1、背景

 

隨著雜質(zhì)研究的要求越來越高，系統(tǒng)適用性溶液中雜質(zhì)添加數(shù)量越來越多，無形中增加了企業(yè)的成本和制備的難度，故應(yīng)制訂相應(yīng)的策略，在達到檢測系統(tǒng)適用性要求的同時，降低企業(yè)的檢測成本。

 

2、系統(tǒng)適用性要求

 

2.1分離度

 

2.1.1分離度要求是為了排除其它組分干擾待測物質(zhì)的檢測準確性，一般情況下，待測物質(zhì)要與其它成份分離度達到1.5以上，才能判定為無干擾，要求嚴格的需要2.0以上才能符合要求。限于分離度計算方式的影響，待測物質(zhì)和相鄰其它組分峰高或者峰寬差異百倍甚至更多，造成分離度計算結(jié)果遠遠小于實際的分離效果，個別工作站有按峰谷比的方式計算，該種方式對峰寬差異大的組分有較好的結(jié)果，但不是所有的工作站均有該計算方式，故分離度要求可修訂為基線分離更合理。

 

示例1：

 

在中國藥典2020年版二部大多數(shù)頭孢類中就有采用峰谷比作為系統(tǒng)分離度要求的情況，如頭孢美唑鈉中聚合物檢測，截圖如下

 

 

2.1.2應(yīng)用情況

 

（1）含量測定目標和相鄰組分需要制訂分離度要求；

 

（2）有關(guān)物質(zhì)測定主成分和相鄰雜質(zhì)需要制訂分離度要求；

 

（3）有關(guān)物質(zhì)中難分離的兩個雜質(zhì)且合并會超過限度的需要制訂分離度要求；

 

2.2重復性

 

2.2.1重復性要求是考察儀器進樣精密度，主要是排除儀器進樣誤差，對于含量測定，我們要求相對標準偏差不得過2.0%，當然這個數(shù)值也不是一成不變的，可根據(jù)中國藥典2020年版四部9101指導原則（如下圖）進行相應(yīng)的調(diào)整，這里要說明下樣品中待測定成分的含量問題，很多理解不一致，表中所說的應(yīng)為絕對含量，而不是標示含量，應(yīng)予以區(qū)分，以免訂的標準過嚴，該指導原則主要是對常用的儀器如液相色譜儀制訂，特殊的儀器可以根據(jù)實際情況進行適當?shù)恼{(diào)整，如殘留溶劑測定法中相對標準偏差規(guī)定外標法不得過10%，內(nèi)標法不得過5%。

 

 

2.2.2應(yīng)用情況

 

（1）精密度差的儀器，如氣相色譜儀；

 

（2）進樣量大或者進樣量較小的方法；

 

（3）外標法建議考察；

 

2.3理論塔板數(shù)：分離效率

 

2.3.1理論塔板數(shù)是直接反應(yīng)色譜柱柱效，是分離效率的一種參數(shù)，理論塔板數(shù)的高低主要是看保留時間和峰寬的比值關(guān)系，峰越寬，理論塔板數(shù)越低，造成峰高和分離度越差。

 

2.3.2應(yīng)用情況

 

（1）在一定程度上可以替代分離度要求，如干擾組分不易獲得，在理論塔板數(shù)比較高的情況下不影響分離度，可以考慮用理論塔板數(shù)作為系統(tǒng)適用性要求而不是分離度指標；

 

（2）如采用峰高計算結(jié)果，則應(yīng)要規(guī)定理論塔板數(shù)；

 

2.4拖尾因子

 

2.4.1拖尾因子主要是反映峰對稱情況，有時也叫對稱因子，峰形拖尾或者前沿，會影響到積分邊際線的位置，使得峰高或者峰面積改變，對定量檢測的準確性產(chǎn)生影響，即使是定性，也會影響到靈敏度的判斷，故一般情況下會規(guī)定以峰高作為定量參數(shù)的規(guī)定拖尾因子應(yīng)在0.95~1.05范圍內(nèi)，是以峰面積作為定量參數(shù)，則規(guī)定0.8~1.2范圍內(nèi)，當然也可以根據(jù)實際情況適當放寬，如限度范圍比較寬的，積分邊際線稍微調(diào)整影響不大的情況下可放寬標準。

