修訂背景，不止是亞硝胺

歐洲藥品管理局（EMA）于 7 月 25 日發布《活性物質的化學指南》（Guideline on the chemistry of active substances）。該指南的第一版在2016年11月就以定稿施行，指南的內容代表了當時EMA對藥品的活性物質（原料藥，API）質量的全方面要求。在2018年歐盟藥監網絡發現了沙坦類中存在亞硝胺雜質后，雖然不斷有與活性物質中亞硝胺雜質有關的文件出臺。但與申報直接相關的“活性物質的化學指南”這一文件沒有更新。直到在2022年EMA以Concept paper on the need for a single note for guidance on the chemistry of active substances宣告將對該指南進行修訂，且目標直指亞硝胺雜質。

但在這8年間EMA對API不只是看到亞硝胺這一個突出問題，也認識到其它對API質量有影響的要素。因此在征求意見稿中也有體現。

適用范圍暫未考慮特殊化學分子

該指南在第一版就以CTD的格式編寫，綜述了對在上市許可申請、原料藥主文件（ASMF）、歐洲藥典各論適用性證明（CEP）中要提交的API的藥學資料的要求。

指南的內容不適用于對臨床試驗申請階段的API的要求。

在本次征求意見稿中沒有修改“指南不適用于草藥、生物制品、生物技術產品、放射性藥物和放射性標記產品”這一句話，但如今有些特殊類別的藥品是否也應適用此指南應該有待商榷。如ADC藥物的載荷多數都是已有或創新的化學分子，理應也遵循本指南的要求，以免在ADC藥物的特有指南中出現矛盾。再如是否適用于合成多肽、合成RNA等（類似FDA定義的“specified biological products”）也應該更加明確。

修訂細節分析

指南的主體共有生產工藝、表征、質量控制、穩定性四大方面。從花臉稿可以看出征求意見稿的修訂大部分集中在生產工藝方面，在質量檢驗方面修訂的內容都是針對致突變雜質的增補內容。

1，生產工藝部分

（1）示意圖（Schematic representation of the manufacturing process）

在此段落，新增要求工藝示意圖應當包含API的全過程和每個中間體的生產步驟，且除第一版指南要求包括的原材料、中間體等的結構式之外，還要有相應的分子量。

在提到生產用試劑（all reagents）時著重寫了要包括耗盡劑（depletion agents）如疊氮化物的亞硝酸鹽。亞硝酸鹽與疊氮化物的反應一般不用于形成API結構的合成路線，而是作為一種在反應后淬滅過量疊氮化物的方法，而亞硝酸鹽也是亞硝胺雜質的來源。EMA在此也是提醒企業在控制雜質來源時要考慮所有會與合成主線有接觸的物質，包括那些只是起淬滅作用的輔助試劑。

還有一處修改是新增了“每個未分離的中間體都要在括號內呈現化學結構”，也就是提高了對中間體的結構明確的要求。在一些一鍋化合成路線的工藝中，由于反應連續進行使得中間體存在的時間很短，單獨分離出的價值不大。EMA要求對企業鑒別這些中間體結構可能是考慮到它們的結構對終產品的雜質譜研究也有價值。但一些處于過渡態的中間體（生成的瞬時就開始進行下一步反應）是在技術上就是無法分離鑒別的，只能通過自由基捕獲等反應側面論證或猜想其結構。對于這類情況，再要求在示意圖中標注鑒別出的結構就不合理了，需要EMA給出更具體的說明。

（2）序貫工藝流程的描述（sequential procedural narrative）

對工藝流程描述的要求有兩處主要新增：

一是相比第一版中物料的范圍（列舉了起始原料、中間體、溶劑、試劑、催化劑、加工助劑）進行了擴充。在刪除中間體的同時增加了耗盡劑、回收物料、氣體、用于淬滅(quench)或后處理（work-up）的物料。這些物料在企業內的風險評估和管理上都可能被定為低風險等級，但根據新指南，出口歐盟的企業可能需要根據最新的文獻和合成知識進行自查，并重新開展風險評級。

二是增加要求“對于每個生產步驟，所有試劑（包括耗盡劑）和催化劑的量也應以相對于起始物料/中間體的摩爾當量表示，特別是使用摩爾過量的物料。”。這一要求更多影響的是上市后階段，尤其是那些沒有用DOE這類工具研究物料的摩爾比范圍的情形。要注意的是這里要求的是所有試劑的投料摩爾比都要寫明，而除關鍵原輔料之外的物料可能不是企業研究控制的重點，這其實也是在上市后企業內發起變更的主要對象。若按EMA的要求寫明所有物料的摩爾比后，過去一些因不在CTD中寫明摩爾比的物料的變更都將不再只是進行企業內變更流程，還要按注冊變更的程序執行。

