摘要: 近年來，創(chuàng)新單抗藥物成為研發(fā)與申報的熱點，與生物類似藥不同，其藥學(xué)研究和開發(fā)思路具有階段性和漸進(jìn)性的特點。自國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布《新藥Ⅰ期臨床試驗申請技術(shù)指南》( 2018 年第 16 號) 以來，隨著國內(nèi)創(chuàng)新單抗藥物研發(fā)的推進(jìn)，在創(chuàng)新單抗臨床準(zhǔn)入技術(shù)要求方面形成共識需要監(jiān)管部門和工業(yè)界進(jìn)行不斷的研究和探討。為了提高創(chuàng)新單抗藥物的研發(fā)與審評效率，規(guī)范申報資料要求，加快推進(jìn)創(chuàng)新藥物進(jìn)入臨床，筆者結(jié)合當(dāng)前創(chuàng)新單抗藥物申報臨床前溝通交流的藥學(xué)共性問題，以及審評實踐中臨床準(zhǔn)入安全性問題的關(guān)注點和基本考慮，提出以下建議供業(yè)界借鑒和探討。

單抗藥物具有靶向性強、特異性好、療效確切等優(yōu)點，在惡性腫瘤、自身免疫疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、感染性疾病等治療中發(fā)揮越來越重要的作用，成為全球生物制藥增長最快的領(lǐng)域，也是國內(nèi)外創(chuàng)新藥物研發(fā)和申報的熱點。隨著國內(nèi)創(chuàng)新單抗藥物研發(fā)不斷深入，以免疫檢查點靶點為代表的單抗藥物，已有多個產(chǎn)品獲準(zhǔn)上市。創(chuàng)新單抗藥物研發(fā)是一個探索性的研究過程，需要遵從循序深入，逐步遞進(jìn)的客觀規(guī)律。隨著國內(nèi)創(chuàng)新單抗藥物研發(fā)的推進(jìn)，在創(chuàng)新單抗臨床準(zhǔn)入技術(shù)要求方面形成共識需要監(jiān)管部門和工業(yè)界進(jìn)行不斷的研究和探討。

創(chuàng)新藥首次人體臨床試驗應(yīng)關(guān)注和保障受試者的安全，重點研究和評價影響藥物安全性方面的藥學(xué)問題。對于創(chuàng)新單抗藥物，申報臨床階段可能導(dǎo)致暫緩臨床試驗的藥學(xué)缺陷，如動物源性原材料存在潛在安全性風(fēng)險、細(xì)胞庫未充分表征和檢定、病毒滅活/去除驗證不能滿足安全性評價要求、缺乏對安全性相關(guān)質(zhì)量屬性的充分控制、雜質(zhì)殘留不能滿足藥典要求或存在安全性風(fēng)險擔(dān)憂、臨床試驗期間藥物不能保持穩(wěn)定、未建立藥理毒理批次和臨床試驗批次之間的可比性等。為了提高創(chuàng)新單克隆抗體的研發(fā)與審評效率，規(guī)范申報資料要求，加快推進(jìn)創(chuàng)新藥物進(jìn)入臨床，筆者結(jié)合當(dāng)前創(chuàng)新單抗藥物申報臨床前溝通交流的藥學(xué)共性問題，以及審評實踐中臨床準(zhǔn)入安全性問題的關(guān)注點和基本考慮，提出以下建議供業(yè)界借鑒和探討。

1.臨床試驗用藥物的制備

臨床試驗用藥物的制備條件應(yīng)當(dāng)遵循《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的通用原則，并根據(jù)臨床試驗期間藥物的研究特點，以最大限度降低生產(chǎn)環(huán)節(jié)引入的風(fēng)險，確保臨床試驗用藥物的質(zhì)量，保 障受試者的安全［1］。

臨床試驗用藥物的試制規(guī)模和批量應(yīng)結(jié)合工藝平臺經(jīng)驗、細(xì)胞培養(yǎng)方式、抗體表達(dá)量、純化收率、制劑規(guī)格、適應(yīng)癥和臨床試驗用藥方案等具體情況具體分析。藥物試制批次和批量應(yīng)滿足Ⅰ期臨床試驗用藥物的需求，同時應(yīng)滿足藥物質(zhì)量研究和評價的要求，并可結(jié)合工藝開發(fā)過程保證臨床試驗樣品制備工藝的穩(wěn)健性和重現(xiàn)性。

