在液相色譜分析過程中，常會(huì)出現(xiàn)下面9種色譜峰，你知道每種色譜峰產(chǎn)生的原因和解決辦法嗎？
一、峰拖尾
峰拖尾原因總結(jié)如下：
1、柱篩板堵塞：色譜柱的進(jìn)出口的篩板堵塞，樣品進(jìn)入色譜柱時(shí)會(huì)受阻，液體流動(dòng)受阻形成延遲，使得樣品在相中停留時(shí)間變長(zhǎng)，從而使峰型拖尾。
阻塞原因：
A、配置流動(dòng)相時(shí)污染。
B、型號(hào)規(guī)格插口不匹配，在扭緊的那時(shí)候造成形變而促使管道阻塞。
C、試品解決液清潔得不整潔，長(zhǎng)期性會(huì)在六通閥和柱中間產(chǎn)生堵塞受阻。
D、在應(yīng)用手動(dòng)式六通閥時(shí)，旋轉(zhuǎn)的不及時(shí)，因此導(dǎo)致流路產(chǎn)生了死堵，工作壓力迅速上升超出警示值。
E、應(yīng)用較高濃的緩存鹽溶液，在關(guān)機(jī)時(shí)將會(huì)在出入口端結(jié)晶體成塊并導(dǎo)致阻塞。
解決辦法：需要通過反沖色譜柱，或者更換篩板。
2、色譜柱塌陷：是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對(duì)物質(zhì)形成保留，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動(dòng)相流出，但是又還有一點(diǎn)柱效，因此形成拖尾。
色譜柱坍塌分為兩種：柱頭塌陷和相塌陷。
（1）柱頭塌陷：是指色譜柱使用較長(zhǎng)的一段時(shí)間后，由于填料中硅膠基質(zhì)或鍵合相的流失，導(dǎo)致柱床松動(dòng)，在單向壓力的作用下（色譜柱入口端承受絕大部分系統(tǒng)壓力而出口端壓力很?。?，整體表現(xiàn)為色譜柱的入口端出現(xiàn)填料缺失，嚴(yán)重時(shí)可看到填料的缺口。
柱頭塌陷原因：
A.由流動(dòng)相而不是由樣品引起的，因?yàn)闃悠返倪M(jìn)樣量很小，對(duì)填料損傷有限，不至于造成那么大量的硅膠基質(zhì)和鍵合相的流失，而流動(dòng)相的量很大，1.0mL/min的流速，如果pH超標(biāo)或在色譜柱pH耐受范圍臨界點(diǎn)附近長(zhǎng)時(shí)間使用，是比較容易造成柱頭塌陷的。
B.硅膠基質(zhì)的溶解規(guī)律是：
a、純水相的流動(dòng)相中硅膠的溶解度遠(yuǎn)大于帶有一定比例有機(jī)相的流動(dòng)相；
b、流動(dòng)相呈堿性比呈酸性更容易溶解硅膠基質(zhì)，pH>9的時(shí)候硅膠溶解顯著；
c、溫度越高硅膠越容易溶解，一般最好控制在40℃以下。
解決辦法：通常無法修復(fù)。
（2）相塌陷：是指常規(guī)C18柱長(zhǎng)時(shí)間用高含水量的流動(dòng)相(>90％)長(zhǎng)時(shí)間沖洗后，導(dǎo)致保留時(shí)間逐漸變短，最后可能在色譜柱上一點(diǎn)保留也沒有的現(xiàn)象。
相塌陷原因：在高含水量的流動(dòng)相條件下，由于C18長(zhǎng)鏈不溶于水，長(zhǎng)時(shí)間沖洗時(shí)，鍵合上去的C18長(zhǎng)鏈慢慢的相互聚集形成單獨(dú)的一相，水也單獨(dú)成一相，因此化合物在流動(dòng)相的帶動(dòng)下越來越難與C18長(zhǎng)鏈相互作用實(shí)現(xiàn)保留，最后一點(diǎn)保留都沒有就直接在死體積的位置被沖洗出來。
解決辦法：色譜柱出現(xiàn)了相塌陷后，通常用純乙腈或甲醇持續(xù)沖洗可以使出現(xiàn)相塌陷的色譜柱恢復(fù)到原來的狀態(tài)，但完全恢復(fù)需要比較長(zhǎng)的時(shí)間，通常30分鐘到1個(gè)小時(shí)是必須的。有一種更好的解決辦法是用丙酮做流動(dòng)相進(jìn)行沖洗，所需時(shí)間更短、效果更好。
3、色譜柱污染：即樣品不在同一起跑線起跑，從后面開始跑得到達(dá)終點(diǎn)稍晚，表現(xiàn)出拖尾。
污染原因：來源于流動(dòng)相污染及儀器長(zhǎng)時(shí)間未清洗導(dǎo)致色譜柱的污染。
解決辦法：更換色譜柱或者采用有機(jī)溶劑梯度洗脫1h以上沖洗柱子。
4、流動(dòng)相PH值選擇錯(cuò)誤：如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動(dòng)態(tài)平衡，或者兩種形態(tài)比例接近1：1時(shí)，離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會(huì)表現(xiàn)出拖尾。
原因：不適宜的流動(dòng)相PH。
