高斯曲線是正態(tài)分布中的一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。色譜實(shí)驗(yàn)中的色譜峰在理論上應(yīng)該符合其分布。因此理論塔板數(shù)也是色譜系統(tǒng)適用性一項(xiàng)重要表征。不過(guò)，實(shí)際上由于儀器死體積的存在，以及儀器部件和固定液對(duì)樣品的吸附效果等因素，色譜實(shí)驗(yàn)中的大多數(shù)色譜峰都對(duì)高斯曲線分布存在一定的偏離，產(chǎn)生峰的不對(duì)稱現(xiàn)象。色譜實(shí)驗(yàn)中的色譜峰存在前延、對(duì)稱、拖尾三種形態(tài)，因此這種不對(duì)稱現(xiàn)象更能說(shuō)明色譜峰形狀態(tài)。

各國(guó)藥典對(duì)色譜實(shí)驗(yàn)中色譜峰的狀態(tài)一般用不對(duì)稱因子、拖尾因子、對(duì)稱因子來(lái)衡量。對(duì)于藥物分析色譜實(shí)驗(yàn)，如果排除溶劑因素和物質(zhì)吸附或鍵合相尾部效應(yīng)等因素，單純從色譜柱填充效果來(lái)看，如果色譜柱前面填的緊密，后面填的疏松，即便有效塔板數(shù)合格，那么峰顯示處后拖尾，如果色譜柱前面填得疏松，后面緊密，則峰顯示前拖。通常有明確的規(guī)定，拖尾因子應(yīng)處于某一范圍內(nèi)。

高斯曲線

拖尾因子

拖尾因子是用于評(píng)價(jià)峰形對(duì)稱性的一個(gè)參數(shù)。美國(guó)藥典、歐洲藥典和中國(guó)藥典均對(duì)拖尾因子作出了規(guī)定。

美國(guó)藥典是從色譜峰的頂點(diǎn)作一條曲線與基線垂直，再于峰高5%處做一條與基線平行的直線，與峰兩邊的交點(diǎn)和垂線的交點(diǎn)將這條直線分成兩條線段，A表示左線段的長(zhǎng)度，B表示右線段的長(zhǎng)度，如圖[南藥課件]所示。USP拖尾因子用T表示，則計(jì)算公式為T=(A+B)/2A。

色譜峰USP拖尾因子計(jì)算圖

當(dāng)A＝B時(shí)，T=1，此時(shí)認(rèn)為色譜峰是對(duì)稱的；

當(dāng)A＞B時(shí)，T＜1，此時(shí)認(rèn)為色譜峰是有前延趨勢(shì)的；

當(dāng)A＜B時(shí)，T＞1，此時(shí)認(rèn)為色譜峰是有拖尾趨勢(shì)的。

中國(guó)藥典指從色譜峰的頂點(diǎn)作一條曲線與基線垂直，再于峰高5%處做一條與基線平行的直線，與峰兩邊的交點(diǎn)和垂線的交點(diǎn)將這條直線分成兩條線段，分別叫作前半峰和后半峰，d1表示前半峰的長(zhǎng)度，W0.05h是5%峰高處的峰寬，如圖所示。CP拖尾因子用T表示，則計(jì)算公式為T=W0.05h/2d1。

色譜峰CP拖尾因子計(jì)算圖

當(dāng)前半峰長(zhǎng)度＝后半峰長(zhǎng)度時(shí)，T=1，此時(shí)認(rèn)為色譜峰是對(duì)稱的；

當(dāng)前半峰長(zhǎng)度＜后半峰長(zhǎng)度時(shí)，T＜1，此時(shí)認(rèn)為色譜峰是有前延趨勢(shì)的；

當(dāng)前半峰長(zhǎng)度＞后半峰長(zhǎng)度時(shí)，T＞1，此時(shí)認(rèn)為色譜峰是有拖尾趨勢(shì)的。

可以看出USP和CP對(duì)拖尾因子的表征不同，從公式上看，計(jì)算方式的一樣的，兩者沒有區(qū)別。

不對(duì)稱因子

不對(duì)稱因子是用于評(píng)價(jià)峰形不對(duì)稱性的一個(gè)參數(shù)，其與拖尾因子的概念接近。美國(guó)藥典中從色譜峰的頂點(diǎn)作一條曲線與基線垂直，再于峰高10%處做一條與基線平行的直線，與峰兩邊的交點(diǎn)和垂線的交點(diǎn)將這條直線分成兩條線段，A表示左線段的長(zhǎng)度，B表示右線段的長(zhǎng)度，不對(duì)稱因子用As表示，則計(jì)算公式為As=B/A。

