殘留溶劑是藥物研發(fā)中需要重點(diǎn)檢查和控制的雜質(zhì)之一，API在合成的過程中應(yīng)用的較多，部分制劑在工藝中也會應(yīng)用到，因此，在成品中需要檢查殘留溶劑，在ICHQ3C中對于殘留溶劑的PDE值也有具體的規(guī)定，可以參考用于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的擬定。因?yàn)闅埩羧軇┑幕瘜W(xué)結(jié)構(gòu)一般無紫外吸收，并且具有易揮發(fā)的特點(diǎn)，在方法開發(fā)中以GC方法居多，在殘留溶劑的GC方法開發(fā)過程中色譜條件的篩選是關(guān)鍵，然而除了色譜條件之外，仍存在其他方法開發(fā)的要點(diǎn)，本文通過案例形式做以介紹，希望與廣大同行進(jìn)行分享與討論。

溶劑的選擇
 

案例1：脂質(zhì)體A，規(guī)格：20ml：266mg，制備工藝中應(yīng)用了三氯甲烷和乙醇，因此，成品中需要控制三氯甲烷和乙醇在限度范圍內(nèi)；

在方法開發(fā)之初可獲取的信息如下：

信息一：三氯甲烷的限度為0.006%，乙醇的限度為0.5%；

信息二：擬定頂空氣相色譜法同時檢測三氯甲烷和乙醇的殘留量，擬定的色譜條件下以DMF為溶劑，乙醇定量限濃度10μg/ml，為方法定量限的1%，三氯甲烷定量限濃度12μg/ml，為方法定量限的40%；以正丙醇為溶劑，乙醇定量限濃度8μg/ml，為方法定量限的0.8%，三氯甲烷定量限濃度15μg/ml，為方法定量限的50%；以DMSO為溶劑，乙醇定量限濃度10μg/ml，為方法定量限的1%，三氯甲烷定量限濃度15μg/ml，為方法定量限的50%；

信息三：不同溶劑完全破乳的比例情況，脂質(zhì)體A：DMF（v/v）為1:20；脂質(zhì)體A：正丙醇（v/v）為1:1；脂質(zhì)體A：DMSO（v/v）為1:2；

方法開發(fā)過程：

供試品濃度的選擇：結(jié)合溶劑的定量限濃度和限度，以限度低、響應(yīng)低的三氯甲烷為目標(biāo)，反向計(jì)算供試品的濃度為15÷50%÷0.006%=500mg/ml；

供試品的制備方法：分別精密稱取脂質(zhì)體A5g各3份，分別置3個不同的10ml量瓶中，分別以DMF、正丙醇和DMSO為溶劑，破乳稀釋定容至刻度，搖勻，即得。

檢測的結(jié)果：DMF的供試品：乙醇和三氯甲烷均未檢出；正丙醇的供試品：三氯甲烷未檢出，乙醇檢出量為0.1%；DMSO的供試品：三氯甲烷未檢出，乙醇的檢出量大于檢測限，低于定量限；

結(jié)果討論：因?yàn)橹|(zhì)體的劑型特點(diǎn)，在制劑工藝過程中殘留溶劑可能會被包裹在脂質(zhì)雙分子層中間，因此，在殘留溶劑方法開發(fā)的溶劑選擇時，需要在滿足溶劑測定靈敏度需求的前提下，選擇可以充分破乳的溶劑作為殘留溶劑供試品與對照品制備的溶劑。

