在競爭激烈的仿制藥市場，能否搶先進入市場十分關(guān)鍵。

正因如此，迅速了解原研產(chǎn)品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，確保我們的產(chǎn)品以最快的速度、最低的成本與參比制劑生物等效，十分重要。

但是為了維護商業(yè)地位，有些關(guān)鍵質(zhì)量屬性在原研的申報資料或說明書中并沒有介紹，或者被遮擋住了，該怎么辦？沒關(guān)系，今天我們就來學(xué)習(xí)一下如何運用逆向工程技術(shù)獲得我們想要的處方工藝信息。

大多數(shù)的口服固體劑型(例如片劑和膠囊)，是由有效成分和各種輔料組成，這些輔料雖然在臨床上沒有活性，但它們在藥學(xué)上是有活性的，可以影響藥物的產(chǎn)品性能，例如穩(wěn)定性和溶出速率等。

一些功能性輔料還有助于提高藥物的溶解度和生物利用度。

使用逆向工程技術(shù)，可以方便地確定處方中輔料的定量組成、活性藥物成分的固態(tài)表征以及處方的制備工藝。

（1）原研制劑各組分定量分析

當(dāng)我們無法通過資料獲取原研制劑處方的定量組成時，可以通過逆向工程進行定量檢測，下面來說說幾種處方定量的方法。

第一種方法是先根據(jù)經(jīng)驗，了解每種輔料的作用后，大概確定每種輔料的用量范圍，然后設(shè)計試驗處方，通過崩解、溶出、片厚等數(shù)據(jù)同原研的對比，來確定各輔料用量。

第二種方法是直接測定，我們可以采用元素分析法或者重量法對輔料進行定量。

例如處方中含有交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，我們就可以通過測定鈉離子的含量，來確定處方中交聯(lián)羧甲基纖維素鈉的含量。

再比如處方中含有微晶纖維素等不溶性輔料，則可采用重量法進行定量，選擇一種合適的溶劑，使其余成分溶解，而不溶解的微晶纖維素用量，就可以在過濾干燥后得出。該方法主要用到了各成分在不同溶劑中溶解度不同的原理。

離子色譜也是目前常用的辦法，結(jié)果較為精確。該方法可檢測到的常見陰離子有：F－、C1－、Br－、NO3－，PO43－、NO3－、甲酸、乙酸、草酸等。

（2）原料藥的固態(tài)表征

原料藥的固態(tài)性質(zhì)可分為分子水平以及顆粒水平，分子水平包括原料藥的晶型、水合物、溶劑化物等。分子間的排列以及自由能的差異可能會對藥物的溶解性、穩(wěn)定性以及生物利用度有一定的影響。

為了安全起見，仿制藥的開發(fā)過程應(yīng)當(dāng)盡量保持我們的原料藥與原研制劑中的原料晶型一致，以確保溶出度與穩(wěn)定性的相似，當(dāng)然，如果藥物晶型不同，但是對溶出、穩(wěn)定性以及吸收沒有影響，也是可以接受的。

可以使用X-射線粉末衍射、傅里葉變換紅外光譜、近紅外光譜和拉曼光譜、差示掃描量熱法、熱重分析等分析技術(shù)對原料藥的固態(tài)性質(zhì)進行表征。

當(dāng)原料藥有多個穩(wěn)定性較好的晶型時，需通過X-射線粉末衍射確定原研制劑中原料的晶型。

原料藥的粒徑分布直接影響生物利用度和溶出速率，粒徑減小或微粉化是提高難溶性藥物溶出度的常用方法。了解原研產(chǎn)品的原料藥粒度分布信息，有助于保證制劑的生物等效性。

但是由于制劑中存在的其余輔料，會對原料藥的測定產(chǎn)生干擾，所以基于光遮蔽和激光散射的常規(guī)化技術(shù)將不適用，因為它們無法區(qū)分原料藥和輔料顆粒。

唯一可行的技術(shù)就是顯微鏡技術(shù)。

在偏振光下，晶體藥物呈現(xiàn)雙折射模式，而許多輔料是非晶體的，因此不呈現(xiàn)雙折射模式。顯微鏡可以根據(jù)顆粒形狀和雙折射等特征來區(qū)分原料藥和輔料。

（3）制備工藝的確認

固體口服制劑可采用濕法制粒、干法制粒或直接壓片法進行生產(chǎn)，具體工藝取決于原料藥的穩(wěn)定性、原料藥占片劑總重量的比例以及物料的物理化學(xué)性質(zhì)（如流動性以及可壓性）。不同的制備工藝可以影響藥物在體外的溶出以及體內(nèi)的生物利用度，也會對藥物的穩(wěn)定性造成一定的影響。

對于制劑的制備工藝，可根據(jù)原料藥的理化特性進行推測。濕造粒工藝一般不適用于對濕熱敏感的藥物，混粉直壓一般不會用在低劑量的藥物制劑上，因為無法確保混合均勻。

我們也可以通過觀察片劑的切面來確定制備工藝，一般混粉直壓的切面要細一些，而干法制粒或濕法制粒的片劑切面要粗糙一些。

還可以將藥片放在介質(zhì)中進行崩解，一般產(chǎn)生單個顆粒的為混粉直壓工藝，而產(chǎn)生團聚顆粒的為干法制粒或濕法制粒工藝。

最后就是通過輔料進行判斷，干法制粒以及濕法制粒一般需要加入粘合劑，而一些混粉直壓處方中不含粘合劑，所以當(dāng)處方中不含粘合劑時，很可能使用了混粉直壓工藝。

以最快的速度開發(fā)出高質(zhì)量的產(chǎn)品，是我們每個制藥人都在追求的目標(biāo)，因為同一個項目，可能有很多家公司同時在做，所以質(zhì)量、成本以及上市速度成為了項目獲利的關(guān)鍵。

逆向工程是開發(fā)仿制藥、確保生物等效性的必備技能，每個制劑研發(fā)人員都應(yīng)該熟練的掌握，這樣我們才能夠更快、更準(zhǔn)地開發(fā)出高質(zhì)量的仿制藥。

當(dāng)然逆向工程也不是萬能的。

有時候即使你知道了處方組成、制備工藝等信息，但無論是輔料的廠家還是儀器的型號，都會對制劑的質(zhì)量屬性產(chǎn)生較大的影響，所以有時逆向工程不管用時，不妨多試幾個廠家的輔料或者儀器，可能會收獲意想不到的結(jié)果。

今天的內(nèi)容就講到這里啦，希望對大家有所幫助。

參考文獻：

[1]Bansal, Arvind, K. The Role of Reverse Engineering in the Development of Generic Formulations.[J]. Pharmaceutical Technology, 2005.