 

2.4.2應(yīng)用情況

 

（1）峰高作為定量參數(shù)時應(yīng)制訂要求；

 

（2）峰面積作為定量參數(shù)，且積分邊際線影響到定量結(jié)果的時候應(yīng)制訂要求；

 

2.5靈敏度

 

2.5.1靈敏度是考察系統(tǒng)對含量較小的成分的檢測能力，一般情況下定量檢測規(guī)定靈敏度溶液信噪比不小于10，定性檢測信噪比不小于3。

 

2.5.2應(yīng)用情況

 

（1）靈敏度差的檢測系統(tǒng)應(yīng)制訂靈敏度要求；

 

（2）制訂忽略限的檢測方法也應(yīng)考察靈敏度；

 

2.6線性

 

2.6.1在定量過程中，待測物和參照物濃度不可能是同一個值，或多或少會有差異，當差異大時，誤差可能會很大。線性是定量的基礎(chǔ)，方法驗證時，線性范圍應(yīng)盡可能考慮待測物質(zhì)的檢出濃度，使得檢出濃度在線性范圍內(nèi)，否則定量結(jié)果很難保證準確性。當有效成分測定時，一般規(guī)定相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.999，在安全性和有效性能有效保障的情況下可放寬至0.99。

 

2.6.2應(yīng)用情況

 

（1）標準曲線法：當待測物濃度不明確時，應(yīng)采用考察線性，特別是線性受環(huán)境等條件影響較大時；

 

（2）當基質(zhì)干擾較大時，也就是方法驗證時線性截距占比較大，這種情況下不適合采用一點法進行定量，應(yīng)采用標準加入法進行測定。

 

2.7重現(xiàn)性

 

2.7.1這里說的重現(xiàn)性不是方法驗證里的重現(xiàn)性，是參照物平行配制的情況，如對照品溶液配制第二份，測得的量相對于第一份的回收率，確認配制的結(jié)果準確性，一般情況下規(guī)定回收率范圍為98%~102%，也可以根據(jù)中國藥典2020年版四部9101指導原則（如下圖）進行相應(yīng)的調(diào)整。

 

 

2.7.2應(yīng)用情況

 

定量參照物配制耐用性差的應(yīng)制訂該要求，如稱量或移取量比較少，誤差比較大。

 

3、系統(tǒng)適用性制訂

 

3.1方法開發(fā)階段

 

3.1.1有關(guān)物質(zhì)

 

對于有關(guān)物質(zhì)來講，不管是定量檢測還是定性檢測，分離度指標至關(guān)重要，所以有關(guān)物質(zhì)系統(tǒng)適用性的分離度指標無可避免；理論塔板數(shù)和拖尾因子也只是側(cè)面提高分離度的，所以在考慮分離度的情況下可不用考察該指標；而有關(guān)物質(zhì)一般情況下含量比較低，準確度可允許的偏差比有效成分要求較低，故重復性和重現(xiàn)性就不是很關(guān)鍵；雜質(zhì)定量檢測時，線性在方法驗證階段證明即可，無需訂入系統(tǒng)適用性要求，定性檢測則不用考察線性；但是由于有關(guān)物質(zhì)含量比較低，檢測能力就顯得很重要，故靈敏度是在考慮的范圍內(nèi)。

 

（1）在有關(guān)物質(zhì)方法開發(fā)階段，專屬性至關(guān)重要，雜質(zhì)譜分析應(yīng)全面，盡可能的得到工藝雜質(zhì)和降解雜質(zhì)，對已知雜質(zhì)進行定性，配制混合溶液進行方法開發(fā)，要求雜質(zhì)和主成分應(yīng)能有效分離，雜質(zhì)之間也盡可能的分離，所有雜質(zhì)應(yīng)能檢出，不能檢出的應(yīng)有相應(yīng)的補充方法。

