摘要: 目的 通過測定奧硝唑片在4種溶出介質中的溶出曲線，并與參比制劑的溶出曲線進行對比，為全面評價該藥品體外溶出提供參考數據。方法 采用高效液相色譜法，YMC-C18色譜柱( 4.6mm×150mm，5μm) ，以甲醇-水( 30∶70) 為流動相，流速為1. 0mL·min－1，檢測波長為318nm，柱溫為30 ℃ ; 溶出度試驗采用漿法，轉速為50r·min－1，以pH1.0鹽酸溶液、pH4. 5緩沖液、pH6.8緩沖液和水為溶出介質，采用高效液相色譜法測定平均累積溶出量繪制多條溶出曲線，并采用f2因子法計算相似度。結果 被測奧硝唑片與參比制劑具備相似的體外溶出行為。結論 建立了該品種在不同介質中溶出曲線的測定方法。

      固體制劑口服給藥后，藥物的吸收取決于藥物從制劑中的溶出或釋放、藥物在生理條件下的溶解以及在胃腸道的滲透等，因此藥物的體內溶解和溶出對吸收具有重要影響。普通口服固體制劑，可采用比較仿制制劑與參比制劑體外多條溶出曲線相似性的方法，評價仿制制劑的質量; 而溶出曲線相似性的比較，多采用非模型依賴法中的相似因子( f2 ) 法。本試驗考察了奧硝唑片在不同pH條件下的溶出行為，與參比制劑的溶出曲線進行對比，并以f2因子判斷仿制制劑與參比制劑溶出曲線的相似性，對我國建立該品種的溶出曲線數據庫具有參考意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器  7080DS自動溶出度儀( 美國安捷倫公司) ; 1290型高效液相色譜儀( 美國安捷倫公司，配 Empower 色譜工作站) ; XPE105型電子分析天平( 美國賽多利斯公司) 。

1.2 試藥  奧硝唑對照品( 中國食品藥品檢定研究院，批號: 100608-202003，含量: 99. 9% ) ; 甲醇( 色譜純，美國 Honeywell公司) ; 其他試劑均為分析純; 高效液相色譜用水( 自制高純水) ; 溶出度用水( 脫氣純化水) 。

奧硝唑片( A企業，批號: T001、T002、T003) ; 奧硝唑片參比制劑( 法國 Laboratoires SERB 公司，批號: 2621) 。

2 方法

2.1 色譜條件  采用YMC C18色譜柱( 4. 6 mm × 150mm，5μm) ; 流動相為甲醇-水( 30∶70) ; DAD 檢測器，檢測波長為318nm; 流速為1. 0 mL·min － 1 ; 柱溫為30 ℃ ; 進樣體積10μL。

2.2 溶出條件  根據國家局發布的《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則( 草案) 》( 下文簡稱: 《指導原則》) 以及日本橙皮書相關內容，采用《中國藥典》四部通則0931第二法為溶出方法，轉速為50r·min-1，以pH1.0鹽酸溶液、pH4.5 緩沖液、pH6.8 緩沖液和水為溶出介質，介質體積為1000mL。

取樣時間: pH1.0 鹽酸溶液介質中取樣時間為5、10、15、 20、30、45、60min; pH4.5緩沖液、pH 6.8緩沖液和水介質中取樣時間均為5、10、15、20、30、45、60、90、120min。

每個取樣時間點取溶出液10mL，并及時補充相同溫度相同體積的溶出介質。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備: 取奧硝唑對照品適量，精密稱定，加溶出介質溶解并定量稀釋制成每1mL 中約含0.5mg 的溶液，作為對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備: 取每批被測樣品各12片，分別在4種溶出介質中試驗，經不同取樣時間點分別取溶出液10mL，用0.45μm 水系濾膜濾過，棄去初濾液5mL，取續濾液作為供試品溶液。

