01生物制品檢測方法開發(fā)與驗證

 

Q1.仇博士，請教，無雜質標的情況下，有關物質分析方法確認的檢測限定量限怎么做

 

答：在無雜質標準品的情況下，這個雜質應該是存在藥物中。你可以稀釋藥物，并檢測雜質的信噪比。當雜質的信噪比為10時，就是該雜質的定量限；當信噪比為3時，就是該雜質的檢測限。雜質的濃度可用主峰的，或我們假定雜質峰和主峰的反應是一致的，這樣我們就可以算出雜質的LOQ和LOD的濃度。

 

Q2.仇博士生物制品的分析方法的質量控制要注意哪些地方？

 

答：一個方法的目的是fit for the purpose，即適用于特定的目的。為了達到對方法的質量進行有效地控制，我們應該按照不同參數的要求來確認方法，滿足特定的接受標準。專屬性，精確度，準確度這三個是最關鍵的參數，我們必須要求它們達到我們預定的目標或接受標準。但是我們也不能對方法過于嚴格要求，也就是說我們的接受標準不要設的太高。否則，我們很難達到，我們總是出偏差，這也不是我們想看到的。

 

Q3.仇博士，我之前做qc的，現在做研發(fā)工藝開發(fā)，有什么最需要克服的困難和需要增強能力

 

答：研發(fā)和QC有些不同。在QC部門，你的任務是按照SOP操作。但是在研發(fā)部門，你的任務是開發(fā)新的方法，如果碰到問題，你得想辦法解決問題。一方面你得好好做實驗，觀察細節(jié)。從實驗中，慢慢掌握技術和技巧。更重要的是，搜索參考文獻。針對問題，從文獻中尋找答案。

 

02生物制品全生命周期的相容性及密封性研究熱點及策略

 

Q1.請問輸血袋一般用什么方法進行檢漏

 

答：輸血袋規(guī)格小于500ml的可以采用高壓放電、真空衰減等方法。

 

Q2.老師，剛才講到了2828的aql制定，請問不同樣本項目的aql如何更合理設定？如根據過往檢驗結果？還是風險評估？還是和供應商聯絡？

 

答：建議參考藥包材YYB標準附件里的AQL和檢驗水平以及參考藥品抽樣規(guī)則，綜合設計。

 

Q3.還有就是其提取物和浸出物的標準（限度）應如何界定？謝謝

 

答：建議依據特定物質的毒理學數據PDE值或是AI值與最大用量進行界定，如是未知物需要用到SCT或是TTC來界定。

 

Q4.老師,細胞產品的密封性在做風險評估時是否需要考慮全制程？在做密封性檢測時如何針對細胞產品特殊性進行抽樣方案？

 

答：細胞產品的密封性建議全過程進行控制，因為無菌風險控制是全過程的。具體抽樣方案和規(guī)則有依據的都是認可以，目前沒有統一規(guī)定。

 

Q5.請問老師，（蛋白類藥液）分裝設備料液傳輸有一小段硅膠管，對其相容性如何控制？謝謝

 

答：建議按生產組件的相容性進行評估風險高中低，來定需要做什么試驗，具體可以聯系國標客服18102296885。

 

Q6.老師，包材相容性，是3批包材對一批樣品，還是3批樣品對一批包材，如何選擇

 

答：一般符合申報資料的最低要求是3批制劑對1批包材就可以，3批包材對一批樣品重點是考察包材批間的差異

 

Q7.請問老師，標簽油墨的遷移研究如何做，謝謝

 

答：主要在提取階段進行設計，將標簽油墨中成分進行充分考慮，如有檢出相關成分且超過一定的閾值，建議在含有標簽油墨的成品中增加相應成分的檢測。

 

Q8.生物藥的包材相容性怎么做呀？

 

答：生物藥的包材相容性一般參照化藥進行及特定指導原則進行，依據生物藥配方、包裝容器性質，按照已發(fā)布的相容性指導原則開展六個部分的研究就可以了。

 

03風口浪尖上的細胞治療產品CAR-NK

 

Q1.CAR-T 產品治療效果咋樣？

 

答：2021年6月以來，復星凱特、藥明巨諾的兩款CAR-T產品，獲批適應癥都是用于治療既往接受二線或以上系統性治療后復發(fā)或難治性大B細胞淋巴瘤患者。

 

復星凱特CAR-T產品：最佳總緩解率（ORR）達到79.2%，客觀緩解率83%、完全緩解率58%，4年總生存率達44%；藥明巨諾的CAR-T產品：客觀緩解率為75.9%，最佳完全緩解率為51.7%。總體來說，CAR-T產品給予經其它方法治療無效的復發(fā)或難治性大B細胞淋巴瘤患者于希望，延長患者生存時間，并有一半的可能性完全治愈。

 

Q2.想問下CAR-NK比CAR-T治療效果好嗎？

 

答：數據報道，在血液瘤方面CAR-NK 和 CAR-T均有較好的治療效果，而CAR-NK 在實體瘤的研究領域更為突出，有望突破實體瘤治療的瓶頸。

 

另CAR-NK相比于CAR-T的優(yōu)勢在于：

 

a 免疫原性低，可直接用于異體治療，制備成現貨產品；

 

b 更安全：異體輸注基本不會引發(fā)GVHD；降低細胞因子風暴發(fā)生的風險；體內存活周期短，不容易產生長期的毒副作用；

 

Q3.老師能講講實際開發(fā)關鍵點嗎？

 

