研發(fā)中的小劑量藥物通常是指單劑量中主藥標(biāo)示量較低的藥物，例如有的片劑中含主藥只有2mg、1mg、0.5mg、0.2mg，甚至更低如0.25µg。與劑量較大的藥物相比，小劑量藥物在處方工藝、質(zhì)量研究和控制中存在一些特點(diǎn)和難度，如：

主藥在生產(chǎn)過(guò)程中有時(shí)存在較大損失；

中間產(chǎn)品的混合均勻性很關(guān)鍵；

含量均勻度應(yīng)列入成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；

成品中可能會(huì)產(chǎn)生原輔料相容性雜質(zhì)（原料-輔料、原料-輔料中的雜質(zhì)）；

早期批準(zhǔn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中缺少有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)，一致性評(píng)價(jià)中需提高標(biāo)準(zhǔn)；

對(duì)溶出度方法與檢測(cè)方法要求較高；

方法學(xué)驗(yàn)證中專屬性、靈敏度、準(zhǔn)確度很關(guān)鍵；

樣品中主藥的提取過(guò)程可能較復(fù)雜（溶劑與提取方法）；

主藥晶型測(cè)定時(shí)受到的干擾較大。

    本文重點(diǎn)對(duì)小劑量藥物質(zhì)量研究中常見的混合均勻性、含量均勻度、有關(guān)物質(zhì)、溶出度、溶出曲線、晶型等問(wèn)題談幾點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)。

1、混合均勻性和含量均勻度

     混合均勻性是制劑工藝評(píng)價(jià)的關(guān)鍵參數(shù)之一，是成品含量均勻度符合要求的基本保證。目前常見問(wèn)題有：混不勻、測(cè)不準(zhǔn)。混不勻，與處方工藝的設(shè)計(jì)有關(guān)，例如混合物中各組分（原料、輔料）的粒徑不同、形狀、密度不同、靜電效應(yīng)等，此時(shí)可以考慮尋找粒徑相近的輔料或把原料微粉化、預(yù)混合后增加過(guò)篩工序、高剪切濕法制粒（優(yōu)化粘合劑粘度和用量、攪拌速度等）、優(yōu)化總混參數(shù)、減少物料周轉(zhuǎn)次數(shù)、更換不同型號(hào)輔料等方式進(jìn)行調(diào)整。測(cè)不準(zhǔn)，往往是取樣、檢測(cè)方法、樣品處理方法、樣品分層了等原因引起的，常見問(wèn)題例如片劑生產(chǎn)中混合均勻性不符合要求，但按理論片重壓片后，成品含量符合規(guī)定，含量均勻度也符合規(guī)定。此時(shí)應(yīng)考慮增加取樣量、多點(diǎn)取樣、使用玻璃瓶、改變?nèi)庸ぞ摺p少靜電吸附、改為在線監(jiān)控等方式進(jìn)行，并以成品含量均勻度作為參照進(jìn)行研究，這時(shí)質(zhì)量研究人員最好要與制劑人員開展充分溝通。此外，關(guān)于混合的有關(guān)問(wèn)題，推薦閱讀藥事縱橫微信公眾號(hào)“粉末直壓工藝BU與CU不合格的解決方案”、“總混含量不合格，壓片合格，怎么回事？”、“關(guān)于混合，研發(fā)人員應(yīng)該知道的幾件事”等文章。

     中國(guó)藥典規(guī)定對(duì)于每片（個(gè)）標(biāo)示量不大于25mg或主藥含量不大于每片（個(gè)）重量25%者應(yīng)檢查含量均勻度，通常采用A+2.2S進(jìn)行評(píng)價(jià)，而EP 2.9.6 Uniformity of content of single-dose preparations還規(guī)定了單劑量均勻度等規(guī)定，值得借鑒。

2、有關(guān)物質(zhì)

