給藥周期是毒理試驗設計的核心指標之一。關于給藥周期的要求，ICH多個指導原則都有相關描述。

先看下ICH M3重復給藥毒性研究部分對于給藥周期的要求。首先是支持臨床試驗的要求。如下表所示，重復給藥毒性試驗給藥周期有上限和下限。下限是，對于臨床持續周期≤2周，重復給藥毒性試驗則至少要持續2周。上限是，對于臨床持續周期>6個月，重復給藥毒性試驗倒不必一定與臨床一致，嚙齒類動物滿足6個月，非嚙齒類給夠9個月即可。對于2周-6個月之間的情況，與臨床周期一致即可。

也有些特殊情況特別說明一下。比如在美國，臨床僅單次用藥，非臨床研究可以采用拓展的單次給藥毒理研究設計。對于臨床研究持續<14天的情況，非臨床給藥周期可以與臨床保持一致。又如在歐洲，通常6個月非嚙齒類毒理研究可以支持臨床>6個月。在日本和美國，如果出現以下情況，6個月也可以作為最長非嚙齒類給藥周期，比如免疫原性或動物不耐受影響更長周期毒理試驗的正常開展，或間歇性治療偏頭痛、勃起功能障礙或單純皰疹這種短期重復暴露的情況，或慢性用藥為降低腫瘤復發風險，或用于預期壽命比較短的適應癥。

對于支持藥物上市的重復給藥研究周期，則參考下表要求。

生物制品臨床前安全性評價可參考ICH S6。給藥途徑和方案（如每天給藥vs間隔給藥）應該反映臨床擬定使用或者暴露情況。關于重復給藥毒性試驗的期限，應根據預期臨床暴露的期限和適應癥確定。大多數生物制品的動物給藥期限為1-3個月。對于計劃短期使用（如≤7天）或者治療急性危及生命疾病的生物制品，2周的重復給藥試驗可以支持其臨床試驗以及上市許可。對于擬用于慢性適應癥的生物制品，試驗期限一般為6個月。

抗腫瘤藥物非臨床評價參考ICH S9。抗腫瘤藥物通常采用的非臨床試驗給藥方案的實例，可應用于小分子藥物或生物藥物。下表展示了支持早期臨床試驗的非臨床給藥方案設計。按照這個表格，如果臨床每3-4周給藥1次，非臨床開展單次給藥毒理試驗即可支持IND，但也不絕對。以ADC為例，臨床多是Q3W給藥頻率，ICH S9問答中對于這類產品，建議至少給藥2次。

另外，關于支持后續臨床試驗和上市的毒理學研究期限。支持Ⅰ期臨床試驗的非臨床資料和Ⅰ期臨床資料通常足以支持進行Ⅱ期臨床試驗，和支持進入晚期腫瘤患者的二線或一線治療。為了支持用于晚期腫瘤患者抗腫瘤藥物的后續開發，在Ⅲ期試驗開始之前應提供符合臨床擬定方案的為期3個月的重復給藥毒性試驗結果。對于擬用于晚期腫瘤患者的大多數藥物來說，為期3個月的非臨床毒性試驗足以支持上市。

案例

先看下ADC類產品。

Kadcyla是由ImmunoGen/Roche公司開發的靶向HER2的ADC產品，通用名Trastuzumab emtansine，出現的比較多的名字是T-DM1。2013年2月22日獲批上市，用于HER2陽性乳腺癌的治療。T-DM1支持首次臨床試驗的IND采用的猴Q3W*4。當然，按照ICH S9的要求，Q3W*2即可。但考慮到猴重復給藥毒理試驗是2005年開展的，早于ICH S9，不一致也正常，至少是覆蓋ICH要求。支持BLA的動物試驗周期也是長于3個月，原因類似，猴Q3W*8重復給藥毒理試驗是2007年開展的，早于ICH S9頒布時間。不過，這個產品比較有意思的一點是，臨床一期選擇部分劑量探索了QW給藥周期，這個給藥頻率并沒有非臨床研究的支持。可能是基于前期臨床數據如PK、非臨床毒理試驗暴露量數據做的決策。

