醫療器械無菌檢驗常見問題答疑

 

Q1、薄膜無法抽濾干，l濾膜的邊緣與底部有液體，對檢驗有影響嗎？有可能產生污染嗎？

 

答：有影響。因薄膜邊緣液體過多，會培養出成片的菌苔，結果菌落無法計數，導致結果不準確。

 

Q2、空白對照和陰性對照有什么區別？

 

答：空白對照是原有的狀態，沒加任何處理因素。陰性對照目的是排除假陽性。

 

Q3、無菌檢查環境是萬級+局部百級嗎？

 

答：按《中國藥典》2020版無菌檢查環境要求是：千級+局部百級（B+A）。

 

Q4、醫療器械無菌實驗室環境要求：是B+A還是C+A？一定需要按照藥典來嗎？

 

答：1、《中國藥典》無菌試驗環境要求是（B+A）；

 

2、因為檢驗依據是按藥典進行，所以環境必須也按藥典要求。

 

Q5、供試品方法適用性試驗如何判定兩者生長一樣，是計數嗎 ？

 

答：無菌檢查屬于定性試驗，方法適用性試驗不用計數。是用肉眼觀察試驗組與對照組的外觀均生長良好則符合要求。

 

Q6、供試品方法適用性試驗怎么判定一樣，從主觀上可以看出來嗎？

 

答：方法適用性試驗主要是對照組與含供試品的試驗菌均生長良好，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計。

 

Q7、供試品數量是否可以不按藥典抽樣，而參照按照GB/T14233.2-2005抽樣？

 

答：若無菌檢查檢驗依據是按《中國藥典》2020版方法進行，那么取樣數量和檢驗量均必須按藥典標準要求。

 

Q8、無菌檢查可不可以按照GB/T14233.2的檢驗數量來抽樣，按藥典進行檢測？

 

答：參照（第7題）若是注冊檢驗，首先送檢方要與監管部門受理方溝通，說明原因，得到許可，必要時還要提交申請說明。

 

Q9、無菌檢查，GB/T 14233.2-2005標準還能參考嗎？

 

答：因為《中國藥典》供試品無菌檢查法要求必須進行方法適用性試驗，防止結果出現假陰性現象，檢測方法科學，可靠，結果準確。建議：試驗前和試驗中的局部百級監測方法可以參考GB14233.2-2005無菌試驗第三章。

 

Q10、藥典上為什么說薄膜過濾法是無菌仲裁法？

 

答：因為藥品檢驗中，只要供試品性質允許，薄膜過濾法是首選。

 

Q11、無菌檢查中薄膜過濾法的時候可以和直接法一樣，一個供試品一組培養器接種嗎？然后取樣也只有11個，這樣合適嗎？

 

答：不可以。薄膜過濾法不是一個培養器過濾一個供試品的浸提液，而是至少5個供試品的浸提液集中混合過濾在一只培養器中。直接接種法是兩種培養基分別等量接種10管，另加一個供試品做陽性對照。（上市抽樣參照1101表2）。

 

Q12、如果微生物限度檢驗量3個，薄膜過濾法做的時候浸提液是3個總量還是一個一個做嗎？

 

答：微生物限度檢驗量是3個，將3個樣品浸提液全部過濾，結果菌落總數除以3就得出一個樣品的含菌量。

 

Q13、藥典表1和表2，這兩個表的取樣量有什么區別，表1是成品出廠檢驗的取樣數量的依據，表2指的是注冊送檢數量的依據嗎？

 

答：表1出廠檢驗的取樣數量的依據；表2指的是注冊送檢數量的依據。

 

Q14、無菌檢查每次陽性對照只需用金葡一種菌就可以了嗎？

 

答：無菌檢查陽性對照選擇是根據產品特性，通過方法適用性試驗得知產品無抑菌作用或抗G+菌為主的供試品，無菌檢查時陽性對照只選用金葡菌就可以。

 

Q15、不溶性微粒檢測時4個檢驗量浸提液一塊檢測還是分別做？

 

答：標準依據有說明的，單個或合并都可以。若4個樣品浸提液合并檢測，結果根據取樣體積與每個容器的標示裝量體積，計算每個樣品的微粒數。

 