    有些小劑量藥物早期的國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)中均未收載有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)，目前如果遇到此種情況仍建議按照常規(guī)劑量藥物一樣進(jìn)行雜質(zhì)研究。雜質(zhì)分析和控制時(shí)，仍建議按照源頭控制、生產(chǎn)過(guò)程控制、中間體控制、終產(chǎn)品控制、跟蹤最新國(guó)內(nèi)外質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的思路去研究。

      對(duì)于只含有一個(gè)主藥的小劑量藥物而言，有關(guān)物質(zhì)方法建立時(shí)與常規(guī)劑量藥物相比，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)的專屬性、靈敏度、回收率等問(wèn)題。專屬性試驗(yàn)中，小劑量藥物中輔料所占比例很大，配制一定濃度的供試品溶液時(shí)輔料的濃度也很大，此時(shí)在有關(guān)物質(zhì)圖譜中可能出現(xiàn)較大的輔料峰或輔料中的雜質(zhì)峰，這些色譜峰有的可能對(duì)主成分或有關(guān)物質(zhì)造成干擾，此時(shí)在方法的摸索階段，應(yīng)盡可能考慮消除這種影響，例如改變波長(zhǎng)、改變檢測(cè)器種類、改變固定相類型、改變供試品溶液提取方法、改變色譜條件等操作。對(duì)于小劑量藥物中的雜質(zhì)檢測(cè)，想要獲得較高的靈敏度（或符合要求的靈敏度），檢測(cè)器類型、檢測(cè)波長(zhǎng)、供試品濃度、色譜條件等影響信噪比的各種條件都需要考慮。對(duì)于回收率而言，有些藥物由于輔料占比較大，不溶性輔料較多，如果采用加溶劑定容的方式配制回收率溶液可能導(dǎo)致回收率超限，此時(shí)應(yīng)根據(jù)具體情況調(diào)整供試品溶液的配制方式。

     對(duì)于小劑量的復(fù)方制劑，以兩個(gè)主藥為例，如果其中一個(gè)與另一個(gè)標(biāo)示量上差異懸殊，可以想想有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)將遇到挑戰(zhàn)。此時(shí)，首選用一個(gè)方法將兩個(gè)主藥的所有有關(guān)物質(zhì)全部分離并控制；如果難以實(shí)現(xiàn)，再考慮建立系統(tǒng)II對(duì)其中某個(gè)主藥進(jìn)行雜質(zhì)控制。建立方法中，首先還是要進(jìn)行雜質(zhì)譜分析，把兩個(gè)主藥的所有可能雜質(zhì)都列出來(lái)，并匯總每個(gè)主藥的已有標(biāo)準(zhǔn)中的有關(guān)物質(zhì)方法，方法篩選時(shí)可以用保留時(shí)間靠后的那個(gè)主藥的有關(guān)物質(zhì)色譜條件進(jìn)行摸索，并用雜質(zhì)對(duì)照品法進(jìn)行定位，同時(shí)用兩個(gè)原料藥、空白輔料進(jìn)行考察，觀察每個(gè)原料藥相關(guān)、輔料相關(guān)雜質(zhì)彼此間的分離度情況，如果存在部分重合或分離度較差的情況，可以在此條件基礎(chǔ)上微調(diào)，使分離度符合要求。在專屬性符合要求后，再考慮檢測(cè)波長(zhǎng)，選擇根據(jù)每個(gè)主藥計(jì)算雜質(zhì)檢測(cè)靈敏度都能夠滿足低于ICH報(bào)告限度要求的波長(zhǎng)。也可以通過(guò)增加供試品濃度、改變不同溶劑組合和比例、調(diào)節(jié)溶劑pH等方法提高靈敏度。

     對(duì)于有些小劑量藥物，如果輔料出峰情況無(wú)法避免，那么在最終標(biāo)準(zhǔn)中可以規(guī)定輔料峰的位置在計(jì)算時(shí)根據(jù)相對(duì)保留時(shí)間進(jìn)行扣除或規(guī)定每次配制空白輔料溶液進(jìn)行扣除。

