穩(wěn)定性指示方法是基于藥品中活性成分的特征結(jié)構(gòu)，將活性成分與其降解產(chǎn)物、副產(chǎn)物及其他輔料區(qū)分開來，以便能夠準(zhǔn)確測定活性成分的含量。穩(wěn)定性指示方法的預(yù)期用途是監(jiān)測成品中藥物的穩(wěn)定性，能夠區(qū)分活性成分和穩(wěn)定性評估期間在規(guī)定儲存條件下形成的降解產(chǎn)物，為包材制定的合理性及藥品的有效期提供一個(gè)知識性數(shù)據(jù)。此外，穩(wěn)定性指示方法必須有足夠的靈敏度以及專屬性，以檢測和量化一種或多種降解產(chǎn)物。常見的穩(wěn)定性指示有薄層色譜法、氣相色譜法、毛細(xì)管電泳法、高效液相色譜法等，而滴定法、紅外光譜法、原子吸收法、紫外分光光度法，雖然檢測精確，但不能視為穩(wěn)定性指示方法。下面就如何建立穩(wěn)定性指示方法進(jìn)行簡單介紹（以液相方法為例）。

一、分析方法的生命周期，如下圖所示：

 二、分析方法開發(fā)中需要明確以下幾個(gè)關(guān)鍵問題：

（1）需要檢測哪些數(shù)據(jù)—含量、有關(guān)物質(zhì)、殘留溶劑、抗氧劑含量及抑菌劑含量等關(guān)鍵質(zhì)量屬性；

（2）檢測的目的是什么—工藝開發(fā)、中控、產(chǎn)品放行等；

（3）方法的目的是什么—定性還是定量；

（4）方法的性能要求是什么—專屬性、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度、耐用性等；

（5）樣品的基質(zhì)是什么—原料、片劑、口服溶液、注射液、輔料、強(qiáng)降解樣品、影響因素樣品等；

（6）開發(fā)的方法是否可以轉(zhuǎn)移至工廠QC實(shí)驗(yàn)室

三、分析方法開發(fā)的基本流程如下所示：

注：質(zhì)量平衡的計(jì)算根據(jù)各公司sop執(zhí)行

在開始實(shí)驗(yàn)之前，應(yīng)查閱文獻(xiàn)和內(nèi)部數(shù)據(jù)庫，以確定現(xiàn)有方法是否適用于新的分析，以及他們是否符合當(dāng)前的監(jiān)管要求。通用方法、文獻(xiàn)方法、先前的經(jīng)驗(yàn)構(gòu)成方法開發(fā)和優(yōu)化的起點(diǎn)，藥典方法適用于仿制藥，但僅應(yīng)被視為新藥品方法開發(fā)的起點(diǎn)，因?yàn)檫@些方法僅適用于專論列出的藥物。如果沒有方法作為合適的起點(diǎn)，則應(yīng)收集藥物（活性成分）、相關(guān)化合物、樣品基質(zhì)的信息，主要包括：分子結(jié)構(gòu)、官能團(tuán)、是否存在手性中心；化合物的理化性質(zhì)，比如最大吸收波長、LogD、LogP、pKA、藥物存在形式、化合物溶解性以及穩(wěn)定性。理想情況下，應(yīng)根據(jù)化合物的理化性質(zhì)、樣品基質(zhì)、可檢測性、可用的儀器選擇合適的分析方法。

首先，應(yīng)考慮所有分析物的可檢測性，包括已知和潛在的副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物和樣品干擾（如添加劑），以確保該方法具有所需的靈敏度和專屬性。

液相常用的檢測器包括UV、DAD、IR、ELSD、CAD、MS。UV、DAD檢測器常用于有紫外吸收的化合物；IR檢測器（通用檢測器，靈敏度不高、不能用梯度），常用于參比制劑輔料解析、糖類等無紫外吸收樣品檢測；ELSD檢測器（通用檢測器，流動相具有揮發(fā)性）適用于無紫外吸收樣品；CAD檢測器（通用檢測器，）同樣適用于無紫外吸收樣品；MS檢測器價(jià)格昂貴，常用于基因毒性雜質(zhì)檢測。首先通過DAD檢測器，確定化合物的最大吸收波長；選擇低波長獲得更高的靈敏度和選擇高波長獲得更好的基線及更高的信噪比之間需要作出取舍。

常用的流動相—水相：磷酸鹽體系（截止波長＜200nm）、甲酸鹽/乙酸鹽體系（截止波長210nm）；有機(jī)相：乙腈（截止波長＜200nm，黏度低）、甲醇（截止波長230nm，對鹽的溶解性好、便宜，但粘度大）、四氫呋喃（含過氧化物，不推薦用）；離子對試劑：四丁基溴化銨、四丁基氫氧化氨—用于陰離子樣品測定（酸性化合物）；戊己庚辛磺酸鈉—用于陽離子樣品測定（堿性化合物）。應(yīng)根據(jù)化合物的存在形式、官能團(tuán)、pKA選擇流動相體系，流動相（水相）PH應(yīng)在其緩沖范圍內(nèi)，在化合物pKA±2以外（使化合物呈單一形態(tài)），特殊情況可以在化合物pKA±1以外，因?yàn)樵诨衔飌KA附近，化合物保留時(shí)間容易漂移。流動相的pH值與離子對試劑同樣密切相關(guān)，四丁基銨一般在pH7.5下運(yùn)行，磺酸鹽一般在pH3.5下運(yùn)行。

選擇合適的色譜柱（固定相）—首先通過文獻(xiàn)或者藥典（EP官網(wǎng)、USP官網(wǎng)）推薦的色譜柱且色譜柱要比較新（確保可重現(xiàn)）；根據(jù)化合物的性質(zhì)選擇—酸性（如安捷倫SB系列）、堿性（如Waters Xbridge系列），也可根據(jù)色譜柱的載碳量選擇。

色譜峰的定位—一般通過DAD光譜圖及對照品保留時(shí)間確定。

樣品的選擇及制備。選擇具有代表性的樣品批次（工藝確定）—制劑：破壞樣品（影響因素樣品）；原料：中間產(chǎn)品、粗品、破環(huán)樣品。樣品的制備是整個(gè)色譜過程的關(guān)鍵步驟，如果未能為正確處理，會影響色譜分析。原料藥前處理需要合適的溶劑溶解稀釋即可進(jìn)樣；注射液可以直接進(jìn)樣或者稀釋后進(jìn)樣；片劑、膠囊需要將其粉碎，然后進(jìn)行超生提取，然后過濾、稀釋進(jìn)樣；軟膏需要合適的溶劑溶解、萃取、蒸發(fā)、再溶解才能進(jìn)樣。如果樣品溶解不完全或者用的溶劑極性太強(qiáng)，將導(dǎo)致色譜譜帶變寬、拖尾或者形成肩峰，因此要確保樣品在合適的溶劑中溶解，然后用流動相稀釋，消除這個(gè)問題。

定量還是定性。對于主成分含量，一般通過外標(biāo)法計(jì)算；對于雜質(zhì)，一般通過外標(biāo)法或者加校正因子的主成分外標(biāo)法計(jì)算；對于個(gè)別基因毒性雜質(zhì)，通過限度法進(jìn)行定性。

方法開發(fā)完成后，進(jìn)行簡單的耐用性試驗(yàn)及準(zhǔn)確度試驗(yàn)；再進(jìn)行強(qiáng)降解試驗(yàn)（一般降解5%-20%），考察主峰的峰純度（通過DAD）及質(zhì)量守恒，確保方該法具體穩(wěn)定性指示。