Q16、方法適用性試驗是否需要定期做再驗證？

 

答：不需要。當檢驗程序或產品發生變化可能影響檢驗結果時，檢查方法應進行重新試驗，否則不需要。

 

Q17、非無菌微生物檢查，培養基做無菌性檢查和靈敏度檢查嗎？

 

答：不用。非無菌微生物檢查是定量檢查法，培養基質量管理是需要做計數培養基適用性檢查和計數培養基適用性試驗。

 

Q18、怎么樣才能得到差不多100cfu的菌液？ 

 

答：取培養好的增菌液，用適宜的稀釋液進行梯度稀釋，在適宜稀釋級取0.5ml或1ml菌液，傾注或涂布于固體培養基進行計數來確定。

 

Q19、菌種可以采用25%甘油零下20°冷凍保藏嗎？1代菌種可以作為陽性菌嗎？

 

答：菌種可以采用25%甘油零下20°冷凍保藏。無論哪一代，都必須增菌培養是用新鮮培養物，進行梯度稀釋，在適宜稀釋級取0.5ml或1ml菌液,傾注或涂布于固體培養基進行計數得到不大于≤100cfu的菌液才可以作為陽性對照。

 

Q20、無菌檢查陽性每個樣品都做嗎？

 

答：不是。因為無菌檢查陽性對照菌選擇是根據供試品的特性決定的（參照14題）。

 

Q21、藥械組合的產品采用什么無菌方法合適？

 

答：無菌方法合適用性選擇：若小型配件產品可選擇直接法，大件產品或含有抑菌成分產品選擇薄膜法。

 

Q22、薄膜過濾法會不會堵塞過濾膜？

 

答：根據產品特性選擇濾膜規格。

 

Q23、同一批樣品取三件 每個樣品都需要加金葡做陽性嗎?

 

答：不需要。無菌檢查，同一批樣品，若產品不含有抑菌成分，同一批樣品選擇金葡只做一個陽性對照。（適量FTM培養基+接種規定量供試品+不大于100cfu)。

 

Q24、液體生物制品滅菌時，陽性菌選擇枯草可以嗎？

 

答：不同的滅菌方法選擇不同的滅菌生物指示劑。如：

 

1、濕熱滅菌法最常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子；

 

2、干熱滅菌法最常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子；

 

3、輻射滅菌法最常用的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子；

 

4、環氧乙烷滅菌中選擇枯草芽孢桿菌孢子等等。

 

Q25、微生物限度測試的時候經常遇到薄膜四周有白色的菌，不知道是什么？

 

答：原因是平板不能過于濕潤或濾膜沒有完全抽干，四周就長出成片菌苔。

 

Q26、平板做好后有水蒸氣，是否應該再用鼓風干燥箱烘干一下呢？

 

答：最好在無菌室凈化操作臺百級條件下，打開通風系統，同時打開紫外燈進行吹掃，以防污染。

 

Q27、直接接種法的陰性對照需要加什么？這個陰性對照的裝量量是同供試品的培養基裝量一致嗎？如供試品培養基800ml，那陰性對照培養基也是800ml嗎？

 

答：第一問：供試品無菌檢查時直接接種法的陰性對照是加稀釋液或相應的溶劑。與試驗同時進行，同法操作，不得有菌生長，但所加體積不得大于培養基體積10%；

 

第二問：裝量一致；

 

第三問：是的。應該是同等條件，只是所加內容物不同。

 

Q28、培養基適用性試驗是六種菌，生孢梭菌的培養基，我們不用，可以不買這個菌嗎？

 

答：不可以。藥典要求每個試驗菌逐一進行方法確認。

 

Q29、現在菌種斜面二代是不讓賣了嗎？

 

答：不確定?？梢哉乙粋€有資質的菌種供應商聯系一下，要求對方必須能提供菌種溯源證明及菌種質量分析證書。

 

Q30、抽太干有沒有影響嗎？

 

答：濾膜抽干沒有影響。因為操作完畢立即將濾膜貼于相應的瓊脂培養基上。

 

Q31、微生物革蘭氏染色鑒定用的什么顯微鏡？

 

答：普通光學顯微鏡。