線性（Linearity）和范圍（Range）。在最新的ICH Q2（R2）中已經(jīng)將這兩個(gè)合并為工作范圍（Working Range）。為了更有利于我們?nèi)ダ斫馑鼈兊暮x，我們可以將原先的范圍等同是工作范圍，而線性則指的就是線性范圍。

先看定義：

工作范圍，從字面來(lái)理解就是指方法可以正常工作（滿足使用需求）的范圍。它是方法定量能力的一個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)，含義就是指出了方法能夠準(zhǔn)確定量的范圍。需要注意的是，在這個(gè)范圍內(nèi)必須同時(shí)滿足準(zhǔn)確度、精密度和線性的要求。

線性范圍，指的是在一定范圍內(nèi)，試驗(yàn)結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度呈線性關(guān)系的能力。它是方法能夠定量計(jì)算的前提，含義就是在此范圍內(nèi)可以通過(guò)線性關(guān)系來(lái)進(jìn)行信號(hào)與濃度的轉(zhuǎn)換。

因此，我們可以用下面這張圖來(lái)表示精密度、準(zhǔn)確度、線性和范圍之間的關(guān)系。在數(shù)學(xué)表示方法中，范圍取的是線性、精密度和準(zhǔn)確度的交集，即范圍=線性∩精密度∩準(zhǔn)確度。

需要注意的是：

線性范圍是由方法本身決定的，它受限于方法本身（如檢測(cè)器類型、目標(biāo)物溶解度）。因此線性范圍主要取決于檢測(cè)器和目標(biāo)物。有的檢測(cè)器線性范圍較寬（如紫外檢測(cè)器），有的檢測(cè)器線性范圍則比較窄（如示差檢測(cè)器），同時(shí)針對(duì)不同的目標(biāo)物，它的線性范圍也是不同的。

工作范圍是根據(jù)用戶選擇的，它取決于使用場(chǎng)景（如靈敏度要求、操作難易程度）。原則上工作范圍的設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)是滿足使用要求即可。

舉個(gè)簡(jiǎn)單的例子來(lái)解釋下，咱們?cè)谥锌剡^(guò)程中隨著反應(yīng)時(shí)間的變化，反應(yīng)液中原料、產(chǎn)物以及副產(chǎn)物的濃度是在變化的。此時(shí)為了保證色譜峰不過(guò)載（過(guò)載會(huì)導(dǎo)致定量不準(zhǔn)）或色譜峰太低（峰高太低則會(huì)導(dǎo)致雜質(zhì)看不到），我們就需要?jiǎng)討B(tài)的調(diào)整供試品的濃度和進(jìn)樣體積來(lái)保證獲得合適的峰高。那么在這個(gè)過(guò)程中，實(shí)際上線性范圍是固定的，改變的則是工作范圍。

線性是方法定量計(jì)算的前提，而范圍則是能夠準(zhǔn)確定量的區(qū)間。因此對(duì)于定量方法，我們必須驗(yàn)證線性和范圍。

然后說(shuō)下做法：

線性：

做法：通常可用同一對(duì)照品貯備液經(jīng)精密稀釋（更推薦），或分別精密稱取對(duì)照品，制備一系列對(duì)照品溶液的方法進(jìn)行測(cè)定，至少制備5個(gè)不同濃度水平。然后以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性， 再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換（如ELSD檢測(cè)器，需取對(duì)數(shù)），再進(jìn)行線性回歸計(jì)算，或者可采用描述濃度-響應(yīng)關(guān)系的非線性模型。

數(shù)據(jù)要求:

1）應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)、殘差平方和、 線性圖（或其他數(shù)學(xué)模型）。

2）對(duì)于R通常要求大于0.99，含量方法則要求大于0.999。

3）對(duì)于Y軸截距，要求是在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著，在標(biāo)準(zhǔn)溶液響應(yīng)值的n%內(nèi)（含量通常為2%，有關(guān)物質(zhì)為10%），才能適用于單點(diǎn)外標(biāo)的含量計(jì)算。

需要提醒大家的是：

方法開(kāi)發(fā)初期需注意樣品溶解度的考察，至少應(yīng)保證在供試品濃度的5倍以上能夠完全溶解，避免出現(xiàn)在配制貯備液時(shí)無(wú)法溶解。

截距的來(lái)源主要是方法的系統(tǒng)誤差，如基質(zhì)干擾、儀器校準(zhǔn)等。對(duì)于Y軸截距的n%值設(shè)置，可參考方法的回收率要求，即誤差允許的范圍。若含量方法要求主成分回收率98%~102%時(shí)，n%建議為2%；有關(guān)物質(zhì)方法要求雜質(zhì)回收率90%~110%時(shí)，n%建議為10%。

當(dāng)截距不符合要求時(shí)，不能使用單點(diǎn)外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算，而要使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。

范圍：

做法：不需要單獨(dú)做范圍的驗(yàn)證，而是在線性基礎(chǔ)上，確定范圍區(qū)間，然后通過(guò)精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。即完成了線性后，選擇合適的范圍進(jìn)行精密度和準(zhǔn)確度驗(yàn)證即可。因此，范圍的驗(yàn)證主要體現(xiàn)在濃度區(qū)間的選擇。

范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用及其線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。

對(duì)于原料藥含量測(cè)定，范圍一般為測(cè)定濃度的80%~120%；

對(duì)于雜質(zhì)含量測(cè)定，則通常為定量限（報(bào)告限）～200%的限度濃度。

需要注意的是：

范圍的選擇包括上限和下限，原則就是覆蓋日常檢測(cè)過(guò)程及驗(yàn)證過(guò)程中可能出現(xiàn)的濃度范圍。對(duì)于含量方法，我們的對(duì)象是主成分，并且原料藥通常都很純，因此主要考慮的是它的稱量誤差“約”所涵蓋的±10%范圍，因此80%~120%即可。對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定，我們的對(duì)象是雜質(zhì)，方法的目的是盡可能的在低濃度下就可以準(zhǔn)確定量它們，因此下限一般為方法的定量限或報(bào)告限。而上限則主要是考慮到驗(yàn)證過(guò)程中的雜質(zhì)加標(biāo)，因此一般要求至少為150%或200%，避免出現(xiàn)加標(biāo)后的濃度不在范圍內(nèi)。