申報臨床階段應(yīng)對藥理毒理批次和臨床研究批次的工藝和質(zhì)量研究信息進(jìn)行分析比較，如有差異，需討論差異可能對臨床安全性造成的影響，從而為后續(xù)的人體試驗提供安全性方面的支持［2］。

2 細(xì)胞庫

細(xì)胞庫制備應(yīng)當(dāng)遵循《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的通用原則，可參考國內(nèi)外藥典和國際通用標(biāo)準(zhǔn)對細(xì)胞庫進(jìn)行檢定，確保無內(nèi)外源因子污染的風(fēng)險［2］。申報臨床階段可采用主細(xì)胞庫進(jìn)行藥理毒理和/或臨床試驗批次用藥物的制備［3］，伴隨臨床開發(fā)和研究進(jìn)展，建立工作細(xì)胞庫并進(jìn)行細(xì)胞庫變更橋接研究。初步的細(xì)胞庫傳代穩(wěn)定性研究結(jié)果應(yīng)可支持臨床試驗用藥物制備規(guī)模和條件下細(xì)胞生長和遺傳特性保持穩(wěn)定。

3 生產(chǎn)用原材料

對于臨床試驗用藥物試制過程中所使用的生產(chǎn)用原材料，應(yīng)明確名稱、來源、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、安全性等信息，提供證明性文件和/或質(zhì)控檢測報告等，并符合《中國藥典》的相關(guān)要求［2］，早期臨床試驗可結(jié)合供應(yīng)商檢驗報告和企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)對生產(chǎn)用原材料質(zhì)量進(jìn)行控制。盡可能避免在生產(chǎn)過程中引入人源或動物源性原材料，如使用( 包括細(xì)胞建庫使用的牛血清、豬胰酶等) ，需說明原材料來源以及在生產(chǎn)過程中的使用步驟，并進(jìn)行 TSE /BSE 安全性風(fēng)險評估［3］。

4 生產(chǎn)工藝和過程控制

單克隆抗體藥物具有相對平臺化的生產(chǎn)工藝，申報臨床階段生產(chǎn)工藝應(yīng)具備初步的穩(wěn)健性，保證臨床期間樣品質(zhì)量的相對穩(wěn)定，重點關(guān)注臨床樣品生產(chǎn)過程對病毒安全、微生物安全、無菌保障等方面的控制。根據(jù) EMA《臨床試驗用生物技術(shù)藥物病毒安全性評價指導(dǎo)原則》［4］和 FDA《Points to consider in the manu- facture and testing of monoclonal antibody products for human use》［5］，每批用于臨床試驗藥物制備的細(xì)胞培養(yǎng)收獲液均按照 ICH Q5A［6］的要求對病毒進(jìn)行檢測，如適用，應(yīng)包括基于體外法和 PCR 法的病毒檢測，以及逆轉(zhuǎn)錄病毒樣顆粒評估。根據(jù)細(xì)胞系的選擇類型和認(rèn)知程度，必要時進(jìn)行感染性逆轉(zhuǎn)錄病毒監(jiān)測和體內(nèi)法檢測。通常還需對臨床試驗批次細(xì)胞培養(yǎng)收獲液中微生物負(fù)荷/無菌、支原體、內(nèi)毒素等內(nèi)外源因子進(jìn)行常規(guī)監(jiān)測。

臨床早期開發(fā)階段生產(chǎn)工藝尚在摸索過程中，應(yīng)通過恰當(dāng)?shù)谋O(jiān)測手段來保證藥物質(zhì)量和受試者安全，如建立與藥物安全性相關(guān)的過程控制指標(biāo)( 如微生物限度、內(nèi)毒素等) 。對于無菌制劑的除菌過濾工藝步驟，除菌過濾前應(yīng)對微生物負(fù)荷進(jìn)行控制，除菌過濾后通過起泡點檢驗確認(rèn)過濾器的完整性。通過培養(yǎng)基模擬灌裝驗證確認(rèn)制劑生產(chǎn)工藝的無菌控制狀態(tài)。此外，如生產(chǎn)工藝過程中涉及工藝中間體貯存的情況，應(yīng)提供貯存條件和時間信息，并有初步的理化、生物學(xué)活性和微生物特性研究數(shù)據(jù)支持?jǐn)M定條件和貯存時間［3］。

