引言

微生物鑒定是指借助現(xiàn)有的分類系統(tǒng)，通過對(duì)未知微生物的特征測(cè)定，對(duì)其進(jìn)行細(xì)菌、酵母菌和霉菌大類的區(qū)分，或?qū)佟⒎N及菌株水平確定的過程。

通過微生物鑒定建立環(huán)境污染菌、供試品檢出菌的微生物數(shù)據(jù)庫，可用于制定潔凈室/區(qū)消毒滅菌程序、供試品檢出菌相關(guān)性分析、污染溯源、以及確定是否重試的重要判定依據(jù)等，對(duì)保證產(chǎn)品質(zhì)量和無菌檢查結(jié)果的可靠性具有重要意義。

微生物鑒定的基本程序包括分離純化和鑒定。鑒定時(shí)，一般先將待檢菌進(jìn)行初步的分類。鑒定的方法有表型微生物鑒定和基因型微生物鑒定，根據(jù)所需達(dá)到的鑒定水平選擇鑒定方法。

表型微生物鑒定

表型微生物鑒定依據(jù)表型特征的表達(dá)來區(qū)分不同微生物間的差異，是經(jīng)典的微生物分類鑒定法，以微生物細(xì)胞的形態(tài)和習(xí)性表型為主要指標(biāo)，通過比較微生物的菌落形態(tài)、理化特征和特征化學(xué)成分與典型微生物的差異進(jìn)行鑒別。

微生物分類中常用的表型特征見下表：

      表型微生物鑒定通常需要大量的純培養(yǎng)物，而微生物的恢復(fù)、增殖和鑒定易受培養(yǎng)時(shí)間影響，事實(shí)上許多環(huán)境微生物在普通的微生物增殖培養(yǎng)基中是無法恢復(fù)的，此外，—些從初始培養(yǎng)物中剛分離出的受損微生物還可能不能完整地表達(dá)其表型屬性。因此，在表型鑒定時(shí)應(yīng)注意采用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間和傳代次數(shù)對(duì)鑒定結(jié)果的影響。

基因型微生物鑒定

      與表型特征不同，微生物基因型通常不受生長(zhǎng)培養(yǎng)基或分離物活性的影響，只需分離到純菌落便可用于分析。由于大部分微生物物種中核酸序列是高度保守的，所以基因型微生物鑒定方法理論上更值得信賴。基因鑒定法通常在無菌檢查試驗(yàn)結(jié)果陽性、非無菌藥品控制菌檢查中疑似菌的鑒定、環(huán)境監(jiān)控異常、偏差調(diào)查、培養(yǎng)基模擬灌裝失敗等微生物偏差調(diào)查中使用。 

      目前《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》中對(duì)細(xì)菌分類的描述是通過遺傳物質(zhì)的分析比較來實(shí)現(xiàn)的。系統(tǒng)發(fā)育典型的分析方法通過比較細(xì)菌16S rRNA基因、真菌18S rRNA基因、ITS 區(qū)域堿基序列來實(shí)現(xiàn)，然后與經(jīng)驗(yàn)證過的專用數(shù)據(jù)庫或利用公共數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)。

      同一地點(diǎn)的同種菌，其表型特征和基因型特征是基本一致的。不同地點(diǎn)的同種菌，表型特征可能基本一致，但保守及可變區(qū)域的基因特征會(huì)有一定的差異性。因此，污染調(diào)查等應(yīng)以基因型特征鑒定為主，表型特征鑒定為輔。

      基因型微生物鑒定在醫(yī)藥產(chǎn)品的生產(chǎn)過程微生物污染控制中的作用越來越重要，為規(guī)范和指導(dǎo)醫(yī)藥生產(chǎn)和檢驗(yàn)過程中的微生物鑒定工作，《中國藥典》2020年版新增訂3個(gè)基因型微生物鑒定相關(guān)通則：通則1021《細(xì)菌DNA特征序列鑒定法》、通則9108《DNA測(cè)序技術(shù)指導(dǎo)原則》、通則9109《標(biāo)準(zhǔn)核酸序列建立指導(dǎo)原則》。

出于建立、維護(hù)成本及技術(shù)難度的考慮，很少有企業(yè)實(shí)驗(yàn)室在內(nèi)部配置基因型檢測(cè)系統(tǒng)，當(dāng)出現(xiàn)微生物鑒定需求時(shí)，通常會(huì)考慮選擇合格供應(yīng)商。

藥明康德醫(yī)療器械測(cè)試中心擁有全球領(lǐng)先的基因型微生物快速鑒定系統(tǒng)，具有以下特點(diǎn)：

準(zhǔn)確：基因型鑒定方法，滿足各國藥典要求。

快速：得到細(xì)菌/真菌的單菌落后，5小時(shí)輕松完成鑒定，檢測(cè)通量大。

方便：廣泛驗(yàn)證的細(xì)菌和真菌數(shù)據(jù)庫，已購買數(shù)據(jù)庫中包含2100種細(xì)菌和1114種真菌的序列信息。

合規(guī)：完成符合ICH和21CFR part 11要求的IQ/OQ/CSV驗(yàn)證。