Besponsa是由Pfizer/Celltech公司開發的靶向CD22的ADC產品，通用名Inotuzumab ozogamicin。2017年8月17日獲批上市，用于急性淋巴細胞白血病的治療。支持Besponsa首次臨床試驗的大鼠和猴毒理研究均是QW*4，比較中規中矩。但支持BLA的毒理試驗選擇的QW*26，遠超過指導原則要求的3個月。

PADCEV是由Agensys/Seattle Genetics公司開發的靶向Nectin-4的ADC產品，通用名Enfortumab vedotin，毒素為MMAE。2019年12月18日獲批上市。這個產品給藥頻率和周期設計看著就比較舒服，無論給藥頻率還是持續周期都剛剛好，既沒有過度試驗，也沒有“缺斤少兩”。

Trodelvy是一款TROP2靶點的ADC，由吉利德開發，2020年3月獲批上市，用于三陰乳腺癌的治療。這個產品的臨床治療方案是QW*2，每3周1個療程，如此往復。按照ICH S9，每周1次，連續給藥3周，休息1周，QW*3的非臨床研究周期的設計即可。Trodelvy臨床每周1次，連續2周，休息1周，理論上QW*2或3即可。但該產品設計的動物試驗是Q3D*2，即過度暴露毒性。Q3D*2其實沒有達到臨床的給藥周期，感覺不如QW*2設計更穩妥。對于支持BLA的周期，滿足指導原則3個月的要求。

Enhertu是由一三共/阿斯利康公司開發的靶向HER2的ADC產品，通用名Trastuzumab deruxtecan，毒素為Dxd。2019年12月20日獲批上市。Enhertu的IND和BLA毒理試驗給藥次數較指南要求貌似多了1次，給藥持續周期偏長一點，整體算是與指南要求基本一致。

再看下抗腫瘤抗體。

先以2023年新晉藥王PD-1抗體Keytruda為例，非臨床重復給藥毒理研究開展了食蟹猴QW*5 doses（IND）、食蟹猴Q2W*6個月（BLA）。臨床期間探索的給藥方案為Q2W或Q3W，最終上市的方案為200mg, Q3W或400mg, Q6W。毒性不大的單抗QW給藥頻率比較常見，為臨床留下充分研究空間。尤其在IND階段，臨床擬用頻率還不確定。最終支持BLA的試驗，采用的Q2W*6個月設計，是比常規3個月的要求要長的。另一款PD-1抗體Opdivo，支持IND食蟹猴重復給藥毒理試驗的給藥頻率和周期與Keytruda類似，也是QW*5。但支持BLA的非臨床研究采用的BIW*3個月的設計，給藥周期較Keytruda短，給藥次數卻比Keytruda多一倍。其實，按照QW或Q2W，給藥3個月的設計，理論上就足以支持這類產品BLA。

舉兩個非抗腫瘤抗體的例子。

Aducanumab是一款治療阿爾茨海默病的單克隆抗體，靶向Aβ蛋白，商品名Aduhelm，2021年獲批上市。臨床每4周給藥1次，每次靜脈輸注1小時，給藥劑量10mg/kg。非臨床重復給藥毒理試驗的相關種屬為食蟹猴，關鍵研究內容包括：食蟹猴 QW*4靜脈給藥、轉基因小鼠QW*13靜脈給藥、轉基因小鼠QW*6個月靜脈給藥。前兩個試驗的啟動時間差不多，應該是支持IND的研究，最后選擇轉基因小鼠這一單一種屬的6個月毒理試驗支持BLA。

Lecanemab也是一款治療阿爾茨海默病的單克隆抗體，同樣靶向Aβ蛋白，商品名Leqembi，2023年獲批上市。臨床每2周給藥1次，每次靜脈輸注1小時，給藥劑量10mg/kg。關鍵的重復給藥毒理試驗內容有兩個，食蟹猴QW*5次靜脈給藥毒理研究和食蟹猴QW*40次靜脈給藥毒理研究，前者支持IND，后者支持BLA。