（3）回收（Recovery）

第一版指南對溶劑、反應物的回收的要求寫的非常簡單，只要求提供回收物料再使用時的質量標準。本次征求意見稿進行了擴寫，包括有：在流程圖、工藝描述中注明引入回收物料的位置；在風險評估中要有使用回收物料的影響。且建議最好在同一工藝步驟中使用回收來的物料，避免在最終生產步驟使用。

由于該指南也適用于在歐盟市場的上市后變更，因此對于已上市的藥品的API若想變更工藝增加回收物料的利用，就會較第一版時增加一定的難度。

（4）物料控制

物料控制是本次征求意見稿中修訂內容最多的小節，且多數都是增加描述。在總體上，新增要求“質量標準應說明物料的特性及其預期用途的適用性，以及物料所用的步驟。”但也特別說明了，通常不需要提交物料的分析方法的驗證數據。即使該物料對API的控制策略（例如，致突變雜質的去除）很重要，也只需要驗證結果的列表總結。

起始物料（Starting Material）

新增的要求“新增起始物料供應商必須得到批準”從字面意思應該是提高了此類變更的變更等級，但也是合理的，企業以后對起始物料的認定需要更加嚴謹。

對起始物料的質量研究，意見稿明顯新增了兩點要求：

除歐洲藥典的活性物質外，起始材料都要用最先進的技術解析結構。個人理解EMA已明顯不滿足過往對新物質用紅外、紫外、一維核磁氫譜和碳譜表征結構。但是對于哪些是最先進的技術EMA也沒有明確的說明，如何定義最先進？單晶衍射？二維核磁（如NOSY、COSY等）、雜原子核磁（如磷、氟譜等）？而且有的新出現的先進技術的成熟度也不一定夠，結果不一定就比舊技術更可信。

第一版在提到雜質研究時單獨舉例了異構體雜質，本次修訂又增加了致突變雜質。尤其是“關注隊列（cohort of concern）”的雜質，反映了EMA對這類雜質的研究程度的關注。“關注隊列雜質”是ICH的M7中提出的名詞，指的是一些結構基團具有較高的致癌性，即使攝入量低于 TTC 水平，理論上仍會具有高致癌風險，包括黃曲霉毒素類、N-亞硝基化合物，以及烷基-氧化偶氮基化合物。在雜質研究時，對含這些基團的雜質也必須要嚴格控制。

人源或動物源的起始物料（Starting materials of animal or human origin）

第一版指南對這類物料的要求只有需提供病毒安全性或TSE數據。本次征求意見稿也進行了較多的擴寫：

① 要建立并提供污染物/雜質檔案。

② 說明所用動物和動物部位的學名（種屬）信息，以及工藝中使用的溶劑、試劑和催化劑。也就是說還要提交在動物源材料的生產過程中更詳細的相關信息。

③ 質量標準應遵循歐洲藥典各論中規定的原則，以及可能存在的異物，應該討論微生物污染，總灰分，重金屬，環境污染物，放射性污染，殘留溶劑和其他相關雜質。這點是明確了對動物源材料的質量的關注點。

需注意的是，以上要求是對人源或動物源的起始物料，在一些企業的API中，其起始物料不是人源或動物源，但在起始物料的生產過程中用到了人源或動物源的物料。征求意見稿對此做了區分，只要求提供病毒安全性或TSE數據。

草藥來源的起始物料（Starting materials of herbal origin）

對于以植物來源為起始物料的產品工藝，新增的要求有三點值得關注：

① 在建立污染物檔案時“考慮到起始物料和半合成活性物質之間的化學步驟數”。雖然EMA沒有直接表露，但應該是希望減少對提取的天然產物進行的合成步驟。然而在起始結構既定的情況下，合成路線再優化的難度很大。如果歐盟真要逐漸明確限制半合成步數，企業在研發時就得尋找有更合適的起始結構的植物種屬。

② 如果起始物料是提取物，應說明第一步提取的主要提取溶劑和濃度。這樣的要求在發酵工程的提取工藝里已早有要求。且這里還會關聯到回收物料的問題，若下一批的第一步提取時用的是上一批的提取液回收而來，是否會有更多的特定要求都取決于對提取工藝和回收工藝的同時研究。