 

（2）對主成分進行強制降解實驗，主成分也應(yīng)能和降解雜質(zhì)有效分離，降解雜質(zhì)和已知雜質(zhì)之間也應(yīng)盡可能分離。

 

（3）對主成分和已知雜質(zhì)的檢出能力進行確認，確保方法初步可行。

 

（4）應(yīng)對方法的耐用性進行初步的考察，確保方法在微小變動的情況下能滿足要求。

 

示例2：

 

某品種根據(jù)雜質(zhì)譜分析，將生產(chǎn)工藝過程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)按限度濃度的十倍配制已知成分混合溶液，開發(fā)和優(yōu)化方法并考察耐用性，結(jié)果如下：

 

 

 

3.1.2含量

 

對于含量測定來講，雜質(zhì)相互之間的分離情況可以不用考慮，但雜質(zhì)和有效成分的分離度至關(guān)重要，如果分離度達不到要求，可能會影響到有效成分測定的準確度，另外一種情況也需要考慮，方法能把所有雜質(zhì)洗脫出來，以免影響下一針的檢驗；理論塔板數(shù)和拖尾因子對含量測定也有一定的影響，雖然現(xiàn)在基本采用的是峰面積計算含量，但這兩個參數(shù)影響到了積分邊際線的位置，使得峰面積有所改變；靈敏度對含量測定影響不大，所以藥典不對靈敏度進行要求，但有些微量測定還是需要制訂靈敏度，如清潔驗證、中藥有效成分等；在采用一點法測定含量的情況下，線性不作為考察的重點，但含量不明確或者波動比較大的情況下需要考察，甚至采用標準曲線法測定含量；含量測定直接影響有效性，準確度要求較高，故重復性和重現(xiàn)性均要考察。

 

（1）應(yīng)確保所有的雜質(zhì)均能和有效成分分離開，制訂分離度要求，強制降解純度閾值符合要求，所有雜質(zhì)均能有效系統(tǒng)；

 

（2）方法應(yīng)有相應(yīng)重復性，甚至重現(xiàn)性，一般情況下，參照物質(zhì)采用5+2或者6+1的方式進行考察；

 

（3）采用峰面積計算結(jié)果的，理論塔板數(shù)和拖尾因子可以適當放寬，但也不能太低，具體可以經(jīng)過研究后結(jié)合產(chǎn)品特性進行規(guī)定；

 

（4）應(yīng)對方法的耐用性進行初步的驗證，確保測定條件微小變動系統(tǒng)也能耐用；

 

3.2方法驗證階段

 

3.2.1有關(guān)物質(zhì)

 

有關(guān)物質(zhì)方法驗證，應(yīng)對根據(jù)雜質(zhì)譜分析對很大概率產(chǎn)生的雜質(zhì)進行研究，而不是所有的已知雜質(zhì)都要進行方法驗證，否則會增加方法驗證的難度，增加不必要的時間和經(jīng)濟成本；

 

（1）對于接近限度的雜質(zhì)，分離度應(yīng)達到要求，否則需要重新優(yōu)化方法再進行驗證。

 

（2）主成分和相鄰雜質(zhì)的分離度要求不可避免，應(yīng)要驗證；

 

（3）對檢出的工藝雜質(zhì)和降解雜質(zhì)應(yīng)要驗證；

 

（4）對多批次未檢出，且檢出可能性較小的做簡單驗證。

 

3.2.2含量

 

經(jīng)過了一定的數(shù)據(jù)積累，對含量測定的方法有了深入的了解，一些不影響的系統(tǒng)適用性要求可以考慮不再進行考察，有些需要特別關(guān)注。

 

（1）如果相鄰雜質(zhì)和有效成分分離度很有保證，不管耐用性條件如何變動，分離度均能達到要求，可以不考慮制訂分離度要求；

 

（2）相鄰雜質(zhì)和有效成分分離度不一定能保證，需要制訂，如果相鄰雜質(zhì)不易的或者經(jīng)濟考慮，可以順延采用就近的雜質(zhì)進行規(guī)定，規(guī)定的要求要能保證相鄰雜質(zhì)和有效成分的分離；

