正相硅膠柱層析，上樣分為濕法上樣和干法上樣。濕法上樣雖然方便，但是如果樣品不是液體，要預(yù)先用小極性溶劑溶解，可能會影響分離效果，很多樣品則無法溶解，此方法應(yīng)用范圍受到很大限制。干法上樣，即硅膠吸附法，則適用于大部分情況（硅膠是酸性的，對酸敏感的化合物不適合此方法）。因此硅膠拌樣是實驗室中必備的操作技能，但是你真的會拌樣嗎？拌樣為什么拌干很重要？拌樣如果沒有完全旋干大極性溶劑，則會嚴重影響柱層析的分離度！殘留的大極性溶劑相當于提高了最開始洗脫溶劑的極性。極端情況下，對于一些小極性的產(chǎn)物，如果殘留較多的大極性溶劑，樣品會直接會沖下來，白忙一場。另外即使殘留少量的溶劑也會明顯影響色帶的平整度，如果有Rf值相近的雜質(zhì)，則無法完全分開。

下面小編介紹一下拌樣的標準操作：首先，在圓底燒瓶中將混合物溶解在二氯甲烷中，二氯甲烷是最優(yōu)選擇，如果單純二氯甲烷無法溶解可以考慮加入少量乙酸乙酯或甲醇促溶。加入硅膠（硅膠的質(zhì)量大約是化合物質(zhì)量的兩倍，硅膠密度0.5左右，可以粗略量體積來確定量）。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮該溶液。（注意：硅膠是非常細的粉末，很容易被吸入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中。用脫脂棉塞住防濺球進行拌樣，但不要太緊）。當硅膠成均勻的流沙樣，且沒有氣體冒出時，說明固體已經(jīng)干燥，從旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上卸下燒瓶，再用真空泵將溶劑完全抽盡（注意：脫脂棉塞住抽氣頭，防止硅膠吸入油泵）。當硅膠再沒有氣泡產(chǎn)生時，從真空系統(tǒng)中取下燒瓶，用干凈的刮刀從壁上刮下固體。 進行上樣。

如果拌樣后，發(fā)現(xiàn)有結(jié)塊，說明硅膠的量可能不夠，可以重新加入溶劑溶解后，再補加硅膠重新拌樣。如果硅膠加入的量是足夠的（兩倍質(zhì)量），但是拌樣硅膠還是有結(jié)塊，說明樣品中有高沸點溶劑沒有除去，如1,4-二氧六環(huán)，單純的1,4-二氧六環(huán)可以用水泵旋掉，但是樣品中殘留的1,4-二氧六環(huán)被硅膠吸附，則單純用水泵很難完全旋干。這種情況可以考慮把旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的水泵換成油泵進行拌樣。總之，后處理時像1,4-二氧六環(huán)類似的具有相對較高的沸點的溶劑一定要在拌樣前除干凈，否則后患無窮。

總之，大極性的產(chǎn)物，沒拌干問題不大，小極性（PE:EA=10:1, Rf 大于0.3左右)的樣品，建議完全拌干，否則會嚴重影響分離度。