目前國(guó)內(nèi)外和分析方法學(xué)有關(guān)的指導(dǎo)原則和技術(shù)文件中，大部分都是闡述分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容，很少有專門(mén)闡述分析方法轉(zhuǎn)移和確認(rèn)的文件。美國(guó)、歐盟、日本、澳大利亞、中國(guó)等國(guó)家和地區(qū)的藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)以及“人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)”( InternationalConference on Harmonization ofTechnical Ｒequirements for Ｒegistration of Pharmaceuticalsfor Human Use， ICH) 、世界衛(wèi)生組織( WorldHealthOrganization，WHO) 、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織( InternationalOrganization forStandardization， ISO) 等國(guó)際組織都有專門(mén)的關(guān)于方法學(xué)驗(yàn)證的指導(dǎo)原則。其中美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局( U.S.Food and DrugAdministration，FDA) 在2000 年和2001 年分別發(fā)布了“化學(xué)藥品分析步驟和分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”和“生物分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”; 歐洲藥品監(jiān)督管理局( European MedicinesAgency，EMEA) 于2004 年發(fā)布的GMP 指導(dǎo)原則對(duì)分析方法驗(yàn)證有明確的要求，并于2011 年7 月21 日發(fā)布了“生物分析方法驗(yàn)證指南( guideline onbioanalytical method validation) ”，2012年2 月1 日生效，用于藥代動(dòng)力學(xué)和毒代動(dòng)力學(xué)研究中生物樣品定量測(cè)定的分析方法驗(yàn)證。

ICH 在1995 年和1996 年分別發(fā)布了Q2A“分析步驟驗(yàn)證－定義和術(shù)語(yǔ)”和Q2B“分析步驟驗(yàn)證－方法學(xué)”; ISO 17025 于2005 年發(fā)布的“檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室通用要求”第“5.4. 5”章節(jié)中對(duì)分析方法驗(yàn)證提出了非常具體的規(guī)定和要求。另外，美國(guó)藥典( USP) 、歐洲藥典( EP) 、日本藥局方(  JP) 和中國(guó)藥典( ChP) 都有專門(mén)的附錄收載分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則。

關(guān)于方法學(xué)確認(rèn)， ISO 17025: 2005 通篇只在“5.4.2”中有一小段描述: “……在進(jìn)行檢測(cè)或校準(zhǔn)之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確認(rèn)能夠正確操作這些標(biāo)準(zhǔn)方法。如果標(biāo)準(zhǔn)方法發(fā)生了變化，應(yīng)重新進(jìn)行確認(rèn)”。最早發(fā)布相應(yīng)技術(shù)文件專門(mén)闡述方法確認(rèn)的是歐洲藥品質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室聯(lián)盟( European Official MedicineControl Laboratories Network，OMCL) 。其在2005 年發(fā)布的質(zhì)量保證技術(shù)文件“分析方法驗(yàn)證”中指出。 ICH 分析方法驗(yàn)證的指導(dǎo)原則主要是針對(duì)制藥企業(yè)而制定的，規(guī)定制藥企業(yè)在制定藥品分析方法時(shí)需要驗(yàn)證哪些參數(shù)，用于向藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)證明該方法可行，產(chǎn)品質(zhì)量可控。而歐洲各國(guó)的官方藥品質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室從事的日常工作主要是根據(jù)藥典方法或者標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行藥品檢測(cè)分析，藥典方法或標(biāo)準(zhǔn)方法都是經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法，藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室在操作時(shí)，沒(méi)有必要再次對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證。但是藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室需要證明藥典方法或標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)本次檢驗(yàn)所測(cè)品種的適用性，即要進(jìn)行方法確認(rèn)。方法確認(rèn)具體內(nèi)容和方法的檢測(cè)類型有關(guān)，不同的檢測(cè)類型( 鑒別、雜質(zhì)分析、含量測(cè)定等) 方法確認(rèn)的內(nèi)容不同。