     在制劑開發(fā)過(guò)程中，有時(shí)會(huì)遇到有些輔料占比很大的藥物，在穩(wěn)定性過(guò)程中可能出現(xiàn)一些非主藥降解產(chǎn)生的雜質(zhì)峰，這些峰可能是輔料產(chǎn)生的，為了把這些問(wèn)題研究透徹，建議結(jié)合早期的原輔料相容性結(jié)論及同步放置空白樣品的方式進(jìn)行對(duì)比研究。

復(fù)方制劑中的小劑量藥物也要控制手性異構(gòu)體雜質(zhì)，必要時(shí)可選擇靈敏度較高的檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，也可以考慮換不同波長(zhǎng)去檢測(cè)。

3、溶出度和溶出曲線

     小劑量藥物在進(jìn)行溶出度或溶出曲線測(cè)定時(shí)，方法的靈敏度很關(guān)鍵。例如，瑞格列奈片ChP2015中采用小杯法，介質(zhì)體積100ml進(jìn)行檢測(cè)，而USP中采用大杯法，介質(zhì)體積900ml并采用熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于小劑量藥物而言，可以考慮采用小杯法或大杯法并結(jié)合靈敏度較高的熒光檢測(cè)器進(jìn)行溶出度檢查，有時(shí)為了提高檢測(cè)靈敏度也可以考慮增大進(jìn)樣量的方式檢測(cè)，如50µl或100µl，200µl以上不常見。USP等國(guó)外藥典中沒有收載小杯法，只有中國(guó)藥典中收載了小杯法，在2020版藥典通則中仍在收載，說(shuō)明是有其“用武之地”的，遇到規(guī)格特別小的藥物時(shí)可以考慮采用這種方法。

      在口服固體制劑一致性評(píng)價(jià)中，往往會(huì)遇到小劑量藥物中的小規(guī)格制劑申請(qǐng)BE豁免的情況，此時(shí)應(yīng)進(jìn)行小規(guī)格溶出曲線的對(duì)比，不但要與BE批大規(guī)格進(jìn)行對(duì)比，還要與參比制劑相同的小規(guī)格進(jìn)行對(duì)比。如果大小規(guī)格溶出曲線都相似，那當(dāng)然是最理想的了，但往往是參比制劑小規(guī)格與大規(guī)格曲線不相似，自制品大小規(guī)格曲線相似，自制品小規(guī)格與參比制劑小規(guī)格曲線不相似，此時(shí)建議還是應(yīng)主要看自己的不同規(guī)格間曲線是否相似，結(jié)合豁免小規(guī)格BE的指導(dǎo)原則規(guī)定，在申報(bào)時(shí)詳細(xì)說(shuō)明自制品的處方組成等比或相似等情況。

4、晶型

     制劑中常用的晶型鑒別方法有X射線粉末衍射法、DSC法、IR法、拉曼光譜法等。對(duì)于小劑量藥物，由于輔料干擾，往往都難以測(cè)定晶型，但仍建議根據(jù)具體含量結(jié)合文獻(xiàn)進(jìn)行多種方法的嘗試，測(cè)定時(shí)可將原料藥、參比制劑、仿制制劑、輔料等同時(shí)進(jìn)行考察。

     對(duì)于仿制藥中原料藥晶型的定性分析，可采用在制劑中提高原料藥的比例，按擬定工藝制備樣品，分工序、分階段取樣測(cè)定，考察制劑工藝是否引起了原料藥的轉(zhuǎn)晶。在穩(wěn)定性考察過(guò)程中也應(yīng)考察多晶型藥物中晶型是否發(fā)生變化。

      此外，藥事縱橫微信公眾號(hào)中曾發(fā)表過(guò)小規(guī)格制劑雜質(zhì)檢查中碰到的諸多“小鬼”一文，文中介紹了流動(dòng)相試劑、濾膜材質(zhì)、塑料滴管、離心管等引入雜峰的問(wèn)題，研究中值得借鑒和思考。