一、阪崎桿菌的生物學特性

1、形態染色

阪崎腸桿菌屬腸桿菌科腸桿菌屬，因此本菌具備腸桿菌基本形態特：革蘭陰性粗短桿菌，有周身菌毛，無芽胞，有動力[1]。

2、培養特性

能在普通營養瓊脂、血平板、麥康凱(MAC) 瓊脂、伊紅美蘭 (EMB) 瓊脂、脫氧膽酸瓊脂等多種培養基上生長繁殖。培養最佳溫度25～36℃，在 6～45℃下都能生長，某些菌株可在47℃下生長[8]。在胰蛋白胨瓊脂 (TSA)、腦心浸液瓊脂(BHI)及血平板上經25～36℃培養24 h后，形成 1.5～2.5mm, 黃色菌落。在結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂(VRBG)能產生紫紅色菌落[2]。

二、阪崎桿菌的傳統檢測方法

阪崎腸桿菌檢驗程序見圖 1：

1、基本步驟如下：

取檢樣100g（mL）加入已預熱至44℃裝有900mL緩沖蛋白胨水的錐形瓶中，用手緩緩地搖動至充分溶解，36℃±1℃培養18 h±2h。移取1mL轉種于10mL mLST-Vm肉湯，44℃±0.5 ℃培養24 h±2h。

輕輕混勻mLST-Vm 肉湯培養物，各取增菌培養物1環，分別劃線接種于兩個阪崎腸桿菌顯色培養基平板，36℃±1℃培養18 h±2 h。

挑取1個～5個可疑菌落，劃線接種于TSA平板。25℃±1℃培養48 h±4 h。自TSA平板上直接挑取黃色可疑菌落，進行生化鑒定。阪崎腸桿菌的主要生化特征見表1。可選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統。

2、結果與報告

綜合菌落形態和生化特征，報告每100g（mL）樣品中檢出或未檢出阪崎腸桿菌。

3、注意事項

（1） 取樣前應對樣品包裝的開啟處和取樣勺進行消毒。

（2） 檢測樣品不能低于333g。

三、檢測新技術簡介

1、熒光法選擇性培養基法

該方法也是利用α-葡萄糖苷酶活性的檢測方法[3]。在營養瓊脂基礎上添加4 -甲基-傘形酮-α-D-葡萄糖苷 (α-MUG)。阪崎腸桿菌在該培養基上形成黃色菌落，在紫外光照射下發生熒光。該法靈敏度和特異性都比較好 ，已在多個國家開展使用 ，均取得穩定可靠的結果。

2、對硝基酚光電比色法

利用阪崎腸桿菌的α-葡萄糖苷酶活性，分解對硝基酚-α-D-葡萄糖苷底物，釋放黃色的對硝基酚，在405nm 波長下測定吸光度，根據吸光度的大小，確定樣品中阪崎腸桿菌是否存在。方法是常規增菌，在 VRBG 或 TSA 平板上挑取可疑菌落 ，制備成一定濃度的菌懸液與底物混勻，37℃4 h 后進行比色測定[4]。

3、熒光定量 PCR 方法 　

熒光定量 PCR 技術的基本原理是在PCR 反應體系中加入熒光基團，該基團是一對合適的熒光物質，可以構成一個能量供體和能量受體對，其中供體的發射光譜和受體的吸收光譜重疊，在 PCR 反應基因擴增時，激發供體而釋放的熒光能量正好被受體吸收，使得供體的熒光強度減弱而受體熒光強度增強，利用熒光信號強弱變化積累實時監測整個PCR反應過程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析。

實時熒光定量PCR技術已廣泛應用于多種食品微生物污染的檢測。SEO等利用阪崎腸桿菌部分大分子合成(MMS)操縱子基因序列建立了奶粉中阪崎腸桿菌的實時熒光定量PCR方法，能檢測到0.6-1g奶粉中的阪崎腸桿菌，且比傳統培養法檢測時間從6～7天縮短至2天內完成。對68株阪崎腸桿菌和 55株非阪崎菌進行檢測 ，未出現假陽性和假陰性，具有很好的特異性。