培養(yǎng)和計數(shù)

（1）取上述經熱激活處理的芽孢懸液，用滅菌純化水進行10倍系列稀釋，采用傾注法或涂布法進行芽孢計數(shù)。
（2）傾注法即取芽孢數(shù)在30～300cfu/ml稀釋級的芽孢懸液1ml，置直徑90mm的無菌平皿中，注入15～20ml溫度不超過45℃融化的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。
（3）涂布法即取適量（通常15～20ml）溫度不超過45℃的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，注入直徑90mm的無菌平皿，凝固，制成平板，采用適宜的方法使培養(yǎng)基表面干燥，每一平皿表面接種芽孢數(shù)30～300cfu（接種量不少于0.1ml）。
（4）每稀釋級至少制備2個平板。
（5）按照表1推薦的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間培養(yǎng)。
（6）逐日點計和記錄各平板的菌落數(shù)，并計算每個最小單位生物指示劑的平均芽孢數(shù)。

表1　生物指示劑的芽孢計數(shù)的試驗條件*

*芽孢計數(shù)亦可按照經驗證的試驗條件進行。

結果判定　　

D值測定儀器

（1）用于不同滅菌方法生物指示劑的D值測定一般采用不同的儀器或程序。
（2）濕熱滅菌用生物指示劑的D值測定常用的設備有兩種，一種是抗力儀（能夠實現(xiàn)短時升溫和降溫的滅菌器），該設備適用于紙片式、自含式、芽孢懸液形式等的生物指示劑。
（3）另一種是油浴儀（能夠設定到100℃以上的恒溫設備），該設備適用于芽孢懸液生物指示劑。
（4）為保證測定結果的準確性，抗力儀的各項參數(shù)應滿足GB/T24628《醫(yī)療保健產品滅菌　生物與化學指示劑　測試設備》的要求。