5 病毒滅活/去除驗證

申報臨床階段可參考國內(nèi)外病毒安全性評價技術(shù)指導(dǎo)原則開展病毒滅活/去除驗證研究。研究和評價目的主要是對生產(chǎn)工藝過程中引入的病毒滅活/去除工藝的有效性進(jìn)行驗證和評估，并對病毒或病毒樣顆粒清除的總體水平和殘留風(fēng)險進(jìn)行評價。

通常情況下應(yīng)采用擬用于臨床試驗的代表性工藝批次中間體，至少對兩個正交、不同原理的病毒滅活 /去除工藝步驟進(jìn)行評估，并通過至少兩次獨立試驗證明病毒滅活 /去除效果的可重復(fù)性［7］。驗證用指示病毒應(yīng)選擇與已知被鑒定的病毒，或懷疑污染細(xì)胞系及其他試劑或材料的病毒，如不適用，可選擇與已知病毒或可疑病毒具有類似理化特性的特異“模型”病毒代替，以評估生產(chǎn)工藝去除 /滅活病毒的總體能力［6］。此外，還可選擇對于病毒滅活 /去除工藝步驟具有理化耐受性的指示病毒進(jìn)行驗證。對于CHO 細(xì)胞而言，一般應(yīng)至少選擇包膜病毒( 鼠白血病病毒) 和無包膜病毒( 鼠細(xì)小病毒) 開 展 病 毒 滅活 /去除驗證研究［4，7］。驗證研究工藝條件應(yīng)采用實際生產(chǎn)中確定的工藝參數(shù)最差條件，申報臨床階段往往生產(chǎn)工藝缺乏最差工藝條件的定義，也可證明采用生產(chǎn)工藝參數(shù)設(shè)定點代表實際生產(chǎn)工藝進(jìn)行驗證的合理性［4］。

對于臨床試驗用藥物的病毒安全性風(fēng)險評估，應(yīng)結(jié)合細(xì)胞庫病毒檢測、人源和動物源性物料病毒檢測、細(xì)胞培養(yǎng)收獲液中病毒或病毒樣顆粒檢測、病毒滅活去除驗證結(jié)果、每劑量病毒中病毒顆粒數(shù)量的估計等綜合考慮，并結(jié)合臨床擬申報適應(yīng)癥、給藥劑量、給藥頻率、人群暴露量、研究持續(xù)時間和患者免疫狀態(tài)等進(jìn)行評估［4］。

6 質(zhì)量研究

應(yīng)對臨床試驗藥物開展初步的結(jié)構(gòu)確證和質(zhì)量研究，對于單克隆抗體類藥物，通常包括一級結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)、高級結(jié)構(gòu)、理化特性、純度、翻譯后修飾、糖基化修飾、二硫鍵/自由巰基、產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)、工藝相關(guān)雜質(zhì)、生物學(xué)活性、免疫學(xué)特性等。研發(fā)早期應(yīng)結(jié)合平臺經(jīng)驗和產(chǎn)品知識，以及多批試制藥物的檢定數(shù)據(jù)等，擬定原液和制劑初步質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括鑒別、含量、理化性質(zhì)、純度、雜質(zhì)、生物學(xué)活性、安全性指標(biāo)等。針對與藥物安全性相關(guān)的關(guān)鍵質(zhì)量指標(biāo)( 如純度、雜 質(zhì)、內(nèi)毒素、無菌、微生物限度等) 應(yīng)擬定明確的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，對于產(chǎn)品質(zhì)量屬性與臨床風(fēng)險獲益相關(guān)性尚無認(rèn)知或不明確的( 如糖基化) ，可在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中報告數(shù)據(jù)，臨床開發(fā)期間進(jìn)一步積累數(shù)據(jù)并研究是否為產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)包括臨床作用機制相關(guān)的、可靠的并經(jīng)確認(rèn)的生物學(xué)活性質(zhì)控方法，廣泛的方法學(xué)驗證可在后續(xù)臨床開發(fā)過程中完善［3］。對于某些特定工藝相關(guān)雜質(zhì)( 如消泡劑) ，可結(jié)合理論添加量和工藝清除情況對殘留安全性風(fēng)險進(jìn)行評估。申報臨床階段應(yīng)對關(guān)鍵質(zhì)量屬性檢測方法進(jìn)行初步的驗證［2］，對于用《中國藥典》方法檢測的安全性質(zhì)控項目，應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)適用性驗證。

