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嘉峪檢測網 2022-03-27 21:41
二維液相色譜(2D—LC)是將分離機理不同而又相互獨立的兩支色譜柱串聯起來構成的分離系統。樣品經過第一維的色譜柱進入接口中,通過濃縮、捕集或切割后被切換進入第二維色譜柱及檢測器中。二維液相已經越來越多的應用到復雜樣品的分析中,跟小編一起來看看什么是二維液相吧。
二維液相色譜通常采用兩種不同的分離機理分析樣品,即利用樣品的不同特性把復雜混合物(如肽)分成單一組分,這些特性包括分子尺寸、等電點、親水性、電荷、特殊分子間作用(親和)等,在一維分離系統中不能完全分離的組分,可能在二維系統中得到更好的分離,分離能力、分辨率得到極大的提高。完全正交的二維液相色譜,峰容量是兩種一維分離模式單獨運行時峰容量的乘積。假如兩種分離系統都有100的峰容量,那么良好的二維系統理論上可產生10000的峰容量。
二維液相色譜大多使用兩支或多支色譜柱,并通過柱結合技術實現樣品的柱間切換。柱切換通常可分為部分和整體切換兩種模式。按切割組分是否直接進人二維中,二維分離又可分為離線和在線兩種方式。早期的中心切割技術,大都先在容器中收集一維洗脫產物,再進樣到第二維中。隨著現代儀器的發展和適應自動化分離的需要,目前二維色譜大多采用在線方式,使一維洗脫產物(部分或全部)直接進入到第二維柱系統中進行分離分析。
部分模式即采用中心切割技術,只使第一維分離的部分感興趣的組分進入第二維中進一步分析。為了將樣品有效地轉移到下一維柱系統中,必須先在第一維分離模式中用標準物進行實驗,根據得到的分離信息設計切換程序。部分模式不能得到樣品所有組分的信息,此外,還有操作繁瑣、樣品易損失與污染及可能降低分辨率等缺點。
整體模式即全多維液相色譜模式(comprehensive HPLC)。基于Giddings 的理論,一般認為全多維分離應滿足3個條件:
(1)樣品的每一部分都受到不同模式的分離;
(2)所有樣品組分以相等的比例(100%或稍低一些,即并不要求100%分析物,只要分流的部分能代表所有樣品組分信息即可)轉移到二維及檢測器中;
(3)在一維中已得到的分辨率基本上維持不變。“基本”指通過測量全二維中第一維軸上的某個特殊峰所對應的第一維的分辯率與一維情況相比減少不超過10%。其中,第一條和第三條說明了傳統的中心切割技術與全二維的區別。
Schoenmakem等 認為在二維分離之前進行分流也可稱為全二維分離,進一步拓寬了全二維分離的概念。
高效液相色譜法是一種新型物質分離檢測技術,世界上約有80%的有機化合物可以用高效液相色譜法來分析測定。液相色譜儀是對物質或混合物的化學成分進行先分離,而后分析鑒定的實驗室主要的分析儀器。
GI-3000XY血藥濃度檢測儀系統,是一個具有在線固相萃取的全智能四元低壓梯度二維液相色譜系統,系統由前處理、自動進樣系統、雙四元梯度高壓恒流泵系統、二維綜合分離分析系統、UV紫外檢測器六單元部分以及功能強大的色譜軟件所組成。
二維液相色譜系統是通過多種閥控制接口技術,在一維液相色譜基礎上,構建的集成化的多維液相色譜系統,系統構成示意圖如下:
二維液相色譜儀包括依次連接有第1固相萃取色譜柱的第1流道、第二流道、分析流道、廢液流道、中間色譜柱(一級SPE固相萃取柱)、多流道切換閥以及寄存閥等,該二維液相色譜儀通過多流道切換閥與寄存閥之間閥的切換,可以改變中間色譜柱在流道中所處的位置,實現中間色譜柱的寄存功能。
該二維液相色譜儀采用第1級色譜柱實現在線固相萃取,分離后的截留部分暫緩寄存作為第二維液相系統的輸入,再經二級分析色譜柱分離后,經過紫外檢測器檢測出物質成分及其含量,通過計算機合理控制,可實現第1維液相色譜與第二維液相色譜并行運行,同時進行不同樣品的處理工作??稍O計控制流路實現對各種閥門的分時控制,以實現不同分離方法下的系統運行及物質分離.縮短檢測時間,提高檢測效率。
固相萃取是當前常用的樣品前處理技術,分為在線和離線兩種方式,用于樣品的凈化、除雜和富集。離線固相萃取具有試劑用量少、易于SOP等優點。其缺點為SPE固相萃取柱僅能使用一次,操作麻煩。而在線固相萃取技術(online SPE)能把活化、平衡、除雜和洗脫等過程在封閉系統內自動化完成,減少人工操作帶來的誤差,減少處理過程污染,提高方法的準確性和精密度,不僅能大大加快樣品的前處理過程,而且SPE柱可重復使用,總的分析成本將大大降低;更為關鍵的是在線SPE柱比離線SPE萃取管柱效更高,分離度更好,樣品更干凈,更易于終的高效液相(HPLC)分離。
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