2025年版《中國藥典》將于2025年10月1日起施行。

1101無菌檢查法標準更新

《中華人民共和國藥典》2025年版即將實施，針對四部通則1101無菌檢查法，新版藥典在培養基質控、菌種選擇、供試品培養要求、陽性對照規范等環節，進行了調整。對兩版藥典進行比對、分析和總結，有關無菌檢查法關鍵性變化內容匯總如下：

適用范圍

無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、醫療器械、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規定，僅表明了供試品在該檢驗條件下未發現微生物污染。

分析:本部分刪除生物制品的描述，變更適用范圍。

試驗環境要求

無菌檢查應在無菌條件下進行，試驗環境必須達到無菌檢查的要求，檢驗全過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區域、工作臺面及受控環境應定期確認。隔離系統應定期按相關的要求進行驗證，其內部環境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗需對試驗環境進行監測與控制。

分析:刪除了按國家標準進行試驗環境潔凈度確認的描述。

培養基的制備及培養條件

培養基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產的符合規定的脫水培養基或商品化的預制培養基。配制后應采用驗證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養基若不即時使用，應置于無菌密閉容器中，在2～25℃環境下保存，并在經驗證的保存期內使用。

分析:刪除了培養基避光保存的要求；調整了硫乙醇酸鹽培養基及胰酪大豆胨液體培養基的配置方式。

培養基的適用性及無菌性檢查

每批無菌檢查用硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪大豆胨液體培養基等應符合培養基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進行。每批隨機取部分培養基，置各培養基規定的溫度培養14天，應無菌生長。

分析:增加培養基適用性檢查的批次要求；調整了培養基無菌檢查的數量，原來隨機取不少于5支(瓶)做無菌性檢查修改為每批隨機取部分培養基進行檢查。

菌種及菌液制備

菌株及菌液制備同培養基靈敏度檢查。對大腸埃希菌敏感的抗生素類產品應選用大腸埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B）44 102〕代替銅綠假單胞菌，菌液制備同金黃色葡萄球菌。

分析:增加了對于抗生素類產品選用大腸埃希菌的描述。

方法適用性試驗-薄膜過濾法

按供試品的無菌檢查要求，取每種培養基規定接種的供試品總量，采用薄膜過濾法過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入不大于100cfu的試驗菌，過濾。加培養基至濾筒內，接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌/大腸埃希菌、生孢梭菌的濾筒內加硫乙醇酸鹽流體培養基；接種枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉的濾筒內加胰酪大豆胨液體培養基。另取一裝有同體積培養基的容器，加入等量試驗菌，作為對照。置規定溫度培養，培養時間不得超過5天。

分析:舊版采用大腸埃希菌進行方法適用性試驗，新版增加替代菌種銅綠假單胞菌。

方法適用性試驗-直接接種法

取符合直接接種法培養基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養基6管，分別接入不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌/大腸埃希菌、生孢梭菌各2管；取符合直接接種法培養基用量要求的胰酪大豆胨液體培養基6管，分別接入不大于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管按供試品的無菌檢查要求，接入每管培養基規定的供試品接種量，另1管作為對照，置規定的溫度培養，培養時間不得超過5天。

分析:舊版采用大腸埃希菌進行方法適用性試驗，新版增加替代菌種銅綠假單胞菌。

供試品的無菌檢查-檢驗數量

是指一次試驗所用供試品最小包裝容器的數量，成品每亞批均應進行無菌檢查。除另有規定外，批出廠產品及生物制品的原料和半成品最少檢驗數量按表1規定；上市產品監督檢驗按表2規定。

分析:刪除了最少檢驗數量不包括陽性對照試驗的供試品用量的描述。

供試品的無菌檢查-陰性對照

供試品無菌檢查時，應取相應溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。實驗室應基于質量風險管理的要求，根據產品特性、方法適用性試驗結果、人員技能與經驗、數據可靠性、污染控制措施和實驗室質量控制水平等因素，綜合評估確定日常檢驗過程中陽性對照試驗的必要性、頻次及其他要求。陽性對照試驗方法同供試品檢查，加菌量不大于100cfu，陽性對照管培養不得超過5天，應生長良好。

分析:增加了通過綜合性評估確定陽性對照試驗開展的必要性。

供試品的無菌檢查-薄膜過濾法

根據供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質。應充分考慮供試品的親水性、疏水性及其他產品特性（如抗生素）的影響。無菌檢查用的濾膜孔徑應不大于0.45μm。濾膜直徑約為50mm，若使用其他尺寸的濾膜，應對稀釋液和沖洗液體積進行調整，并重新驗證。使用時，應保證濾膜在過濾前后的完整性及過濾系統的無菌性。為發揮濾膜的最大過濾效率，應注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。

分析:增加濾膜需要根據供試品特性進行選擇的要求。

供試品的無菌檢查-直接接種法

直接接種法適用于無法用薄膜過濾法進行無菌檢查的供試品，即取規定量供試品分別等量接種至硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪大豆胨液體培養基中。無菌檢查時兩種培養基接種的瓶或支數相等；除另有規定外，每個容器中培養基的用量應符合接種的供試品體積不得大于培養基體積的10%。

當需要檢測大體積樣品時，基于其后續稀釋作用而制備的濃縮培養基更為適用。適用時，濃縮培養基可直接加入產品所在容器中。供試品檢查時，培養基的用量和高度同方法適用性試驗。

分析:刪除了硫乙醇酸鹽流體培養基每管裝量不少于15ml，胰酪大豆胨液體培養基每管裝量不少于10ml等對培養基裝量的要求；增加大體積樣品基于其后續稀釋作用選擇濃縮培養基表述。

供試品的無菌檢查-培養、觀察及結果判斷

將上述接種供試品后的培養基容器分別按各培養基規定的溫度培養不少于14天。對于含油性物質的培養基，每日輕微振搖，但當硫乙醇酸鹽流體培養基用于檢測厭氧微生物時，應盡量減少搖晃或混合，以保持厭氧條件。

分析:刪除了生物制品相關的培養要求；增加了含油物質培養在非厭氧條件下需每日輕微振搖的觀察要求。