醫療器械生物學評價第10部分中刺激試驗由體外刺激試驗、體內刺激試驗、動物刺激試驗、動物皮內反應試驗、人體皮膚刺激試驗幾個部分組成。

 體外試驗包括大鼠皮膚經皮電阻抗試驗和人體皮膚模型試驗，該方法已被國際間確認并接受為評價化學物皮膚腐蝕性的替代試驗方法，目前體外皮膚刺激試驗僅確認用于純化學物，不適用于醫療器械浸提液。

 醫療器械的刺激試驗可用最終產品或浸提液進行，影響試驗結果的因素包括：器械用于斑貼試驗時的特性；試驗材料的劑量；試驗材料的應用方法；封閉的程度；應用部位；接觸周期和接觸次數；評價試驗所采用的技術。試驗樣品的pH如≤2.0或≥11.5認為是一種刺激物，不必進一步試驗，然而試驗結果的酸堿度并不是導致嚴重損傷的唯一因素，試驗材料的濃度、接觸時間以及其他理化性能也都是重要的因素。

試驗原理：采用相關動物模型對材料在試驗條件下產生皮膚刺激反應的潛能做出評定。

• 粉劑或液體樣品：將0.5g或0.5ml的試驗材料直接置于下圖皮膚部位。用2.5cm*2.5cm非封閉式的敷料覆蓋接觸部位，然后用繃帶固定敷貼片至少4h。接觸期結束后取下敷貼片，用持久性墨水對接觸部位進行標記。

   

• 浸提液和浸提介質：將浸提液滴到2.5cm*2.5cm大小的吸水性紗布塊上，液體的用量以能浸透紗布塊為宜，一般每塊紗布滴0.5ml。按圖所示部位敷貼于動物背部兩側，將滴有浸提介質的紗布塊敷貼在對照部位。用繃帶覆蓋敷貼部位至少4h，接觸期結束后取下敷貼片，用持久性墨水對接觸部位進行標記，并除去殘留試驗材料。

   

• 固體樣品：將試驗材料樣品直接接觸兔脊柱兩側的皮膚。檢測固體物時，用水或替代溶劑將試驗材料充分濕化，用2.5cm*2.5cm的非封閉性敷料覆蓋材料接觸部位，然后繃帶固定敷貼片至少4h。接觸期結束后取下敷貼片，用持久性墨水對接觸部位進行標記，并除去殘留試驗材料。

1頭部；2—試驗部位；3—對照部位；4—去毛的背部區域；5—尾部。

圖1皮膚應用部位

1）單次接觸試驗時，分別在除去敷貼片后（1±0.1）h，（24±2）h，（48±2）h和（72±2）h記錄各個接觸部位情況。如存在持久性損傷則有必要延長觀察時間，評價這種損傷的可逆性或不可逆性，但不超過14天。

2）重復接觸試驗在急性單次接觸試驗完成后進行，至少在觀察（72±2）h后。重復接觸試驗，每次在除去敷貼片后（1±0.1）h以及再次接觸前，記錄接觸部位情況，接觸次數不限。

末次接觸后，分別在除去敷貼片后（1±0.1）h，（24±2）h，（48±2）h和（72±2）h記錄各個接觸部位情況。如有持久性損傷則有必要延長觀察時間，評價這種損傷的可逆性或不可逆性，但不超過14天。

表1皮膚反應記分系統表

單次接觸試驗用原發性刺激指數（PII）表示，僅使用（24±2）h，（48±2）h和（72±2）h的觀察數據進行計算，試驗之前或72h后的恢復觀察數據不用于計算。

將每只動物試驗樣品和空白在（24±2）h，（48±2）h和（72±2）h引起的記分相加，記分之和除以6，計算出某一動物的PII。

將每只動物全部原發性刺激記分相加后再除以動物總數（一般是3），得出試驗樣品原發性刺激指數。

當采用空白或陰性對照時，計算出對照原發性刺激記分，將試驗材料原發性刺激記分減去該記分，即得出原發性刺激記分。

重復接觸試驗考慮全部評價終點，計算累積刺激指數。按照上述方法計算每只動物原發性刺激記分，將全部動物刺激記分相加后再除以動物總數，該值即是累計刺激指數，累計刺激指數對照表2的刺激反應，報告相應的反應類型。

表2兔原發性或累積刺激指數類型

 簡介：用作植入物的醫療器械采用皮內反應試驗，通過皮內注射材料浸提液，對材料在試驗條件下產生刺激反應的潛能做出評定。

試驗樣品：試驗樣品按照標準規定的方法制備成浸提液，將幾種試驗樣品與適宜的陰性對照或空白液一起應用。

動物管理:健康、初成年的白化兔，雌雄不限，同一品系，體重不低于2kg，評價試驗材料初試至少采用3只動物。

試驗步驟：試驗前4h～18h，徹底除去動物背部脊柱兩側足夠面積的被毛，以備注射浸提液。

在每只兔脊柱一側的5個點皮內注射0.2mL的浸提液，在兔脊柱的另一側注射相應的溶劑對照液，如下圖2所示。

1—頭部；2—0.2mL極性浸提液注射點；3—0.2mL非極性浸提液注射點；4—0.2mL極性溶劑對照液注射點；5—0.2mL非極性溶劑對照液注射點；6—尾部。

圖2注射點排列

動物觀察：注射后即刻并在（24±2）h，（48±2）h和（72±2）h觀察記錄各注射部位狀況。按照表3給出的記分系統對每一觀察期各注射部位的紅斑和水腫的組織反應評分。

表3皮內反應記分系統表

結果評價:在（72±2）h評分后，分別將每只動物試驗樣品或空白對照的（24±2）h，（48±2）h和（72±2）h的全部紅斑和水腫記分相加，再除以15，計算出每只動物試驗樣品或空白對照的記分。3只動物記分相加除以3得出每一試驗樣品和相應空白對照的總平均記分。試驗樣品記分減去空白對照可得出試驗樣品最終記分。如試驗樣品最終記分≤1.0，符合試驗要求。

 Q：在進行刺激項目測試的時候，大致需要多少樣品量？

A:對于外觀規則類的產品，大致需要60cm2面積的產品；對于不規則的產品，則需要至少4g的樣品來進行測試。

Q：在進行醫療器械生物學評價測試時，皮膚刺激和皮內反應試驗是否都需要進行測試？

A:不需要，兩個刺激試驗二選一即可，通常臨床預期和破損皮膚接觸的醫療器械選擇做皮內反應，和完整皮膚接觸的醫療器械做皮膚刺激。

Q：皮膚刺激以及皮內反應測試結果顯示有刺激性，該如何應對？

A：需要從兩方面來應對，一方面可采用生物相容性表現優良的材料代替，另一方面可據產品臨床使用的風險收益比，評價用該材料的適用性。