第1 次完整提出方法確認(rèn)( method verification) 這個(gè)概念的是USP 32 版。USP 32 版附錄〈1226〉中收載了一個(gè)新的指導(dǎo)原則“藥典分析方法確認(rèn)”( verification of compendial method) ，對(duì)方法確認(rèn)的概念、方法確認(rèn)的適用范圍進(jìn)行了詳細(xì)闡述，至于方法確認(rèn)的具體內(nèi)容，USP 沒(méi)有詳細(xì)說(shuō)明，只是給出了以下指導(dǎo)意見(jiàn):1) 通過(guò)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)室的操作能力和證明檢驗(yàn)系統(tǒng)符合方法要求; 2) 判斷方法的復(fù)雜程度; 3) 確定方法操作的關(guān)鍵步驟和影響檢驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵方法學(xué)參數(shù); 4) 根據(jù)方法的復(fù)雜程度，選擇最為關(guān)鍵的幾個(gè)方法學(xué)參數(shù)進(jìn)行考察。

藥品質(zhì)量分析根據(jù)被測(cè)物的不同，分析方法通常可分為化學(xué)藥品分析方法( analytical method) 和生物檢定方法( biological assay，or bioassay) 。

化學(xué)藥品分析方法是指采用分析儀器或者裝置，對(duì)化學(xué)藥品( 包括中藥) 中的成分進(jìn)行定性或者定量檢測(cè)分析。由于化學(xué)藥品成分相對(duì)單一和結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單，因此，相對(duì)應(yīng)供試品溶液的制備方法和檢驗(yàn)檢測(cè)也比較簡(jiǎn)單，易于操作，能夠影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素比較少，對(duì)于同一份樣品來(lái)說(shuō)，比較容易獲得一致的檢驗(yàn)結(jié)果。

生物制品( 包括疫苗、抗體、細(xì)胞因子、酶等) 的分析方法通常叫做“生物檢定方法”。根據(jù)ICH 的定義，生物檢定的內(nèi)容包括: 測(cè)定某個(gè)特定器官對(duì)某個(gè)生物制品的生物學(xué)反應(yīng)、測(cè)定細(xì)胞水平的生化或者生理學(xué)反應(yīng)、免疫學(xué)作用下的酶反應(yīng)速率或者生物學(xué)反應(yīng)以及配體或者受體結(jié)合反應(yīng)。由于生物制品的復(fù)雜性，生物檢定方法的范圍很廣，包括理化分析方法、效價(jià)測(cè)定方法、細(xì)胞活性測(cè)定、酶活性測(cè)定、免疫測(cè)定等，隨著新技術(shù)和新生物制品的不斷出現(xiàn)，生物檢定的范圍仍在繼續(xù)不斷擴(kuò)大。由于方法的多樣性，長(zhǎng)期以來(lái)國(guó)際上很難形成一個(gè)統(tǒng)一的生物檢定方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則。在日常檢驗(yàn)工作和生物檢定方法建立的過(guò)程中，也缺乏相應(yīng)的參考標(biāo)準(zhǔn)和指導(dǎo)文件。2013 年5月1 日開(kāi)始正式執(zhí)行的USP36 版，在其附錄〈1032〉“生物檢定方法設(shè)計(jì)和建立( design and developmentof biological assay ) ”、〈1033〉“生物檢定方法驗(yàn)證( biological assayvalidation)”和〈1034〉“生物檢定數(shù)據(jù)的分析( analysis ofbiologicalassay) ”中，對(duì)生物檢定方法的建立和驗(yàn)證進(jìn)行了比較全面的闡述，這是目前國(guó)際上最新，也是內(nèi)容最為全面的關(guān)于生物檢定方法驗(yàn)證的指導(dǎo)原則和參考文件，非常具有借鑒意義。

除以上提到的化學(xué)分析方法和生物檢定方法外，有人把專門(mén)對(duì)生物基質(zhì)( 如血液、血清、血漿或尿液) 中的藥物或者代謝產(chǎn)物進(jìn)行定量測(cè)定的分析方法叫做生物分析方法( bioanalytical method)。其結(jié)果用于評(píng)價(jià)藥物的臨床前和臨床試驗(yàn)效果，包括生物等效性、生物利用度、藥代動(dòng)力學(xué)和毒代動(dòng)力學(xué)等，這對(duì)于藥品研發(fā)來(lái)說(shuō)至關(guān)重要，在藥品注冊(cè)時(shí)，這些研究材料都要提交給藥品監(jiān)管當(dāng)局進(jìn)行審評(píng)。