如藥理毒理批次和臨床批次采用不同的生產(chǎn)工藝，在產(chǎn)品開發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗有限的情況下，除了放行檢測項目以外，可結(jié)合工藝變更情況對變更前后批次開展針對性的特性鑒定研究［3］，評估并關(guān)注潛在質(zhì)量差異對受試者安全性方面的影響。早期臨床開發(fā)階段變更可比性研究往往不如批準(zhǔn)上市藥物更為廣泛、深入，因此鼓勵采用臨床試驗代表性批次開展非臨床研究［8］。 

7 穩(wěn)定性研究

申報臨床階段穩(wěn)定性研究結(jié)果應(yīng)能支持Ⅰ期臨床試驗的開展，可對臨床試驗用藥物的原液和制劑進(jìn)行長期、加速穩(wěn)定性研究。制劑長期穩(wěn)定性考察時長應(yīng)涵蓋藥物放行檢測、儲存和運輸、早期臨床試驗方案中給藥時間和間隔周期等。臨床開發(fā)期間其他支持性批次( 包括藥理毒理批次) 穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)，在藥物質(zhì)量和初步穩(wěn)定性降解特征可比的情況下，也可作為擬定臨床試驗用藥物保存條件和時間的依據(jù)。鼓勵臨床開發(fā)早期對影響因素和強制降解穩(wěn)定性進(jìn)行研究，有助于評估藥物的降解途徑和降解速率［3］，了解藥物在短期偏離儲存條件或極端條件下的穩(wěn)定性特征，以制定臨床試驗用藥物的生產(chǎn)、保存和運輸條件。穩(wěn)定性考察項目應(yīng)根據(jù)對藥物特點和認(rèn)知情況選擇穩(wěn)定性考察條件下敏感特異的指標(biāo)，并至少涵蓋蛋白含量、純度/雜質(zhì)、生物學(xué)活性、微生物屬性等關(guān)鍵項目。

申報臨床時應(yīng)提供涵蓋Ⅰ期臨床試驗給藥劑量和配伍方式的臨床使用穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)，試驗設(shè)計應(yīng)考慮臨床試驗用藥物的配伍方式( 稀釋液 /穩(wěn)定劑) 、存放條件、給藥方 式( 單 次 /多 次) 、給 藥 時間、輸注容器、藥物爬坡劑量等因素。穩(wěn)定性考察項目應(yīng)涵蓋涉及藥物關(guān)鍵質(zhì)控項目以及配伍過程和臨床使用引入的風(fēng)險因素( 如可見異物、不溶性微粒、微生物 限 度 等) 。此 外，還應(yīng)關(guān)注低給藥濃度或治療窗窄的藥物在配伍稀釋后藥液輸注容器的潛在蛋白吸附問題。 

8 容器密閉系統(tǒng)

申報臨床階段應(yīng)明確原液和制劑直接接觸包裝材料的來源、材質(zhì)、結(jié)構(gòu)組成、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等，并評估藥物活性成分和包裝材料之間的潛在相互作用，早期開發(fā)階段可結(jié)合穩(wěn)定性考察數(shù)據(jù)和供應(yīng)商可提取物、浸出物、生物相容性數(shù)據(jù)等對包材和藥物的相容性進(jìn)行風(fēng)險評估，全面規(guī)范的包材相容性和密封性研究可在臨床期間完善。

9 討論

近年來單克隆抗體藥物發(fā)展迅速，國內(nèi)單抗藥物臨床研發(fā)和注冊申報趨勢逐漸由生物類似藥向差異化創(chuàng)新藥轉(zhuǎn)變。創(chuàng)新單抗藥物在申報臨床階段，藥學(xué)方面應(yīng)重點關(guān)注影響受試者安全的質(zhì)量指標(biāo)［9］，如果藥學(xué)研究存在明顯安全性擔(dān)憂或研究數(shù)據(jù)不足以支持評估藥物的安全性，可能導(dǎo)致暫緩臨床試驗［10］。筆者通過梳理創(chuàng)新單抗藥物申報臨床階段藥學(xué)研究的共性問題，提出創(chuàng)新單抗藥物臨床準(zhǔn)入藥學(xué)技術(shù)要求和關(guān)注點供行業(yè)借鑒和探討，以期通過監(jiān)管機構(gòu)和工業(yè)界的共同努力，加快推進(jìn)創(chuàng)新單抗藥物進(jìn)入臨床試驗。