摘要

目的：比較吸入氣霧劑遞送劑量均一性考察中不同抽樣方案的差異。

方法：匯總2020年版《中國藥典（四部）》（簡稱ChP）、《European Pharmacopoeia11.0（VolumeⅠ）》（簡稱EP）/《British Pharmacopoeia2023（VolumeⅢ）》（簡稱BP）、《USP-NF online2024》（簡稱USP）及我國進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)（簡稱JX）中吸入氣霧劑遞送劑量均一性考察的抽樣方案和判定標(biāo)準(zhǔn)。以硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑為例，按ChP及USP抽樣方案分別測定4家企業(yè)（企業(yè)A，B，C，D）6批樣品的遞送劑量均一性。采用蒙特卡洛模擬法進(jìn)行數(shù)據(jù)模擬，并繪制工作特性曲線。

結(jié)果：按ChP抽樣方案，樣品的遞送劑量均一性均符合規(guī)定；按USP抽樣方案，僅企業(yè)C有1批樣品的平均遞送劑量不符合規(guī)定（低于70µg），且與企業(yè)D樣品比較差異顯著（P<0.05）。ChP的工作特性曲線較其他3種判定標(biāo)準(zhǔn)更寬，接受區(qū)域更廣；EP/BP與JX抽樣方案第一階段接受概率和總接受概率均較接近；USP與JX抽樣方案在標(biāo)準(zhǔn)差較小（≤6）時(shí)幾乎相同，隨著標(biāo)準(zhǔn)差的增大，前者的第一階段接受概率和總接受概率下降程度更顯著，在標(biāo)準(zhǔn)差≥10的情況下，其總接受概率<90%。

結(jié)論：不同抽樣方案對吸入氣霧劑遞送劑量均一性的接受概率存在一定差異，USP較ChP，EP/BP，JX對變異較大的產(chǎn)品容忍度更低。

關(guān)鍵詞

吸入氣霧劑；藥典；遞送劑量均一性；抽樣方案；工作特性曲線；蒙特卡洛模擬法

吸入氣霧劑是指原料藥或原料藥和附加劑與適宜拋射劑共同封裝于具有定量閥門系統(tǒng)和一定壓力的耐壓容器中，形成溶液、混懸液或乳液，使用時(shí)借助拋射劑的壓力，將內(nèi)容物呈霧狀物噴出而用于肺部吸入的制劑[1]。大多為多劑量貯庫型定量閥門氣霧劑，為“藥械合一”的復(fù)雜制劑，每次僅釋放1個(gè)劑量。遞送劑量是指1個(gè)單位劑量的藥物從吸入制劑的口含器中釋放出的藥物量，是評估患者可能吸入藥物劑量的重要指標(biāo)。遞送劑量均一性反映同一批次產(chǎn)品罐內(nèi)、罐間遞送劑量的差異，通過檢測多個(gè)撳次點(diǎn)的釋藥劑量，以確認(rèn)吸入制劑在整個(gè)使用過程中不同給藥撳次間的遞送劑量是否具有均一性。通過遞送劑量及遞送劑量均一性檢查，可保證制劑在使用過程中遞送藥物劑量的準(zhǔn)確性，從而避免單次給藥劑量過高或過低引起安全性或有效性問題。2020年版《中國藥典（四部）》（簡稱ChP）通則0111吸入制劑[1]、《European Pharmacopoeia11.0（Vol-umeⅠ）》[2]（簡稱EP）及《British Pharmacopoeia2023（VolumeⅢ）》[3]（簡稱BP）》均要求控制罐內(nèi)及罐間遞送劑量的均一性，《USP-NF online2024》[4]（簡稱USP）吸入氣霧劑項(xiàng)下要求控制遞送劑量的均一性。目前，對于遞送劑量均一性的抽樣原則和判定標(biāo)準(zhǔn)，均采用兩階段計(jì)數(shù)型判定法（其中EP和BP的抽樣方案和判定標(biāo)準(zhǔn)均相同）。ChP和EP/BP通常為10-30法；USP在不同的各論項(xiàng)下曾見20-60法[5]，在我國進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)（簡稱JX）中偶見20-40法[6-8]。上述方法規(guī)定的限度不同，造成判定標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，給檢驗(yàn)及審評工作帶來了困惑和挑戰(zhàn)。鑒于此，本研究中以硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑為例，采用ChP通則0111項(xiàng)下單位劑量取樣裝置（DUSA），按ChP（EP及BP抽樣方案與之類似）及USP抽樣方案（JX抽樣方案與之類似）分別測定不同企業(yè)硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑的遞送劑量均一性；匯總了ChP，EP/BP，USP，JX中吸入氣霧劑遞送劑量均一性的抽樣方案和判定標(biāo)準(zhǔn)；采用蒙特卡洛數(shù)據(jù)模擬方法[9-10]進(jìn)行數(shù)據(jù)模擬，并繪制工作特性曲線，以期為吸入氣霧劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂、藥品復(fù)核檢驗(yàn)及藥物評審提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下。