單從分析方法手段和操作過(guò)程來(lái)說(shuō)，生物分析方法和化學(xué)藥品分析方法屬于同一范疇，都是采用分析儀器( 液相色譜、氣相色譜、質(zhì)譜等) 和手段對(duì)被測(cè)物進(jìn)行定性和定量分析。但由于樣品的特殊性，相對(duì)于化學(xué)藥品分析方法來(lái)說(shuō)，生物分析方法更加復(fù)雜和困難。這是因?yàn)樯飿悠分泻泻芏鄰?fù)雜的生物基質(zhì)，這些生物基質(zhì)對(duì)被分析物的準(zhǔn)確測(cè)定干擾很大，即所謂的基質(zhì)效應(yīng)。如何盡可能地消除基質(zhì)效應(yīng)，進(jìn)行合適的樣品前處理，是保證生物分析方法準(zhǔn)確有效的關(guān)鍵因素。另外生物樣品的量一般都非常少，給樣品分析和方法驗(yàn)證帶了很多不便; 再者，由于生物分析方法的結(jié)果用于計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果，進(jìn)而評(píng)價(jià)藥物在體內(nèi)的行為，因此對(duì)生物分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性要求非常高。正是基于以上特點(diǎn)，相對(duì)于化學(xué)藥品分析方法，生物分析方法的驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移和確認(rèn)更加復(fù)雜和煩瑣。但由于采用的分析手段和試驗(yàn)操作基本上一致，因此兩者方法驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移和確認(rèn)的基本原則和驗(yàn)證項(xiàng)目總體上是一致的。

解析各國(guó)藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)發(fā)布的指導(dǎo)原則以及ISO 17025 的規(guī)范性文件中關(guān)于方法學(xué)驗(yàn)證的內(nèi)容中，一般都會(huì)提到以下3 個(gè)概念: 方法驗(yàn)證( methodvalidation) 、方法轉(zhuǎn)移( method transfer) 和方法確認(rèn)( method verification) ，三者既相互聯(lián)系又有區(qū)別，都是為了保證檢驗(yàn)方法適合于檢驗(yàn)、被檢樣品質(zhì)量可控，同時(shí)確保檢驗(yàn)人員有能力操作方法; 但由于檢驗(yàn)?zāi)康?/span>、檢驗(yàn)人員、檢驗(yàn)環(huán)境等因素的不同，以上3 個(gè)概念的內(nèi)涵和側(cè)重點(diǎn)又有所不同。由于國(guó)內(nèi)關(guān)于方法學(xué)驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移和確認(rèn)的內(nèi)容大部分都是由英文版本翻譯而來(lái)，不同檢測(cè)領(lǐng)域的譯者和專家在翻譯過(guò)程中理解程度和術(shù)語(yǔ)用詞都不盡相同，另外，除方法學(xué)驗(yàn)證外，目前國(guó)內(nèi)外很少有專門(mén)闡述方法轉(zhuǎn)移和方法確認(rèn)的公開(kāi)指導(dǎo)原則和技術(shù)文件。以上原因?qū)е聡?guó)內(nèi)藥檢系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理人員和檢驗(yàn)人員對(duì)方法驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移和確認(rèn)的概念不清，理解混亂，尤其是方法確認(rèn)，各地藥檢人員在實(shí)際工作中缺乏明確統(tǒng)一的指導(dǎo)，具體做法不盡一致，造成了很多不必要的重復(fù)勞動(dòng)，且浪費(fèi)資源。本文結(jié)合國(guó)際上有關(guān)的指導(dǎo)原則對(duì)這3 個(gè)概念進(jìn)行解析。

