分析方法驗證是在藥品研發和新藥申報的關鍵技術資料之一，驗證方案設計是其中的重難點所在。在符合法律法規和監管機構要求的最根本前提下，采取不同的思路對于各種不同屬性的藥品和方法進行驗證設計都是可行的。本文試圖在合規性與驗證工作量的平衡中，尋找方法驗證中的合并設計方案，為大家提供一種參考的解決方案。

一、合并設計的理論基礎

本質上，分析方法驗證（包括確認、轉移）的根本目的在于向監管機構和自己證明所采用的方法是經過驗證，建立的方法適合于相應檢測要求，所獲得的分析檢驗結果是穩定和可靠的。

在分析方法驗證中，除法規和指南的最基本要求之外，還需要對分析方法程序中的風險點（如指南要求之外的樣品穩定性、濾膜吸附、殘留等）進行考察，覆蓋分析方法的設計用途（工藝驗證、放行檢測、穩定性考察等）和所檢測的所有樣品（包括原料藥、成品、中間過程控制樣品、穩定性考察樣品等）。

除專屬性以外，其他的核心驗證項目之間具有一些重復交叉的工作。如果按照指南的規定一步步地實現各驗證項目，當然是一種穩妥的方法，但可能會造成人力和時間成本的極大浪費。各個驗證項目之間的本質還是對試驗中的系統變量和/或隨便變量進行考察，因而具有聯合設計的可能，而且這種合并設計還具有很強的模塊性，有助于加深對方法驗證的理解。下面以常見的含量測定和雜質定量方法來談下合并設計的案例，包括準確度、精密度（包括重復性、中間精密度和重現性）、線性、范圍和一部分的定量限和耐用性等驗證項目。

二、合并設計的案例

表1中合并設計同時考慮到了含量水平、不同實驗員、不同試驗日期，進行常規方法設計中的線性、范圍、重復性、中間精密度和定量限的內容。同時通過在不同批次試驗中使用不同儀器（如HPLC）、耗材（如色譜柱）和試液（如流動相），對耐用性進行考察。4個分析批次的數據可以支撐同時得到以上驗證指標，各方法驗證項目的報告指標見表2。

三、合并設計的討論

合并設計并不是就一成不變的，其僅僅是一個思路，把分析方法驗證中的各種模塊整合起來而已。其可以進一步考慮多種因素進行調整，如：

1、以上含量水平、實驗員、日期、儀器、耗材、試液的設計僅為通常設計，均可以根據方法和樣品進行調整。如含量水平只需覆蓋質量標準即可；可以采用3名實驗員在不同日期分別執行1個分析批次；儀器可以根據實驗室實際情況調整臺數；耗材可以考慮不同廠家或同一廠家不同批次；試液的使用可以自行配置不同pH、鹽濃度，以進一步提高設計中的專屬性。

2、不同濃度各3份樣品為滿足ICH Q2（R1）、ChP 2020的最低要求。若為早期研發和IND階段的確證性方法驗證，則可以采取如圍繞測定值的50%、75%、100%、125%、150%五個點各3份平行樣品，僅100%的點在A1D1、A2D2各測6份樣品（2個分析批次，共12個數據）。該設計可以有效減少工作量，特別是質量標準和檢驗方法尚未完全確定的階段。考慮到法規上的風險點，可以只考慮在方法通量較小、工作量大的情況下進行簡化。

3、若為申請NDA上市的關鍵方法驗證（或分析通量不受限制），則可以均采用6份平行樣品進行測試（如100%水平，6份平行樣品為ICH Q2（R1）推薦的重復性的另一個標準）。加大樣品數量可以有效降低系統的隨機誤差，減小相對標準偏差的報告值，更有利于數據的合格。此外，還可以采用模塊化設計，即有不同實驗員在不同日期分別執行共4個分析批次50%、75%、100%、125%、150%五個點各6份平行樣品，當然這會在工作量上造成較大的提高。

4、分析方法驗證的耐用性部分可以考慮在分析方法開發時完成，可以考慮釆用均勻設計確定主要影響因素，再通過單因素分析等確定變動范圍，并在方法開發的最后階段應進行分析方法預驗證。在進行分析方法驗證、確認和轉移時應提交合規、完整的分析方法開發報告。減少的耐用性試驗工作可以用來完善中間精密度、重現性等試驗設計。

5、關于生物活性/效價的方法驗證，可以參見ChP 2020的9401 生物制品生物活性/效價測定方法驗證指導原則，其范例中對相對準確度、精密度、線性和范圍等4個指標的驗證進行合并設計，并有著十分完整的統計學思路。

6、關于方法驗證中的數據要求，建議結合一般的統計學分析如95%CI、殘差、概率、總誤差等，而不僅僅是報告回收率%和RSD%。關于統計學指標，部分可以參見作者以前的文章。

四、小結

對分析方法驗證進行合并設計，可以再和規定和工作量之間取得一個較好的平衡，并可以通過合并設計有效地解決方案設計中的思路問題，加深實驗人員對于驗證和項目的把控，并較少地破壞驗證的合規性，是值得大家進一步去思考的一種解決方案。

參考文獻

ICH Q2（R1）Validation of Analytical Procedures Text andMethodology

ChP 2020 9101 分析方法驗證指導原則

USP1200 Requirments for compendial validation

ChP 2020 9401 生物制品生物活性/效價測定方法驗證指導原則

alamo，分析方法驗證中的統計指標，藥事縱橫