1遞送劑量均一性測定

1.1 儀器與試藥

儀器：Ultimate3000型高效液相色譜儀（美國Thermo Fisher Scientific公司，配有四元泵、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、紫外檢測器和Chromeleon7色譜工作站）；XS205DU型電子天平（精度為0.01mg），SevenEasy型pH計(jì)，均購自瑞士Mettler Toledo公司。

試藥：硫酸沙丁胺醇對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100328-201804，含量99.4%）；硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑[企業(yè)A，B，C各1批，企業(yè)D（原研）3批，編號分別為a，b，c，d1，d2，d3]；甲醇為色譜純，磷酸二氫鈉、磷酸為分析純，水為純化水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil BDS C18柱（200mm×4.6mm，5µm）；流動(dòng)相：0.08mol/L磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)pH至3.10±0.05）-甲醇（85∶15，V/V）；流速：1.0mL/min；檢測波長：276nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：100µL。

1.2.2 溶液制備

對照品溶液：取硫酸沙丁胺醇對照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為1µg/mL的溶液，即得。

供試品溶液：1）ChP方案。（1）罐內(nèi)供試品溶液。取樣品1罐，充分振搖，棄去3撳，收集1撳，用流動(dòng)相清洗回收橡膠接頭、濾紙及DUSA內(nèi)部，合并洗液，置100mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容，搖勻，過濾，即得第1撳的供試品溶液。按上述步驟同法制備第2，3撳的供試品溶液。棄去94撳（第4~97撳），取下藥罐，用甲醇沖洗閥門及驅(qū)動(dòng)器，充分干燥，棄去2撳（第98，99撳），同法制備第100~103撳的供試品溶液。再棄去92撳（第104~195撳），取下藥罐，用甲醇沖洗閥門及驅(qū)動(dòng)器，充分干燥，棄去2撳（第196~197撳），同法制成第198，199，200撳的供試品溶液。（2）罐間供試品溶液。取同一批樣品10罐，按“罐內(nèi)”供試品溶液制備方法操作，按表1（其中USP與JX抽樣方案同時(shí)適用于罐內(nèi)與罐間）方法取樣。2）USP方案。取同一批樣品10罐，充分振搖，按表1方法操作，棄去3撳，每罐均制備首撳和末（第200）撳的供試品溶液（共20個(gè)）。

1.2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：精密吸取1.2.2項(xiàng)下對照品溶液和供試品溶液各適量，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置有吸收峰。理論板數(shù)按硫酸沙丁胺醇峰計(jì)不低于3000，分離度大于1.5，基線分離良好。詳見圖1。

線性關(guān)系考察：取硫酸沙丁胺醇對照品適量，加入流動(dòng)相溶解，稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0µg/mL的系列對照品溶液。取適量，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以待測成分質(zhì)量濃度（X，µg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=0.7584X+0.0256（r=1.0000，n=6）。結(jié)果硫酸沙丁胺醇質(zhì)量濃度在0.212~10.6µg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

檢測限與定量限考察：取1.2.2項(xiàng)下對照品溶液適量，逐級稀釋，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以信噪比（S/N）為3和10時(shí)待測成分的質(zhì)量濃度分別為檢測限和定量限。結(jié)果硫酸沙丁胺醇的檢測限、定量限分別為0.01，0.03µg/mL。

精密度試驗(yàn)：取1.2.2項(xiàng)下對照品溶液適量，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果硫酸沙丁胺醇峰面積的RSD小于2%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品（d1）適量，按1.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0，2，4，8，24，48h時(shí)按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果硫酸沙丁胺醇峰面積的RSD小于2%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置48h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.2.4 遞送劑量測定

取樣品各適量，按1.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按1.2.1項(xiàng)下方法進(jìn)樣測定。結(jié)果顯示，根據(jù)表1判定標(biāo)準(zhǔn)，按ChP抽樣方案6批樣品的遞送劑量均一性均符合規(guī)定；按USP抽樣方案僅樣品c的平均遞送劑量不符合規(guī)定（低于70µg[13]），且與企業(yè)D樣品比較差異顯著（P<0.05）。詳見圖2。