3.1 方法驗(yàn)證

WHO、FDA、USP 和ISO 17025 對(duì)于分析方法驗(yàn)證的定義和解釋基本一致，其核心是實(shí)驗(yàn)室通過(guò)試驗(yàn)設(shè)計(jì)和測(cè)試，證明被驗(yàn)證的方法適用于該方法擬定的檢測(cè)用途。從這個(gè)定義可以看出，方法驗(yàn)證主要由方法建立者進(jìn)行，方法建立者必__須要證明所建立的方法能夠滿足期望的檢測(cè)用途。由于大部分藥品質(zhì)量控制方法是由生產(chǎn)企業(yè)建立，因此方法學(xué)驗(yàn)證的工作大部分是由企業(yè)的分析方法研發(fā)部門(mén)來(lái)進(jìn)行。制藥企業(yè)在研發(fā)產(chǎn)品的過(guò)程中，隨著產(chǎn)品研發(fā)過(guò)程的不斷深入，產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法也在根據(jù)產(chǎn)品的變化而不斷調(diào)整和優(yōu)化，最終形成一個(gè)終產(chǎn)品質(zhì)量控制方法。企業(yè)的研發(fā)部門(mén)在建立質(zhì)量控制方法時(shí)，需要對(duì)該方法進(jìn)行充分的驗(yàn)證，以證明所建立的質(zhì)量控制方法能夠達(dá)到控制本產(chǎn)品質(zhì)量的目的。在方法驗(yàn)證的過(guò)程中，為了證明方法可行，就要對(duì)方法學(xué)涉及的相關(guān)參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，具體驗(yàn)證哪些參數(shù)和方法的用途有關(guān)。

許多國(guó)家和地區(qū)的藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)以及國(guó)際組織都有各自的分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則，這些指導(dǎo)原則中要求的驗(yàn)證參數(shù)也不盡相同，而且不同指導(dǎo)原則對(duì)有些參數(shù)的定義也存在差異，為了能夠有一個(gè)統(tǒng)一的術(shù)語(yǔ)和定義，來(lái)自歐盟、美國(guó)和日本藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)和制藥工業(yè)的專家組成ICH 工作小組制定了方法學(xué)驗(yàn)證參數(shù)定義、驗(yàn)證要求，形成了ICH 相關(guān)指導(dǎo)原則，該原則是目前方法學(xué)驗(yàn)證最具代表性的一個(gè)指導(dǎo)原則。表1 中列出了ChP、USP、EP 和ISO17025 中定義和要求的方法學(xué)驗(yàn)證參數(shù)。

同時(shí)，由于方法的檢測(cè)目的不同，各方指導(dǎo)原則對(duì)于不同檢測(cè)目的的方法所要求的驗(yàn)證的參數(shù)也有所不同，表2 中列出了ICH 指導(dǎo)原則中規(guī)定的不同檢驗(yàn)?zāi)康男枰?yàn)證的參數(shù)。

3. 2 方法轉(zhuǎn)移

一個(gè)實(shí)驗(yàn)室建立了分析方法并經(jīng)過(guò)驗(yàn)證后，當(dāng)其他實(shí)驗(yàn)室( 方法接收實(shí)驗(yàn)室) 在使用這個(gè)方法進(jìn)行檢驗(yàn)檢測(cè)時(shí)，就牽涉到方法在2 個(gè)不同實(shí)驗(yàn)室之間的轉(zhuǎn)移問(wèn)題，接收方法的實(shí)驗(yàn)室需要證明其能夠成功地在本實(shí)驗(yàn)室中運(yùn)行該方法，這就是所謂的方法轉(zhuǎn)移。常見(jiàn)的方法轉(zhuǎn)移情況有: 分析方法由公司的研發(fā)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)移到質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室; 由于生產(chǎn)線轉(zhuǎn)移使分析方法從A 生產(chǎn)地點(diǎn)轉(zhuǎn)移到B 生產(chǎn)地點(diǎn); 分析方法由某公司轉(zhuǎn)移到合同公司; 由于X公司購(gòu)買(mǎi)了Y 公司的產(chǎn)品，方法由Y 公司轉(zhuǎn)移到X公司。目前，很多大型跨國(guó)制藥企業(yè)都建立了其內(nèi)部的方法學(xué)轉(zhuǎn)移指導(dǎo)文件和規(guī)程，但沒(méi)有一個(gè)官方指導(dǎo)原則來(lái)具體說(shuō)明接收方法的實(shí)驗(yàn)室如何具體操作。唯一比較有名的一個(gè)指導(dǎo)性文件是2009 年美國(guó)藥典附錄專家委員會(huì)在美國(guó)藥典論壇上發(fā)表了一篇題為“分析方法轉(zhuǎn)移－新附錄的建議”的論述性文章。

