）且要標(biāo)示清楚。

3.取樣完畢，不可在車間逗留，要及時(shí)將樣品放入超凈臺(tái)，對(duì)其外表面進(jìn)行紫外燈照射消毒。

4.在要求的做樣區(qū)域進(jìn)行操作。

5.做樣前，要用75%酒精棉球?qū)悠反谶M(jìn)行擦拭消毒，再開(kāi)口。

6.往瓶中加樣品時(shí)，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

7.樣品計(jì)量要準(zhǔn)確，稀釋倍數(shù)也要準(zhǔn)確，進(jìn)行100倍稀釋時(shí)，1mL吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品管壁流下去，同時(shí)要避免將管底部捅破。

8.鹽水溫度以40℃左右為宜，不能過(guò)熱，將部分微生物燙死，也不能溫度太低，不能將奶粉溶解完全。

9.進(jìn)行稀釋時(shí)，要搖勻，保證溶液的均一性。

10.傾倒平皿時(shí)，要注意培養(yǎng)基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養(yǎng)基要適量，不可以太少，在培養(yǎng)過(guò)程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。

11.做大腸菌群樣時(shí)，要提前將乳糖膽鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)管按需要量備好，放入超凈臺(tái)對(duì)外表面進(jìn)行紫外線滅菌。

12.接二步時(shí)，要注意先將接種針（環(huán)）進(jìn)行冷卻，避免出現(xiàn)接不上菌落的情況發(fā)生，導(dǎo)致無(wú)法判斷、確認(rèn)。

13.做樣完畢，及時(shí)放入相應(yīng)培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，并清理清潔超凈臺(tái)。

5、微生物的培養(yǎng)

1.在培養(yǎng)過(guò)程中，要隨時(shí)監(jiān)控培養(yǎng)箱溫度，保證其在適宜的溫度進(jìn)行培養(yǎng)。

2.要按照《微生物檢驗(yàn)規(guī)范》要求及時(shí)觀察結(jié)果，出現(xiàn)異常，要及時(shí)分析原因進(jìn)行反饋。