2遞送劑量均一性判定標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)模擬

EP/BP和ChP第一階段通常規(guī)定樣本量為10撳，USP和JX均為20撳；第一階段通常規(guī)定平均值在標(biāo)示量的一定范圍內(nèi)，且結(jié)果超出平均值一定范圍的數(shù)量不得超過規(guī)定數(shù)目，否則進(jìn)入第二階段。EP/BP和ChP第二階段通常規(guī)定樣本量為20撳，USP為40撳，JX為20撳；第二階段通常根據(jù)2個(gè)階段的結(jié)果共同判定，平均值在標(biāo)示量的一定范圍內(nèi)，且結(jié)果超出平均值一定范圍的數(shù)量不得超過規(guī)定數(shù)目，否則判為不符合規(guī)定。

參考文獻(xiàn)[14-19]，采用R語言4.0.0版、通過程序編寫，模擬了真實(shí)批次標(biāo)示遞送劑量為100.0%，真實(shí)生產(chǎn)平均值的75.0%~125.0%，標(biāo)準(zhǔn)差（σ）為1~12的正態(tài)分布數(shù)據(jù)。分別采用表1中4種判定標(biāo)準(zhǔn)，估算第一階段的接受概率及總接受概率，生成工作特性曲線。步驟：采用計(jì)算機(jī)從具有規(guī)定平均值和標(biāo)準(zhǔn)差的正態(tài)分布中隨機(jī)生成10000次10或20個(gè)第一階段數(shù)據(jù)集；計(jì)算通過第一階段判定標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)的比例，估算第一階段的接受概率。對于未通過第一階段測試的數(shù)據(jù)集，從同一正態(tài)分布數(shù)據(jù)中隨機(jī)生成20或40個(gè)第二階段數(shù)據(jù)。合并通過第一階段和第二階段的數(shù)據(jù)集，分別采用上述4種判定標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算通過第二階段數(shù)據(jù)集的比例來估算第二階段的接受概率。總接受概率=第一階段接受概率+第二階段接受概率。2個(gè)階段的工作特性曲線詳見圖3[其中，黑色、紅色、紫色、藍(lán)色線分別為ChP，EP/BP，JX，USP曲線；橫坐標(biāo)均代表遞送劑量占平均遞送劑量的百分比]。

由圖3可知，對于具有較小變異性的批次（σ較小），若未能通過第一階段，該批次通過第二階段的概率僅有微小的增加；當(dāng)批次的變異性增大時(shí)，第一階段接受概率與總接受概率的差異隨著σ的增大而更顯著。ChP的工作特性曲線較其他3種判定標(biāo)準(zhǔn)更寬，接受區(qū)域更廣，故總體平均值的要求（平均值應(yīng)為遞送劑量標(biāo)示量的80%~120%）較其他3種判定標(biāo)準(zhǔn)（平均值應(yīng)為遞送劑量標(biāo)示量的85%~115%）較低；ChP與EP/BP的判定標(biāo)準(zhǔn)第一階段接受概率與總接受概率的差異較JX和USP略大，即如果某批樣品未能通過第一階段而進(jìn)入第二階段的測試，則30個(gè)樣本量總體的通過概率比第一階段的通過概率增加的程度而言，ChP和EP/BP比JX和USP增加的程度略大。

總體而言，EP/BP與JX第一階段接受概率和總接受概率均較接近。USP與JX在σ較小（≤6）時(shí)幾乎相同；隨著σ的增大，前者第一階段接受概率和總接受概率的下降程度更顯著；在σ≥10的情況下，其總接受概率<90%，提示該方法對變異較大的產(chǎn)品容忍度較其他3種標(biāo)準(zhǔn)更低。

3討論

ChP通則0111吸入制劑中規(guī)定應(yīng)評價(jià)吸入劑罐內(nèi)和罐間的遞送劑量均一性，采取10-30法抽樣判定；USP采用20-60法，同時(shí)考慮了罐內(nèi)和罐間的遞送劑量均一性。工作特性曲線顯示USP（20-60法）對變異較大的產(chǎn)品容忍度較其他3種標(biāo)準(zhǔn)更低。混懸型吸入氣霧劑較復(fù)雜，遞送劑量變異性較大，末撳的覆蓋樣本更多，有利于遞送劑量均一性考察。故對于混懸型吸入氣霧劑，建議按USP（20-60法）抽樣方案及判定標(biāo)準(zhǔn)，以保證用藥劑量的準(zhǔn)確性。