培養(yǎng)基，又稱(chēng)生長(zhǎng)介質(zhì)，是由人工配制，用于培養(yǎng)微生物、細(xì)胞、組織等，有利其生長(zhǎng)繁殖或代謝物產(chǎn)生的的固態(tài)、半固態(tài)、液態(tài)混合營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)或介質(zhì)。培養(yǎng)基中含有提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，如碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等，以及適宜的pH值和滲透壓。

 

培養(yǎng)基在生物學(xué)研究中扮演著非常重要的角色。它不僅為微生物提供生長(zhǎng)環(huán)境，還可用于分離、純化、鑒定、計(jì)數(shù)微生物，以及進(jìn)行藥物篩選、基因工程等研究。下面，將為你詳細(xì)介紹實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種培養(yǎng)基及其配制方法。

 

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（Nutrient Broth）

 

● 牛肉膏：3.0g

 

● 蛋白胨：10.0g

 

● NaCl：5.0g

 

● 瓊脂粉：15-20g（用于固體培養(yǎng)基）

 

● ddH2O：加至1L

 

LB培養(yǎng)基

 

● 胰蛋白胨：10g

 

● 酵母粉：5g

 

● NaCl：10g

 

● 瓊脂粉：15-20g（用于固體培養(yǎng)基）

 

● ddH2O：加至1L

 

LB培養(yǎng)基（含Amp）

 

● 胰蛋白胨：10g

 

● 酵母粉：5g

 

● NaCl：10g

 

● 瓊脂粉：15-20g（用于固體培養(yǎng)基）

 

● ddH2O：加至1L

 

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）

 

● 馬鈴薯提取物：200 g（通常使用新鮮馬鈴薯）

 

● 葡萄糖：20 g

 

● 瓊脂粉：15-20 g（用于固體培養(yǎng)基）

 

● ddH2O：加至1L

 

配制方法：將新鮮馬鈴薯去皮切塊，加入配方所需量蒸餾水煮沸20分鐘，稍稍冷卻后用雙層紗布過(guò)濾，得到馬鈴薯浸出液。隨后將葡萄糖和瓊脂粉加入馬鈴薯浸出液中，加熱溶解。pH調(diào)至5.6左右， 將配制好的培養(yǎng)基分裝到三角瓶或試管中，121℃高壓滅菌15分鐘。

 

葡萄糖糖發(fā)酵管

 

● 蛋白胨：10g

 

● 酵母粉：5g

 

● 氯化鈉：5g

 

● 磷酸氫二鉀：2g

 

● 葡萄糖：10g

 

● 酚紅指示劑：0.02g

 

● 瓊脂：15g（用于半固體培養(yǎng)基）

 

● ddH2O：加至1L

 

SOB培養(yǎng)基

 

● 胰蛋白胨：20g

 

● 酵母粉：5g

 

● NaCl：0.5g

 

● ddH2O：加至1L

 

高氏1號(hào)培養(yǎng)基

 

● 可溶性淀粉：20g

 

● KNO?：1g

 

● NaCl：0.5g

 

● K?HPO?·3H?O：0.5g

 

● MgSO?·7H?O：0.5g

 

● FeSO?·7H?O：0.01g

 

● 瓊脂：15-20g

 

● ddH2O：加至1L

 

馬丁氏培養(yǎng)基

 

● 葡萄糖：10g

 

● 蛋白胨：5g

 

● KH?PO?：1g

 

● MgSO?：0.5g

 

● 孟加拉紅：0.33g (抑制細(xì)菌和放線(xiàn)菌)

 

● 鏈霉素：30mg (抑制細(xì)菌和放線(xiàn)菌)

 

● 瓊脂：20g

 

● ddH2O：加至1L

 

明膠培養(yǎng)基

 

● 明膠：120g

 

● 牛肉膏：5g

 

● 蛋白胨：5g

 

● NaCl：5g

 

● ddH2O：加至1L

 

在學(xué)實(shí)驗(yàn)中，我們經(jīng)常還需要需要在培養(yǎng)基中添加抗生素，以篩選含有特定抗性基因的細(xì)菌。例如，在克隆實(shí)驗(yàn)中，為了篩選含有重組質(zhì)粒的細(xì)菌，會(huì)在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的抗生素。只有含有抗性基因的細(xì)菌才能在含有抗生素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。下面我們?cè)賮?lái)看看實(shí)驗(yàn)室中常用抗生素的配方：

 

氨芐青霉素（Ampicillin）

 

● 溶解性：易溶于水

 

● 母液濃度：100 mg/mL

 

● 工作濃度：50-100 μg/mL

 

配制方法：稱(chēng)取1g氨芐青霉素，加入10mL無(wú)菌水，充分溶解。分裝成小份，-20℃保存。使用前，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要稀釋至工作濃度。

 

卡那霉素（Kanamycin）

 

● 溶解性：易溶于水

 

● 母液濃度：50 mg/mL

 

● 工作濃度：25-50 μg/mL

 

配制方法：稱(chēng)取0.5g卡那霉素，加入10mL無(wú)菌水，充分溶解。分裝成小份，-20℃保存。使用前，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要稀釋至工作濃度。

 

氯霉素（Chloramphenicol）

 

● 溶解性：易溶于乙醇

 

● 母液濃度：34 mg/mL

 

● 工作濃度：25 μg/mL

 

配制方法：稱(chēng)取0.34g氯霉素，加入10mL無(wú)菌乙醇，充分溶解。分裝成小份，-20℃避光保存。使用前，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要稀釋至工作濃度。

 

四環(huán)素（Tetracycline）

 

● 溶解性：微溶于水，易溶于酸

 

● 母液濃度：12.5 mg/mL

 

● 工作濃度：10-50 μg/mL

 

配制方法：稱(chēng)取0.125g四環(huán)素，加入10mL無(wú)菌水或稀鹽酸，充分溶解。分裝成小份，-20℃避光保存。使用前，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要稀釋至工作濃度。

 

需要注意的是，抗生素溶液在配制完畢后，均需要使用針頭過(guò)濾器對(duì)其進(jìn)行過(guò)濾。配制好的抗生素溶液并非永久有效，應(yīng)注意保質(zhì)期。