 

（3）方法驗證階段，需要對其它雜質(zhì)的檢出和對有效測定結(jié)果的影響情況予以考慮，如果對結(jié)果影響較小，則不用考慮該雜質(zhì)的洗脫，縮短分析時間。

 

示例3：

 

某品種含量方法開發(fā)時，雜質(zhì)B和主成分比較近，分離度為1.8（圖a），但雜質(zhì)B不容易得到，如果將雜質(zhì)B和主成分的分離度作為系統(tǒng)適用性要求，則后期研究或檢驗的時候勢必造成一定的困擾，但順延采用就近的較易得的雜質(zhì)作為系統(tǒng)分離度要求（如圖a中的雜質(zhì)A），就可以避免后期的麻煩，當然分離度也得相應(yīng)的做調(diào)整，在該系統(tǒng)下雜質(zhì)A和主成分的分離度為2.8（圖b），在此情況下雜質(zhì)B和主成分的分離度則必大于1.5，則制訂雜質(zhì)A和主成分的分離度不小于2.8，再對方法的進行稍微的調(diào)整，使得雜質(zhì)A和主成分的分離度保證大于2.8，滿足耐用性要求。

 

 

 

3.3質(zhì)量標

 

準制訂階段

 

3.3.1有關(guān)物質(zhì)

 

經(jīng)過方法驗證和多批次的生產(chǎn)檢驗，對本品的工藝和降解雜質(zhì)檢測情況已經(jīng)有了基本的數(shù)據(jù)積累，這時可以根據(jù)實驗?zāi)康膶ο到y(tǒng)適用性的要求就可以相應(yīng)的進行簡化；

（1）和主峰相近的雜質(zhì)應(yīng)添加至系統(tǒng)適用性溶液中考察分離度；

 

（2）接近限度的雜質(zhì)應(yīng)添加至系統(tǒng)適用性溶液中考察和相鄰成分的分離度；

 

（3）能檢測出的雜質(zhì)應(yīng)添加至系統(tǒng)適用性溶液中進行定性；

 

（4）大概率會降解產(chǎn)生的雜質(zhì)應(yīng)添加至系統(tǒng)適用性溶液中進行定性；

 

（5）質(zhì)量標準中應(yīng)附典型的系統(tǒng)適用性圖譜（可以考慮附方法開發(fā)時全雜質(zhì)的典型圖譜）；

 

（6）對系統(tǒng)適用性溶液穩(wěn)定性進行考察，考察指標可以規(guī)定為各成分含量應(yīng)為初始條件的70%~130%。

 

3.3.2含量測定

 

經(jīng)過了方法驗證和多批次的生產(chǎn)檢驗，有了大量數(shù)據(jù)的積累，系統(tǒng)適用性的要求可以根據(jù)經(jīng)驗進行進一步的優(yōu)化。

 

（1）如果相鄰雜質(zhì)和有效成分分離度難保證，但基本未檢出，對結(jié)果準確度影響微乎其微，也不會降解產(chǎn)生，則可不用考慮該雜質(zhì)和有效成分的分離度；

 

（2）定量限濃度遠遠小于檢測濃度，可不考慮靈敏度要求；

 

（3）理論塔板數(shù)和拖尾因子不會影響積分邊際線或者影響很小，可以忽略不計，則可不考慮；

 

（4）采用一點法測定含量的可不用考察線性；

 

（5）重復性和重現(xiàn)性應(yīng)要考察。

 

4、總結(jié)

 

4.1影響測定準確性的指標必須要考察，對準確度影響很小的可不用考察；

 

4.2耐用性差的指標必須要考察，耐用性好的可不用考察；

 

4.3法規(guī)規(guī)定的指標必須考察，法規(guī)沒有規(guī)定的可不用考察。

 

5、參考文獻

 

5.1中國藥典2020年版；

 

5.2GMP指南2010年版；

 

5.3中國藥品檢驗標準操作規(guī)范2019年版；

 

5.4ICH指導原則；