一、培養(yǎng)基溫度確定：

1.標(biāo)準(zhǔn)要求：熔化后的培養(yǎng)基放入47℃~50℃的恒溫裝置中冷卻保溫(可根據(jù)實(shí)際培養(yǎng)基凝固溫度適當(dāng)提高恒溫裝置溫度),直至使用,培養(yǎng)基達(dá)到47 ℃~50℃的時(shí)間與培養(yǎng)基的品種、體積和數(shù)量有關(guān)。(GB 4789.28-2024)

2.固體培養(yǎng)基傾注的溫度在45℃-50℃，怎么確定？

技巧：用手心輕輕碰一下盛固體培養(yǎng)基的三角瓶，感覺(jué)不燙，然后用手背也感覺(jué)一下，感覺(jué)燙手，這時(shí)的溫度大概是50℃。（口訣：手心不燙手背燙）。

3.為什么要確定培養(yǎng)基溫度？

溫度過(guò)高，培養(yǎng)基凝固時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，培養(yǎng)皿皿蓋上會(huì)出現(xiàn)大量冷凝水，不利于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

對(duì)于需要添加不耐熱的抗生素等試劑的培養(yǎng)基，溫度過(guò)高，試劑容易失效。

二、防止培養(yǎng)皿中有冷凝水：

1.待固體培養(yǎng)基降低溫度至45℃-50℃，開(kāi)始倒平板，此時(shí)水蒸氣蒸發(fā)速度減慢，皿蓋產(chǎn)生的水就少。

2.即使溫度至45℃-50℃，培養(yǎng)皿蓋還是有水蒸氣、還是會(huì)有水珠，怎么辦？倒平板的時(shí)候把皿蓋打開(kāi)，待全部倒完后，超凈臺(tái)里凝固5min后，關(guān)閉皿蓋，倒置放置，備用。（不嚴(yán)謹(jǐn)）

3.在倒培養(yǎng)基時(shí)，可以一個(gè)壘一個(gè)，靜置直到全部培養(yǎng)皿凝固，倒置備用。這種方法，除了最上面的皿蓋有水蒸氣，其余皿蓋都不會(huì)有水蒸氣產(chǎn)生。（專家不建議這樣操作）

三、預(yù)防培養(yǎng)基氣泡形成：

(1)滅菌之前，瓊脂粉要充分溶解。

(2)滅菌后待溫度降至50-60℃，輕輕沿壁搖勻，讓培養(yǎng)基整體沿著同一個(gè)方向搖起來(lái)，直到搖勻?yàn)橹埂?/span>

(3)滅菌之后，需要添加抗生素等試劑的培養(yǎng)基待溫度降至45-50℃，再加入抗生素等試劑，輕輕沿壁搖勻，讓培養(yǎng)基整體沿著同一個(gè)方向搖起來(lái)，直到搖勻?yàn)橹埂?/span>

(4)已經(jīng)產(chǎn)生好多氣泡，又消不掉的培養(yǎng)基，用微波爐等加熱設(shè)備重新加熱一下，溫度高了氣泡也就從培養(yǎng)基中跑出來(lái)啦。

四、倒平皿保持均一性：

傾注平皿要左三圈，右三圈的晃動(dòng)，注意不要把平皿蓋沾上，并且要輕輕晃動(dòng)。

五、具體對(duì)待：

前面幾點(diǎn)講了倒平皿的最適溫度保持在45-50度，但不同品牌的瓊脂質(zhì)量不一樣，同樣按照國(guó)標(biāo)中的配方瓊脂含量1.5%， 有些瓊脂凝固很快，有些凝固慢一些，還有環(huán)境溫度偏低，瓊脂凝固也會(huì)快一些，要根據(jù)實(shí)際情況，適當(dāng)調(diào)整瓊脂的含量，在室溫較低時(shí)我們所配的培養(yǎng)基瓊脂 用量就偏少一些，還有在倒平板和混勻時(shí)動(dòng)作要快一些，室溫實(shí)在太低，也可以把培養(yǎng)皿放到烘箱中適當(dāng)加熱一下（40度左右）。

六、培養(yǎng)基厚度：

1.傾注熔化的培養(yǎng)基至平皿中(直徑90 mm的平皿﹐通常要加入15mL~20 ml瓊脂培養(yǎng)基),使之在平皿中的厚度至少為3mm。如果平板需貯存，或者培養(yǎng)時(shí)間超過(guò)48h或培養(yǎng)溫度高于40℃,則需要傾注更多的培養(yǎng)基（GB4789.28-2024）。

但是具體操作如何把握，這是個(gè)難題？

技巧：倒平板的時(shí)候，鋪滿整個(gè)培養(yǎng)皿底部，稍微再倒一點(diǎn)點(diǎn)就是20mL，再稍微多倒一點(diǎn)點(diǎn)就是25mL，這個(gè)需要經(jīng)驗(yàn)，多倒幾次就能把握。