解決辦法：調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離，改善拖尾.對(duì)于堿性化合物，可以選用相對(duì)較低的PH值更有利于得到對(duì)稱峰,也可以選用堿性試劑與固定相發(fā)生反應(yīng)，從而阻斷堿性化合物與固定性發(fā)生反應(yīng)。
二、 峰前沿
前沿峰原因總結(jié)如下：
1、樣品過載：被保留的樣品在正常出峰時(shí)間前陸續(xù)出來，形成前沿峰。降低樣品含量。
原因：
（1）色譜柱載量不夠；
（2）樣品濃度過大；
（3）進(jìn)樣量太大。
解決辦法：從上述三方面進(jìn)行優(yōu)化。
2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)：在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動(dòng)相的洗脫力較弱時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰。選擇流動(dòng)相或者接近流動(dòng)相的比例作為樣品溶劑。
原因：溶劑的洗脫能力大于流動(dòng)相。
解決辦法：
（1）選擇合適的溶劑溶解樣品；
（2）降低進(jìn)樣量；
（3）調(diào)整流動(dòng)相的有機(jī)比例。
3、色譜柱損壞：色譜柱損害嚴(yán)重，不能對(duì)化合物形成保留。
原因：色譜柱使用后未及時(shí)清洗等。
解決辦法：更換色譜柱。
4、包峰：由于分析方法不適宜導(dǎo)致在主峰前有很多小峰出現(xiàn)，假象前沿峰（非其他因素引起的前沿），大峰包埋了沒有分開的小峰。
解決辦法：優(yōu)化分析方法。
三、形成倒峰
倒峰原因總結(jié)如下：
1、樣品折射率?。菏静钫酃鈾z測(cè)器測(cè)的信號(hào)是折射率小的物質(zhì)。
原因：
（1）組分的折射率小于流動(dòng)相。（通常是水引起的）
（2）密度不一樣，出來的峰正倒不一樣。
解決辦法：通常不需要解決。
2、進(jìn)樣所致：進(jìn)樣時(shí)，樣品對(duì)原有流動(dòng)相產(chǎn)生瞬間阻斷，然后瞬間涌流，所以產(chǎn)生先倒后高的“溶劑峰”。
原因：斷流。
解決辦法：不需要解決。
四、包裹峰/嚴(yán)重拖尾峰
包裹峰/嚴(yán)重拖尾峰原因總結(jié)如下：
1、色譜柱問題：色譜柱基質(zhì)流失，或者色譜柱被真菌污染。
解決辦法：更換色譜柱。
2、樣品未全部溶解或者溶解度低：溫度、溶解都可能會(huì)影響到溶解度。
原因：室溫過低、樣品溶解性差。
解決辦法：選擇合適溶解來溶解樣品。
3、流動(dòng)相混合不均勻：一般是流動(dòng)相沒配好，管路流動(dòng)相不均勻，也會(huì)導(dǎo)致上述現(xiàn)象。
解決辦法：
（1）充分混合流動(dòng)相，如果組分較復(fù)雜，手動(dòng)混勻時(shí)間、超聲脫氣時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)。
（2）兩項(xiàng)或多項(xiàng)在儀器內(nèi)無法混勻時(shí)，可選擇手動(dòng)提前混勻，該流動(dòng)相不可以選用儀器進(jìn)行混合。
五、基線向上或向下漂移
基線向上或向下漂移原因總結(jié)如下：
1、色譜柱柱溫不穩(wěn)定：色譜柱柱溫未穩(wěn)定會(huì)導(dǎo)致示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器產(chǎn)生波動(dòng)，因此會(huì)導(dǎo)致基線的飄逸。
原因：柱溫波動(dòng)。
解決辦法：
（1）選擇可以控溫的柱溫箱；
（2）增加柱溫平衡時(shí)間，一般為30min；
（3）在檢測(cè)器之前使用熱交換器。
2、流動(dòng)相中有機(jī)相和水相為完全混勻：流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。
解決辦法：
（1）充分混合流動(dòng)相，如果組分較復(fù)雜，手動(dòng)混勻時(shí)間、超聲脫氣時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)。
（2）兩項(xiàng)或多項(xiàng)在儀器內(nèi)無法混勻時(shí)，可選擇手動(dòng)提前混勻，該流動(dòng)相不可以選用儀器進(jìn)行混合。
（3）使用HPLC級(jí)的溶劑，流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣處理。
3、流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。