控制策略的選擇

案例2：原料藥中使用了某種溶劑X，因此，需要在原料藥的成品中控制X在限度范圍內(nèi)；

在方法開發(fā)之初可獲取的信息如下：

信息一：X在水中溶解分解成為Y；

信息二：X的限度為0.5%；

信息三：原料藥溶于水、乙醇等；在DMF、DMA中的溶解性較差；

方法開發(fā)過程中的問題：

問題1：溶劑X的極性較強(qiáng)，在多種色譜柱中均發(fā)生強(qiáng)吸附而拖尾；

問題2：在以DMSO為溶劑，制備對照品溶液，溶液的穩(wěn)定性較差，連續(xù)5針的RSD為8%；

問題討論：根據(jù)方法開發(fā)過程中暴露的問題，考慮轉(zhuǎn)換控制策略，由直接控制溶劑X的殘留量轉(zhuǎn)換為間接法控制，即通過控制Y而對原料中的溶劑X進(jìn)行控制，這樣可以極大的避免溶劑X方法開發(fā)過程中的難點(diǎn)問題。然而，值得注意的是，選擇通過Y而進(jìn)行X的控制，需要充分的考慮由X轉(zhuǎn)換成Y的反應(yīng)比例，以水為溶劑，需要充分的考察反應(yīng)的時間，通過必要的加樣提取回收率等方式充分的考察供試品溶液的制備方法，避免測定結(jié)果的不準(zhǔn)確性。

供試品制備方法的選擇

案例3：原料藥B在制備過程中，使用了溶劑甲醇、乙腈、乙醇、甲苯，因此，在原料藥中需要控制這4種溶劑的殘留量在規(guī)定的限度范圍內(nèi)；

在方法開發(fā)之初可獲取的信息如下：

信息一：原料藥B在水中不溶、在DMF、DMA、DMSO等溶劑中微溶；

信息二：原料藥B對熱不穩(wěn)定，105℃10min下，會降解10%左右，部分降解產(chǎn)物在殘留溶劑的檢查方法中存在基質(zhì)干擾；

方法開發(fā)過程：

進(jìn)樣方式的選擇：原料藥B適宜選擇頂空進(jìn)樣方式；

溶劑的選擇：在殘留溶劑檢查中常用的溶劑中選擇對原料藥溶解效果最好的溶劑DMSO，但是在常溫的狀態(tài)下，滿足測定靈敏度需求的條件下，仍然無法對目標(biāo)濃度的供試品進(jìn)行溶解；

供試品制備方法1：精密稱取原料藥1g，置10ml量瓶中，加DMSO5ml，于60℃水浴10min溶解后，用DMSO稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品制備方法2：精密稱取原料藥0.5g，置20ml頂空瓶中，加DMSO5ml，在頂空平衡溫度80℃下，平衡20min后，直接進(jìn)樣分析。

供試品制備方法3：精密稱取原料藥1g，置10ml量瓶中，加DMSO5ml，超聲15min溶解后，用DMSO稀釋至刻度，搖勻，即得。

檢測的結(jié)果：三種供試品制備方法下均未檢出甲苯和乙腈，供試品制備方法1和方法3，重復(fù)性試驗(yàn)中乙醇的檢出量的RSD分別為12%和15%，而方法2的重復(fù)性試驗(yàn)中乙醇的檢出量的RSD分別為4%。方法2和方法3檢出甲醇的量分別為0.05%和0.01%；

結(jié)果討論：對于選定溶劑下溶解性差的原料藥，如果在加熱的條件下可以溶解充分，可以選擇將原料藥稱量后，直接置于頂空瓶中，加入溶劑后，雖然是混懸狀態(tài)但是加熱后可以溶解為溶液狀態(tài)，不會影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。但是，值得注意的是，頂空平衡溫度和時間需要充分考察；

綜上，結(jié)合案例對色譜條件之外的殘留溶劑方法開發(fā)要點(diǎn)做了簡單的分析，然而除了以上介紹的三個要點(diǎn)之外，還有進(jìn)樣方式的選擇，直接進(jìn)樣的進(jìn)樣針的清洗溶劑和清洗次數(shù)選擇等均在方法開發(fā)中需要給予關(guān)注，對于方法開發(fā)之初的充分考察，不但可以保證驗(yàn)證的順利通過，同時也利于方法的順利轉(zhuǎn)移，最重要的是可以保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，保證產(chǎn)品的質(zhì)量可控性。

參考文獻(xiàn)：

ICH Q3C（R8）雜質(zhì)：殘留溶劑的指導(dǎo)原則

Chp（2020版）四部通則 0861