2.4 測定方法  精密量取“2.3”項下的對照品溶液與供試品溶液各10μL，按“2.1”項下的色譜條件進樣，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算每片在不同取樣時間點的累積溶出量。

3 結果

3.1 平均累積溶出量相對標準偏差( RSD)

 3批被測樣品與1批參比制劑各12片，按“2. 2”項下的溶出條件試驗，按 “2. 1”項下的色譜條件測定，分別計算各12片在4種溶出介質中不同取樣時間點的平均累積溶出量的RSD( 見表 1) 。 

3.2 繪制溶出曲線

每批分別以4種溶出介質的取樣時間點為橫坐標，以12片平均累積溶出量為縱坐標，繪制溶出曲線( 見圖1) 。

3.3 f2因子的計算

     根據《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則》，f2因子計算公式如下: f2 = 50·lg{ ［1 + ( 1 /n) ∑n i = 1( Rt － Tt ) 2］－ 0. 5 × 100}式中，n為取樣時間點的個數; Rt 為t時間參比樣品平均溶出量; Tt為t時間受試樣品平均溶出量。

     4種溶出介質中，3批被測樣品與參比制劑的溶出曲線采用f2因子計算相似度，結果( 見表 2) 。

3.4 結論

     根據《指導原則》可知，第一個時間點溶出結果的相對標準偏差不得過20% ，自第二個時間點至最后時間點溶出結果的相對標準偏差不得過10% 。由表 1 可得，所測批次溶出結果的RSD均滿足《指導原則》的相關規定，表明樣品均一性較好、工藝較成熟。

     在《指導原則》中明確規定: 取樣時間點可為5和或10、15和或20、30、45、60、90、120min，此后每隔1h進行測定; 連續兩點溶出量均達85% 以上，且差值在5% 以內時可作為考察截止時間點選擇的依據。本研究，pH1.0 鹽酸溶液介質中取樣時間點選擇5、10、15、20、30、45、60min，是由于在30min時仿制制劑的溶出量達85% ，并向后再延長了2個時間點; pH4.5 緩沖液、pH6.8 緩沖液和水介質中取樣時間點選擇5、10、15、20、30、45、60、90、120min，是由于在60min 時仿制制劑的溶出量達85% ，并向后再延長了2個時間點。

     在《指導原則》中還明確規定: 采用相似因子( f2 ) 法比較溶出曲線相似性時，一般情況下，當兩條溶出曲線相似因子( f2 ) 數值不小于50時，可認為溶出曲線相似。由表2結果可得，在pH1.0 鹽酸溶液、pH4.5 緩沖液、pH6.8 緩沖液和水溶出介質中，3批被測樣品與參比制劑的f2因子數值均大于50，判定仿制制劑與參比制劑在4種介質條件下的溶出行為均相似，說明被測奧硝唑片的體外溶出行為與參比制劑一致，處方及工藝可行。

4 結論

     在任何給定的溫度及壓力下，總有一部分氣體溶于液體中; 在溶出實驗過程中，這種氣體的存在可能會以若干方式干擾結果的重現性。水中溶解的氣體在實驗過程中可能會形成小氣泡聚集在溶出杯邊、攪拌槳表面和固體制劑的表面，如氣泡聚集在固體制劑的表面會使它們浮起或阻止其與溶出介質接觸。因此本研究中采用了脫氣純化水，且每次取出溶出液后都及時補充了相同溫度相同體積的溶出介質。

     仿制藥一致性評價工作是監測國內仿制制劑質量的有效措施，而f2因子法作為定量描述制劑體外溶出曲線相似性的非模型依賴方法，簡單易行、結果可靠。通過溶出曲線對比研究，可以直觀反映不同制劑的體外釋放速度和程度相似性，有利于對產品質量一致性進行更全面的評估。本試驗結果表明，被測奧硝唑片與所選參比制劑在4種介質中的溶出行為均一致，為該品種仿制藥一致性評價提供了試驗依據。