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PCR分子診斷POCT需要具備哪些基本要素?

嘉峪檢測網        2021-03-30 09:01

分子診斷POCT是近幾年的熱門話題。作為未來分子診斷發展的熱門方向,分子診斷POCT集合了小巧、靈活、方便、快速、精準等特點,在應用場景和應用領域上比傳統的分子診斷更多更廣。這也是目前國內外診斷企業紛紛布局這一領域原因。那么實現PCR分子診斷POCT一般需要具備哪些基本要素?

 

01 多重PCR技術

 

一般來講,分子POCT的擴增管比較少,所以掌握多重PCR技術能夠讓你在有限空間實現更多的位點檢測。

 

02 試劑常溫技術

 

分子診斷POCT能夠在應用場景上拓展,試劑常溫技術尤為關鍵。試劑常溫運輸儲存即降低冷鏈運輸的成本又帶來使用上的便捷。

 

試劑常溫技術一般分為兩種:液體試劑常溫技術和干式試劑常溫技術。

 

液體常溫技術:

 

是通過對PCR體系中的酶做一些化學修飾,來實現酶在體系在短時間的常溫穩定,以此實現常溫運輸,0-10℃或-20℃儲存。目前Taq酶的化學修飾已經得到實現,但對于體系中的其他酶(如逆轉錄酶)的修飾還需更多的研究投入。

 

干式試劑常溫技術:

 

是通過對PCR體系(包含酶等活性成分)的冷凍干燥,實現常溫運輸常溫存儲或常溫運輸0-10℃儲存。國外廠家早在幾年前就掌握了干式試劑常溫技術,國內目前也有不少廠家實現了這一技術。只是國內廠家目前絕大部分實現的是干式粉末技術,對于干式球形技術掌握的極少。干式球形技術是實現批量化生產,降低成本的關鍵。

 

03 快速提取純化技術

 

經典的分子診斷POCT即要快速也要精準,所以核酸的提取純化是精準的要素。

 

直擴的方法如果從體系和釋放劑的配方上深入研究,達到與提取純化后擴增的靈敏度也是有可能的,但從樣本的普適性上來講,直擴的方法范圍更窄,只能適用部分項目的某一類樣本的檢測。

 

核酸提取純化也不能像傳統的提?。ㄌ崛r間一般20-30分鐘)一樣,要在提取效果和提取時間上找到平衡點,實現核酸快速提取純化。

 

04 封閉式卡盒的設計

 

分子診斷POCT的關鍵之一,在于封閉式卡盒的設計。“核酸的提取、加樣及擴增全過程在封閉式的小卡盒在完成。”簡單的一句話,難倒了眾多開發設計者。

 

難點在于快速提取過程如何移液、純化后的核酸如何加入到體系中、卡盒需要預留什么樣的機構與儀器設備配合。

 

突破這些難點以后,你還需要考慮如何低成本制造,試劑如何批量化生產。

 

因此設計一個可產業化的封閉式卡盒是實現分子診斷POCT的基本要素也是關鍵。

 

05 配套的分子診斷POCT儀器

 

這類儀器的基礎在于,提取部分必須能到在機械機構上配合卡盒,PCR擴增部分必須實現快速擴增多熒光通道擴增。

 

PCR分子診斷POCT需要具備哪些基本要素?

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來源:Internet

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