色譜峰不對(duì)稱因子計(jì)算圖

當(dāng)A＝B時(shí)，As=1，此時(shí)認(rèn)為色譜峰是對(duì)稱的；

當(dāng)A＞B時(shí)，As＜1，此時(shí)認(rèn)為色譜峰是有前延趨勢(shì)的；

當(dāng)A＜B時(shí)，As＞1，此時(shí)認(rèn)為色譜峰是有拖尾趨勢(shì)的。

中國(guó)藥典中并沒有提到不對(duì)稱因子這個(gè)概念，其實(shí)上也可以類似于USP規(guī)定10%峰高處取值計(jì)算，或者認(rèn)為拖尾因子就是不對(duì)稱因子。

對(duì)稱因子

對(duì)稱因子這個(gè)參數(shù)比較特殊，各種色譜儀器、各國(guó)藥典的說(shuō)法也是不一致的。美國(guó)藥典中的一種說(shuō)法是對(duì)稱因子是不對(duì)稱因子的倒數(shù)（一般很少用）。而日本藥典和歐洲藥典都是對(duì)對(duì)稱因子進(jìn)行規(guī)定，其計(jì)算公式和USP拖尾因子是一致的。下圖是歐洲藥典對(duì)對(duì)稱因子的規(guī)定。

歐洲藥典對(duì)對(duì)稱因子的規(guī)定

Agilent的ChemStation工作站中的對(duì)稱因子是按圖下進(jìn)行計(jì)算的，Waters的Empower工作站中的對(duì)稱因子和拖尾因子是一致的。Thermo的Chameleon工作站中并沒有對(duì)稱因子參數(shù)，其是以不對(duì)稱因子來(lái)評(píng)估色譜峰的前延和拖尾，并且需要說(shuō)明的是此處的不對(duì)稱因子的計(jì)算公式與拖尾因子是一致的。

安捷倫色譜工作站對(duì)稱因子計(jì)算方法

對(duì)稱因子是因標(biāo)準(zhǔn)、因規(guī)定而變動(dòng)的，其不像拖尾因子和不對(duì)稱因子計(jì)算方法是相對(duì)固定的。

拖尾因子、對(duì)稱因子和不對(duì)稱因子規(guī)定范圍探討

我們常說(shuō)中國(guó)藥典要求拖尾因子的范圍是在0.95~1.05 ，其實(shí)藥物分析色譜工作者往往忽略了一點(diǎn)——CP對(duì)拖尾因子的規(guī)定要求是存在一個(gè)定語(yǔ)限制的，即中國(guó)藥典規(guī)定峰高法定量時(shí)拖尾因子應(yīng)該在0.95-1.05之間,低于0.95為前延峰,高于1.05為拖尾峰。藥物分析色譜實(shí)驗(yàn)中一般認(rèn)為拖尾因子小于2.0的色譜峰是可以按峰面積進(jìn)行準(zhǔn)確定量的。不過(guò)，具體還是需要結(jié)合化合物自身特性、理論塔板數(shù)、分離度等因素規(guī)定具有限度意義的拖尾因子值。

歐洲藥典和英國(guó)藥典規(guī)定進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)或含量測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外。色譜圖中定量用對(duì)照品溶液色譜峰對(duì)稱因子應(yīng)為0.8~1.5。

美國(guó)藥典中出現(xiàn)了對(duì)某些化合物拖尾因子要求不大于2.0。

日本藥典中并沒有具體規(guī)定拖尾因子的范圍。

從各國(guó)藥典對(duì)拖尾因子范圍的約束來(lái)看，拖尾因子并沒有一個(gè)數(shù)值范圍的金標(biāo)準(zhǔn)，在實(shí)際的色譜實(shí)驗(yàn)中還是需要具體問(wèn)題具體分析。

結(jié)語(yǔ)

不管是拖尾因子、對(duì)稱因子還是不對(duì)稱因子，我們的目標(biāo)都是以其判斷色譜峰的對(duì)稱或不對(duì)稱性。無(wú)論采用哪種參數(shù)，只有采用同一種參數(shù)比較不同色譜峰峰形

才有實(shí)際意義。理論上，藥物分析色譜實(shí)驗(yàn)中一般都使用拖尾因子來(lái)判斷色譜峰峰形。而拖尾因子或者與拖尾因子計(jì)算方法一致的不對(duì)稱因子或?qū)ΨQ因子都是由各個(gè)色譜工作站自動(dòng)計(jì)算而得。因此只要掌握了各個(gè)色譜工作站中關(guān)于色譜峰峰形判斷的標(biāo)準(zhǔn)，就能根本上區(qū)分拖尾因子、不對(duì)稱因子和對(duì)稱因子，以便合規(guī)和準(zhǔn)確地以這些參數(shù)判斷色譜峰峰形。