方法轉(zhuǎn)移這個(gè)概念包含3 個(gè)要素，即方法建立實(shí)驗(yàn)室、方法接收實(shí)驗(yàn)室和比對(duì)性測(cè)試。所謂的轉(zhuǎn)移，就必須至少包括2 個(gè)實(shí)驗(yàn)室，即方法建立實(shí)驗(yàn)室和方法接收實(shí)驗(yàn)室。方法建立實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)分析方法的建立和驗(yàn)證，當(dāng)其他實(shí)驗(yàn)室需要按照已經(jīng)建立好的方法進(jìn)行檢驗(yàn)檢測(cè)時(shí)，這些實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)稱為方法接收實(shí)驗(yàn)室。方法接收實(shí)驗(yàn)室需要證明其能夠成功地在本實(shí)驗(yàn)室操作該方法，最常用的方式就是比對(duì)性測(cè)試，如果接收實(shí)驗(yàn)室采用該方法對(duì)樣品測(cè)定的結(jié)果與方法建立實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的結(jié)果兩者之間比對(duì)的結(jié)果符合轉(zhuǎn)移之前確定的相關(guān)接受標(biāo)準(zhǔn)，就說(shuō)明方法接收實(shí)驗(yàn)室能夠和方法建立實(shí)驗(yàn)室一樣有能力成功地操作此方法，方法轉(zhuǎn)移成功。被測(cè)樣品的數(shù)量與方法的重要性、復(fù)雜性和接受實(shí)驗(yàn)室此前是否有操作此類方法的經(jīng)驗(yàn)有關(guān)。在方法轉(zhuǎn)移之前，要注意確保方法接收實(shí)驗(yàn)室的工作人員對(duì)方法中涉及的關(guān)鍵參數(shù)有詳細(xì)的了解。另外很重要的是建立一份詳細(xì)的轉(zhuǎn)移步驟程序，確保雙方實(shí)驗(yàn)室有關(guān)人員之間有良好的溝通。轉(zhuǎn)移程序要說(shuō)明檢測(cè)內(nèi)容和雙方實(shí)驗(yàn)室的職責(zé)，同時(shí)要確定各參數(shù)的轉(zhuǎn)移可接收范圍。

比對(duì)性測(cè)試中考慮的因素包括: 被測(cè)樣品的數(shù)量、批次( 比如2～ 5批) ，被測(cè)樣品的濃度級(jí)別( 比如1～3個(gè)濃度) ，重復(fù)測(cè)定次數(shù)( 比如4～6次) ，被分析物個(gè)數(shù)( 比如1～2 個(gè)) ，分析時(shí)間( 比如2～ 5d) ，來(lái)自1 個(gè)或多個(gè)企業(yè)的分析儀器( 2個(gè)實(shí)驗(yàn)室都用相同的儀器) 。

對(duì)于我國(guó)藥品檢驗(yàn)所來(lái)說(shuō)，涉及方法轉(zhuǎn)移的一項(xiàng)日常工作就是進(jìn)口藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核。根據(jù)我國(guó)《藥品注冊(cè)管理辦法》規(guī)定，當(dāng)國(guó)外藥品申請(qǐng)?jiān)谥袊?guó)注冊(cè)上市時(shí)，需要報(bào)送3 批樣品在中國(guó)食品藥品檢定研究院或各口岸藥品檢驗(yàn)所進(jìn)行進(jìn)口藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核，同時(shí)提交相應(yīng)的分析方法、方法學(xué)驗(yàn)證資料以及3 批樣品的出廠檢驗(yàn)結(jié)果。復(fù)核過(guò)程通常是在對(duì)3 批樣品進(jìn)行分析檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上判斷企業(yè)的分析方法是否可行，產(chǎn)品質(zhì)量是否可控，提出具體復(fù)核意見(jiàn)，最終制定出藥品進(jìn)口注冊(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于有些處方成分較多、分析方法復(fù)雜的品種，在制定進(jìn)口注冊(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的某些檢驗(yàn)項(xiàng)目時(shí)( 比如含量測(cè)定或有關(guān)物質(zhì)測(cè)定) ，會(huì)按照企業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)中的檢驗(yàn)方法，不做改動(dòng)。這種情況就是方法轉(zhuǎn)移過(guò)程，涵蓋了方法轉(zhuǎn)移的3 個(gè)要素。方法建立實(shí)驗(yàn)室是生產(chǎn)企業(yè)的研發(fā)實(shí)驗(yàn)室或質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室，方法接收實(shí)驗(yàn)室是進(jìn)口藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核實(shí)驗(yàn)室。在復(fù)核過(guò)程中有一個(gè)很重要的步驟就是復(fù)核實(shí)驗(yàn)室將3 批樣品測(cè)定的結(jié)果與企業(yè)的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，一方面證明方法在不同實(shí)驗(yàn)室對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的可控性，另一方面證明方法的可行性( 即復(fù)核實(shí)驗(yàn)室能夠成功地操作企業(yè)建立的分析方法) 。

