Q1、菌種如何管理？

答：菌種如何管理——首先微生物實驗室要制定菌種管理規程和操作流程，包含：（1）目的；（2）范圍；（3）職責（采購入庫記錄、支出領取記錄）、使用記錄（復蘇、傳代、接種、保藏、使用、銷毀等記錄）和（4）檢測人員及批準人員。

Q2、防護服的無菌檢驗？無菌方法適用性試驗？

答：防護服的無菌檢驗方法：按2020版《中國藥典》中直接接種方法按表2取規定檢驗數量，再按《中國藥典》1101中表3中的第三例醫療器械外科敷料規定量要求。取規定數量供試品，無菌操作，打開每個供試品剪去產品代表性部分，取最少檢驗規定量約1*3cm大小，分別等量接種FTM和TSB兩種培養基：培養、觀察、結果判定。

無菌方法適用性試驗：主要是對照組與含供試品的試驗菌均生長良好，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計。目的：確認方法是否適合該產品在該條件下的無菌檢查。

Q3、黑曲霉的制備與保存？

答：黑曲霉的制備：將黑曲霉的孢子新鮮培養物用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液進行10倍遞增梯度稀釋，選擇至少3個適宜稀釋劑進行傾注或涂布至沙氏葡萄糖瓊脂培養基上，20℃～25℃培養5～7天，進行計數。制成規定的小于100cfu的孢子懸液。孢子懸液置于4～8℃冰箱冷藏保存，可在驗證過的儲存期內使用，也可將孢子懸液采用甘油1:1等體積混合于離心管中，于-20℃冰箱內保存；可在1年內使用。

Q4、車間微生物和無菌室分別做什么？

答：分別都要做車間的微生物室和無菌室環境潔凈度監測參數是否在合格范圍內。包含檢測：溫濕度，靜壓差、風速、換氣次數、塵埃粒子、浮游菌、沉降菌等。

Q5、請問產品批出廠的無菌檢驗采用哪種法規？

答：檢驗數量及檢驗接種量分別按照《中國藥典》1101中表1中和表3規定進行。

Q6、菌種如何傳代、分離？

答：先取少量約1ml復蘇菌液至適宜的液體培養基中進行增菌，液體培養基增菌至規定時間18—24小時，再取少量培養液至適宜固體培養基上劃線在規定條件下培養；再取固定培養基上的培養出單一的菌落進行分區劃線即可。

Q7、組合類產品的供試液的制備，比如引流袋與導管的組合，是內外表面都需要嗎？

答：是的。

Q8、針對包類產品，在無菌檢查時如何取樣合適？由于包內配件多，不可能同時都接種到培養基中，所以只能取部分樣品進行接種，在這種情況下，如果在一包樣品中取等量的樣品分別接種到兩種培養基中是否合理？

答：小型配件或可破壞性的采用直接接種法，大件的取浸提液采用薄膜過濾法。

Q9、非無菌產品在藥典需要做供試品菌種對照是什么目的？

答：非無菌產品按《藥典》檢查需氧菌總數和真菌總數不需要做陽性對照。但非無菌產品檢測控制菌檢查時需要做陽性對照。陽性對照目的：1、驗證培養基的適用性；2、是確認試驗是否成立；3、驗證菌種的生物學特性是否符合。

Q10、靈敏度檢查怎么看呢？

答：試驗組和對照組沒有區別，都生長良好，即判定靈敏度符合規定。

Q11、每批產品都要做無菌檢查和靈敏度檢查嗎？

答：是每批產品都要做無菌檢查，是每批培養基都要做靈敏度檢查。兩者要分清楚檢查目的。

Q12、方法適用性驗證啥情況下需要再驗證？怎么制定再驗證周期？

答：當檢查方法和供試品的性質沒有發生變化也不會影響微生物檢出，方法適用性試驗不需要重新驗證。

當檢查方法和供試品的性質發生變化、也會影響微生物結果檢出，方法適用性試驗需要重新驗證。

Q13、大型醫療器械怎么用薄膜過濾法？浸提液的多少有要求？還是說用500ml浸提后抽濾用薄膜在液體培養基培養或者用浸提液直接取1ml配比10ml液體培養基培養呢？

