7月2日，國家藥品監(jiān)督管理局、國家衛(wèi)生健康委發(fā)布公告，正式頒布2020年版《中國藥典》，新版藥典將于今年12月30日起正式實施。新版藥典對環(huán)境監(jiān)測、無菌檢查方法、微生物檢測、滅菌驗證等都做出了相關(guān)要求。本文結(jié)合了《醫(yī)療器械無菌試驗檢查要點指南》中的檢查內(nèi)容，對新版《中國藥典》中關(guān)于無菌檢查法的要點進行了整理，供大家參考。

5、菌液制備

（1）接種金葡、銅綠、枯草的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基上，接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30~35°C培養(yǎng)18~24小時。

（2）接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上， 20~25°C培養(yǎng)2~3天， 上述培養(yǎng)物用pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液或0.9％無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度菌懸液。

（3）接種黑曲霉至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20~25°C培養(yǎng)5~7天或直到獲得豐富的孢子，加入適量含0. 05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7. 0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液 ,將孢子洗脫。

（4）采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，制成適宜濃度的孢子懸液。

（5）菌懸液若在室溫下放置，一般應在2小時內(nèi)使用；若保存在 2～8℃可在 24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃,在驗證過的貯存期內(nèi)使用。

注意：白色念珠菌的培養(yǎng)時間由原來的24~48小時調(diào)整為2~3 天；菌懸液不再強制要求100cfu/ml以下；洗黑曲孢子的聚山梨酯80的溶液不再強制3~5ml，而應根據(jù)孢子的噴落量靈活調(diào)整。

6、培養(yǎng)基接種 

（1）取適宜裝量的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于l00cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對照.

（2）取適宜裝量的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照。

（3）接種細菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時間不超過3天，接種真菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時間不得超過5天。逐日觀察結(jié)果。

注意：真菌的培養(yǎng)時間要稍微長，其他的應控制在3天之內(nèi)，時間長了容易污染環(huán)境或造成其他實驗室危害。

7、方法適用性試驗

進行產(chǎn)品無菌檢查時，應進行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。若檢驗程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗結(jié)果時，應重新進行方法適用性試驗。