Aducanumab和Lecanemab兩個產品目標適應癥相似，Aducanumab的首次臨床試驗設計的單次給藥，21天觀察期。Lecanemab的首次臨床試驗包括單次給藥和多次給藥，多次給藥方案是Q4W*4（最高劑量10mg/kg設計的Q2W*7）。因此，Aducanumab非臨床QW*4的給藥頻率和持續周期理論上可以支持FIH設計。當然，小鼠試驗給藥周期是3個月，策略更為保險。Lecanemab的非臨床QW*5可以支持首次臨床試驗的Q4W*4，甚至Q2W*7的設計嗎？怎么感覺從給藥次數和周期都不甚符合呢。支持BLA的試驗，前者選擇了6個月嚙齒類研究，后者則選擇了9個月非嚙齒類研究，均滿足甚至超過非抗腫瘤生物藥物的給藥上限要求。可能會有人好奇，2期和3期臨床周期也很長，似乎沒有非臨床毒理數據支持。實際上，這兩個藥物的1個月重復毒理和6個月或9個月更長周期毒理試驗啟動時間前后就差一年，3期臨床之前試驗應該已經完成了。

再看兩款眼科類藥物的例子。

Aflibercept的中文名是阿柏西普，商品名Eylea，2011年獲批上市，用于濕性年齡相關黃斑變性、視網膜靜脈閉塞后黃斑水腫等疾病治療。臨床擬用方案為Q4W或Q8W，長期用藥，玻璃體內注射給藥。關鍵非臨床研究包括：食蟹猴13周玻璃體注射給藥（Q4W）、食蟹猴8個月玻璃體注射給藥（Q4W）、大鼠3個月皮下注射給藥、食蟹猴6個月靜脈注射給藥（QW）、食蟹猴4周皮下注射給藥（TIW）、食蟹猴3個月皮下注射給藥（BIW）、食蟹猴4周靜脈注射給藥（QW）、食蟹猴3個月靜脈注射給藥（QW）。Eylea的臨床1期試驗既包括健康人靜脈給藥，又包括年齡相關黃斑變性患者的玻璃體內注射給藥。給藥周期既有單次給藥，也有長期用藥。非臨床研究中，不太確定為什么開展了兩種系統給藥方式（SC和IV），理論上一種應該就滿足基本要求。從給藥周期看，3個月支持IND，8個月支持的BLA。

眼科藥物中還有一款明顯產品Ranibizumab，即雷珠單抗（Lucentis），上市時間是2006年，比Eylea更早。適應癥類似，給藥頻率Q4W。關鍵重復給藥毒理試驗內容包括：食蟹猴3個月玻璃體內注射（Q2W）、食蟹猴9周玻璃體內注射（Q2W*3+Q4W*1）、食蟹猴26周玻璃體內注射（Q2W），分別在1999、2000、2002年啟動的試驗。與Aflibercept類似，也是3個月支持IND。不過，支持BLA的毒理研究并未開展9個月那么久，僅6個月。當然，也是符合ICH S6對治療慢性病生物制品的上限要求，且給藥頻率比臨床擬用頻率更高。

最后看一個間歇性給藥的案例。

Rimegepant是一款CGRP小分子抑制劑，2020年2月獲批上市，用于急性偏頭痛的治療或預防，按需用藥。非臨床關鍵毒理研究包括六項，分別是大鼠1個月、3個月和6個月，食蟹猴1個月、3個月和9個月重復給藥毒理研究，給藥頻率均是QD。Rimegepant臨床1期方案是每天給藥1次，連續給藥14天。所以，大鼠和食蟹猴1個月毒理試驗是比臨床1期擬用周期和指導原則要求要長的，足以支持FIH試驗。3個月用于支持2期臨床。按照美國和日本監管機構要求，間歇性治療偏頭痛，非嚙齒類給藥6個月即可支持上市，但rimegepant依然開展了9個月的研究。可能與產品后續慢性偏頭痛預防等適應癥的開發有關，也可能是為了一次性滿足更多監管機構的要求。