解決辦法：
（1）排氣。
（2）用甲醇、乙腈或其他極性強(qiáng)的有機(jī)溶劑，也可以用0.1N的硝酸(不要用鹽酸)，進(jìn)行清洗流通池。
4、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化：更改流動(dòng)相配比或流速。
解決方法：可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。
5、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)：以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐 步升高的基線。
解決辦法：
（1）使用保護(hù)柱。
（2）如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中， 定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
6、波長(zhǎng)的設(shè)置問題：低波長(zhǎng)時(shí)，由于有機(jī)溶劑的比例增加，隨之基線也會(huì)發(fā)生漂移，高波長(zhǎng)時(shí)， 基線相對(duì)平穩(wěn)。
解決辦法：設(shè)置高波長(zhǎng)。
六、峰展寬
峰展寬原因總結(jié)如下：
1、色譜柱污染或柱校降低 色譜柱的污染會(huì)造成塔板數(shù)降低，引起峰展寬現(xiàn)象。
解決辦法：更換同樣類型的色譜柱，如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。
2、柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大會(huì)引起寬峰現(xiàn)象。
解決辦法：更換內(nèi)徑較小的短管路。
3、檢測(cè)器或流通池體積過大：
解決辦法：減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池。
4、溶劑洗脫能力比較低
原因：流動(dòng)相洗脫力不足導(dǎo)致化合物保留時(shí)間延長(zhǎng)引起寬峰。
解決辦法：選用洗脫力強(qiáng)的溶劑：乙腈、四氫呋喃等。
七、噪音過大
噪音過大原因總結(jié)如下：
1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有氣泡
解決辦法：流動(dòng)相脫氣，沖洗系統(tǒng) 以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。
2、系統(tǒng)漏液：檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正 常的噪音。
解決辦法：檢查色譜柱是否有漏液，檢查單向閥是否有鹽洗出，檢查流動(dòng)相瓶中過濾頭是否有持續(xù)的小氣泡，檢查檢測(cè)器流出管路是否有氣泡，如有必要，更換泵密封。
3、流動(dòng)相沒混勻
解決辦法：用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑，增加超聲時(shí)間。
4、柱溫異常、檢測(cè)器溫度異常
解決辦法：使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱交換器。
5、偶然噪聲：進(jìn)行斷電檢查，液相、檢測(cè)器等，追溯干擾的外部來源，加以調(diào)整。
解決辦法：采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源。
八、色譜峰之間分離度降低
色譜峰之間分離度降低原因總結(jié)如下：
1、分析方法梯度洗脫程序不合理：快速洗脫往往會(huì)使分離度不夠。
解決辦法：優(yōu)化梯度洗脫程序，采用緩慢洗脫方式，要么延長(zhǎng)時(shí)間，要么降低流速。
2、流動(dòng)相微生物污染：
解決辦法：含有有機(jī)銨鹽-乙酸的流動(dòng)，通常需要現(xiàn)用先配，長(zhǎng)時(shí)間不用會(huì)導(dǎo)致PH或者鹽濃度發(fā)生變化，降低分離度，需重新配置流動(dòng)相。
3、保護(hù)柱或分析柱阻塞：
解決辦法：
（1）更換新的保護(hù)柱進(jìn)行分析，
（2）如果是分析柱阻塞，更換色譜柱。
九、分叉峰
分叉峰原因總結(jié)如下：
原因：
1、樣品或色譜柱污染。
2、溶劑效應(yīng)。
3、色譜柱過載。
4、色譜柱塌陷
5、色譜柱兩個(gè)接頭沒有安裝好。
6、色譜柱性能下降。
7、柱前篩板部分堵塞。
解決辦法：從上述原因，逐個(gè)排除。