答：參考：按《中國藥典》1101薄膜過濾法中（具有導管的醫療器械（輸血、輸液袋）供試品的制備方法及接種方法。

Q14、請問醫療器械剪碎后體積大概為50ml，是選用直接接種法還是薄膜過濾法進行檢測呢？

答：無論哪種方法應先做方法適用性試驗，選擇適宜的方法適合該產品無菌檢查方法。若直接方法一定要按照藥典中接種比例規定原則，若選擇薄膜法要注意沖洗量的規定原則。

Q15、供試液做陽性對照的時候，金黃色葡萄球菌、銅綠、生孢梭菌、枯草、黑曲霉都長菌了，就白念沒有長菌是菌種問題還是供試液問題呢？

答：說明該供試液含有抑菌性；對白色念珠菌有抑制成分。

Q16、菌種用完后如何避免環境污染？或者在送往滅菌途中防止污染？

答：采取濕熱高壓滅菌（121°C，20min ）必須達到滅菌效果，再廢棄處理。

Q17、培養基ph在滅菌前還是滅菌后調試？

答：按試驗要求，滅菌前或滅菌后都可以調試。但滅菌前調試要將ph調至符合范圍內，再增加0.2至0,4數據，因為高壓滅菌后要降低0.2至0.4數據。

Q18、手術電極只取接觸人體的部分做無菌檢查，可以嗎？

答：不可以，應該取整個產品浸提液做無菌檢查。

Q19、空白對照就是純化水嗎？

答：不單是純化水，任何試驗空白對照都是取本次試驗相應的溶劑作為空白對照。

Q20、考慮到實際問題，按照GB14233. 2只取3個供試品（1個TSB、1個FTM、1個陽性對照）做無菌檢查，是否合規？

答：按藥典要求是不合規的。因為產品檢查數量少，就增大無菌檢測合格判定的風險。

Q21、無菌方法驗證與無菌方法適用性檢查有區別嗎？驗證一般要求三次是不是適用性檢查試驗需要做三次平行試驗？

答：無菌方法驗證與無菌方法適用性檢查沒有區別；都是選擇適宜的方法適合該產品無菌檢查。方法供試品無菌檢查方法適用性只做一次，沒有要求做三次平行試驗。

Q22、防護服屬于外科用敷料棉花及紗布這個范疇是嗎？

答：屬于外科用敷料類。

Q23、帶導管的一次性醫療器械，沖洗的量有要求嗎？

答：參考按《中國藥典》1101薄膜過濾法中（具有導管的醫療器械（輸血、輸液袋）供試品的制備方法及操作方法。

Q24、直接接種法，一般是用什么容器培養的呢？

答：玻璃試管及匹配的透氣膠塞。可根據供試品接種量的需求，試管規格可選擇25ml、50ml、100ml等。

Q25、對 0.45um的非無菌濾膜進行高壓蒸汽滅菌之后會對其孔徑大小有影響嗎？

答：有影響。盡量選擇已滅菌獨立包裝的濾膜。

Q26、無菌方法學再驗證中，產品發生怎樣的變化需要重新驗證了，產品增加一個加強筋、增加一個保護帽需要重新驗證嗎？

答：無論是方法還是產品只要變化都要進行重新驗證。

Q27、對于高附加值三類醫療器械，如果按照應該藥典中的樣品量進行檢測，費用過高（超過10w），能不選怎么多樣本嗎？

答：根據具體情況，具體分析，但要確保不會影響產品結果有效性保證。

Q28、3ml無菌注射器供試液如何制備，供試液量為多少？

答：供試液量取半量。（檢驗接種量按照《中國藥典》1101中，表3第一列液體制劑，第二行1ml與40ml之間規定進行）。

Q29、我們的口罩從傳遞窗進入需要開紫外燈嗎？開了會不會影響測試結果？

答：口罩外包裝經過75%消毒后，從傳遞窗進入無菌室，若短時間打開紫外燈15”左右，不會影響檢測結果。