答：細胞治療產品工藝開發(fā)主要從穩(wěn)定性 和 安全性考量，分別如下：

 

a 穩(wěn)定性：數量、活率、陽性率等關鍵質量屬性、工藝穩(wěn)定性、批間一致性、產品穩(wěn)定性等

 

b 安全性：原材料的穩(wěn)定性，殘留、無菌、支原體、內毒素、交叉污染、防混淆等

 

Q4.細胞產品生產過程中關鍵點有哪些？

 

答：需嚴格按照已有生產工藝制備CAR-T產品；

 

a 采血標準、數量、疾病篩查等；

 

b 嚴格把控生產用試劑耗材：培養(yǎng)基、磁珠等；

 

c 生產周期中的細胞數量、安全性指標檢測；

 

d 根據法規(guī)和指導文件制定的質量標準：磁珠殘留、陽性率、殺傷檢測等；

 

e 從采血到回輸的全流程管理及文件體系：制造、檢定規(guī)程和記錄、物料、設備使用、方案等。

 

04國內外生物制品穩(wěn)定性研究

 

Q1. 老師生物藥中間產品的穩(wěn)定性研究可以舉例嗎？

 

答：比如產品單次收獲物，半成品都可以看做中間產品，應該根據生產儲存時限進行穩(wěn)定性研究。

 

Q2. 穩(wěn)定性樣品出樣后應放在什么條件下待檢，如何評估？

 

答：應該放在樣品要求的儲存條件下待檢，如果你的產品儲存條件是2-8℃，你的加速條件是25±2℃，取出后，應該放在2-8℃。

 

Q3. 麻煩問下，樣品測定過程，如何保證樣品的穩(wěn)定性？有什么專業(yè)指導？謝謝

 

答：應該依據方法驗證中進行的溶液穩(wěn)定性研究制定檢驗時間，如果對溫度非常敏感的樣品，應該在檢驗過程中注意溫度存放，盡量縮短檢驗時間。

 

Q4. 穩(wěn)定性的條件，設備影響有多大？

 

答：儀器設備應該經過確認，設備精度應該滿足實驗條件的精度，在這種前提下，設備影響是很小的。另一方面就是檢驗儀器，同樣應該定期進行校驗和確認，保證儀器的檢測精度，進可能采用同一臺儀器檢測穩(wěn)定性樣品，消除不同品牌儀器的影響。

 

Q5. 凍融、振搖的影響因素一般怎么做？

 

答：（1）可以依據中國GMP指南中的建議進行凍融試驗（見下面圖片），也可以根據自己公司產品情況設計凍融試驗，應該保持每次凍融試驗條件一致。

 

（2）也可以依據歐盟發(fā)布的生物制品方法研究中介紹的凍融穩(wěn)定性進行：

 

A．穩(wěn)定性質控樣品應在解凍循環(huán)之間保持至少12小時的冷凍。

 

B. 用于凍融穩(wěn)定性考察的質控樣品應使用新鮮制備的校準曲線和質控樣品或已證明穩(wěn)定的質控樣品進行評估。

 

C. 經驗證的冷凍/解凍循環(huán)次數應不少于試驗樣品所經歷的凍融循環(huán)次數，但至少應進行三次循環(huán)。

 

Q6. 原料藥紙板桶兩層PE袋包裝，穩(wěn)定性用小紙筒和2層封口袋包裝可以嗎？

 

答：樣品的封口方式應該和產品的封口一致，這樣是可以的。

 

Q7. 原料藥儲存條件如果是陰涼條件放置，那么長期和加速穩(wěn)定性實驗條件應該怎么設置？

 

答：建議長期在25±2℃，相對濕度60%±5% ，加速在40±2℃，相對濕度75%±5%條件下進行。

 

05LC-MS肽圖方法在抗體藥物表征與質量控制中的應用

 

Q1.蛋白N端和C端分析的原理是什么

 

答：蛋白N端測序，可以使用蛋白測序儀，從肽鏈的N端開始，依次測定蛋白質分子的氨基酸排列順序。使用的是Edman降解的方式。也可以使用質譜法（二級確證）對多肽序列進行測定。如，在2020版藥典中提出，用氨基酸序列分析儀或質譜法測定尼妥珠單抗的 N 端序列。

 

此外，C-末端氨基酸序列也可以使用LC-MS進行測定。

 

Q2.怎么樣獲得高質量肽圖并高效進行肽圖分析？

 

答：蛋白/多肽樣品前處理時，選擇合適的酶進行充分酶解（之前做好分子高級結構的打開）。

 

液相分離時，選擇合適的色譜柱（如賽默飛Accucore C18 2.1×150 mm（貨號：17126-152130）色譜柱）和流動相條件，覆蓋范圍更寬的液相梯度范圍和合理的分離時間。

 

選擇碎裂能力更好的質譜儀，如Orbitrap的HCD碎裂模式，能夠獲得高質量的二級譜圖；合適的質譜采集參數。

 

數據分析時，進行合理的參數設置與優(yōu)化。

 

06安捷倫mRNA疫苗質控方案-高分辨液質系統的加帽加尾分析

 

Q1.在進行雜質或含量分析時，一些物質對儀器和色譜柱損傷比較大，有什么措施可以在日常分析中減少對儀器和色譜柱的？

 

答：如果是試劑 盡量使用高級別試劑 同時降低試劑濃度 如果是樣品中雜質 盡可能對樣品進行凈化后上樣

 

Q2.安捷倫是否嘗試過mRNA的加帽和加尾的LC.解決方案，而不是必須LC-MS？USP最近的mRNA草案給出的加帽和加尾分析方法都是基于LC的。

 

答：客戶更多采用LCMS方法檢測加帽率，原因是LCMS可以更好的給出對應組分的鑒定信息并定量。Application Note 5994-3984EN