③ 在要考慮的霉菌毒素中，增加了黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A的舉例。明確了EMA對這兩種毒素的關注程度。

半合成活性物質（Semi-synthetic active substances）

這一段落是本次征求意見稿完全新增的內容，但字數并不多。它的定義是起始物料通過發酵或通過從生物物料中提取獲得。這個定義并不是很清晰，而且和前面已有的人源或動物源的起始物料有重合的嫌疑。半合成本來是區別于全合成的定義，因此半合成活性物質更應該定義為通過生物工程獲得前體后再經化學反應修飾的物質，或許還要限定是通過微生物發酵獲得的。

溶劑、試劑和其它物料

在這小節中提到的部分要求在上述各小節中其實都已出現過，沒有本質區別。但有兩種是被單獨提及的：水和蛋白胨。

水可以算是API生產過程中用量最大的物料，但對于不同工序應該用什么等級的水在很多公司也各有不同看法。征求意見稿也沒有給出比較明確的要求，還是推到了風險控制上。但是提供了可參考的指南的路徑，即EMA的指南Guideline on the quality of water for pharmaceutical use。

征求意見稿將蛋白胨認為是一種關鍵原料，要求說明其原產地（動物或植物）和來源（供應商名稱和地址）。從參考文獻看，這一修訂的來源是EMA的藥品質量問答中的原料藥生產中蛋白胨的使用問答。但微生物發酵是一個復雜的生物反應過程，作為培養基的碳源、氮源的物料都很重要。征求意見稿只提到蛋白胨也是不合理的，會給部分企業造成蛋白胨有著獨特的重要性的誤導。發酵培養基常用的酵母粉、棉籽粉等組成復雜的營養物質具有和蛋白胨同等的重要性，應予以相同的要求和重視程度。

（5）工藝開發

通過花臉稿可以看出EMA對這一小節也填補了很多內容，除對亞硝胺問題的要求，還有兩點簡單概括如下：

在CTD的該章節要提供的內容應當包括控制策略的各個要素的詳細描述。即API在開發時也應遵循Q11等的要求。

要提供選擇工藝和參數的合理性，包括對致突變雜質（特別是“關注隊列”雜質）和毒理學有關的副產物的討論。在征求意見稿的“4.3表征”章節中，再次提到了對致突變雜質的相應要求。

這兩點無疑還是推動企業（包括API生產企業）也要按QbD的原則進行API的開發，開發過程要做足研究。一些企業在用事實上的傳統方法開發出的工藝就難以滿足EMA對注冊資料的要求。

2，質量部分

該部分的內容包括對API的表征研究、質量控制、穩定性研究三個方面，第一版的內容都相對詳細。因此征求意見稿在這三章的內容中沒有做出較多的修改。只是在此基礎上增加了前文已出現過的致突變雜質的要求，而且在三個章節各自增加的內容都提到了“關注隊列”雜質，以下是概況總結：

① 表征：應當提供對致突變雜質（包括“關注隊列”雜質）的討論，并補充了亞硝胺的定量限應至少等于或遠低于毒理學要求的限度的規定。

② 控制：如果識別存在“關注隊列”雜質的風險，需要適當的控制措施。亞硝胺雜質可以不在常規放行時檢測（前提是根源明確，且滿足EMA的相應要求）

③ 穩定性研究：在研究期間核實指示性參數和質量標準的一致性。要關注在在儲存過程中可能形成或增加的任何“關注隊列”雜質或其他高毒雜質。

簡要總結

這份指南的第一版已經為企業的API的研發和生產提供了很多答案（也存在諸多爭議），如晶型鑒定要用哪些方法、要提供多少批次的數據等。從征求意見稿的修訂內容看，相較于檢驗，EMA還是對生產環節的關注點更多，這也符合QbD的原則。

雖然修訂的主旨是因亞硝胺雜質，但在全文，EMA都在強調企業要重視更多致突變雜質，尤其是“關注隊列”雜質。

生產部分新增的要求多數都是對注冊資料更嚴格的要求，確保API的潛在風險更多的能被識別。這些要求多數在科學上都是有道理的，但可能在現實的操作中還存在一些阻礙和分歧。

API和制劑企業應該采取積極的應對態度，一方面根據自身積累的經驗和數據對自己認為不合理或不充分的修訂內容進行反饋，提出自己的見解和意見。另一方面，對合理的內容盡早開始差距分析，制定可能需要的應對措施。由于還在征求意見階段，企業也要持續關注它的進展，期待正式定稿的到來。