3. 3 方法確認(rèn)

在日常檢驗(yàn)工作中，經(jīng)常將方法確認(rèn)和方法轉(zhuǎn)移以及方法驗(yàn)證這3 個(gè)概念相混淆，尤其是方法確認(rèn)，大家的理解參差不齊，做法各異。方法確認(rèn)的核心有三點(diǎn)，第一: 方法確認(rèn)必須是對(duì)藥典分析方法或者法定分析方法進(jìn)行確認(rèn); 第二: 證明藥典分析方法或法定分析方法適用于被測(cè)樣品，被測(cè)樣品的質(zhì)量可控，方法可行; 第三: 證明方法使用人員有能力成功地操作藥典分析方法或者法定分析方法。

關(guān)于方法確認(rèn)，目前，WHO、ISO 17025、美國(guó)FDA 以及USP 發(fā)布的指導(dǎo)原則對(duì)于上述第一點(diǎn)是非常一致的，只要說(shuō)到方法確認(rèn)，一定是對(duì)藥典分析方法或者法定分析方法進(jìn)行確認(rèn)。對(duì)于第二點(diǎn)和第三點(diǎn)來(lái)說(shuō)，WHO 和美國(guó)USP、FDA 的定義在側(cè)重點(diǎn)方面各有不同。WHO 在藥品質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范( good practice for quality control laboratories，GPCL) 中明確指出: 方法確認(rèn)是證明一個(gè)藥典分析方法或者經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的法定分析方法適用于本次檢驗(yàn)的過(guò)程。WHO 的定義側(cè)重于強(qiáng)調(diào)第二點(diǎn)，即證明藥典分析方法對(duì)產(chǎn)品的適用性。ISO 17025和美國(guó)FDA、USP 對(duì)方法確認(rèn)的定義基本上可以總結(jié)為: 檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室和方法使用者應(yīng)該證明其對(duì)藥典方法有充分的了解并且有能力重現(xiàn)藥典方法。可見(jiàn)，ISO 17025 和美國(guó)FDA、USP 對(duì)方法確認(rèn)的定義側(cè)重于第三點(diǎn)，即強(qiáng)調(diào)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室和檢驗(yàn)人員操作藥典方法的能力。如果將WHO 和美國(guó)USP、FDA 的定義結(jié)合起來(lái)，就是一個(gè)相對(duì)完整的方法學(xué)確認(rèn)的定義，即: 方法確認(rèn)的目的是證明藥典分析方法或法定分析方法適用于被測(cè)樣品，被測(cè)樣品的質(zhì)量可控，方法可行，同時(shí)還證明方法使用人員有能力成功地操作藥典分析方法或者法定分析方法。

通過(guò)以上概念的解析可以看出，藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室在采用藥典分析方法或者法定分析方法進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，不需要再對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證，但是需要進(jìn)行方法確認(rèn)，以證明承檢實(shí)驗(yàn)室能夠正確地操作藥典方法。具體確認(rèn)需要進(jìn)行哪些內(nèi)容，則沒(méi)有明確的規(guī)定，僅根據(jù)方法本身的特點(diǎn)和檢驗(yàn)人員對(duì)方法操作的熟練程度由檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室自己確定。USP 在其附錄〈1226〉“藥典分析方法確認(rèn)(verification ofcompendialmethods) ”中對(duì)藥典分析方法確認(rèn)需要確認(rèn)哪些內(nèi)容給出了以下指導(dǎo)意見(jiàn): 1) 通過(guò)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)室的操作能力和證明系統(tǒng)符合方法要求; 2) 判斷方法的復(fù)雜程度; 3) 確定方法操作的關(guān)鍵步驟和影響檢驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵方法學(xué)參數(shù); 4) 根據(jù)方法的復(fù)雜程度，選擇最為關(guān)鍵的幾個(gè)方法學(xué)參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。

從USP 的闡述可以看出，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)是一個(gè)重要的方法學(xué)確認(rèn)內(nèi)容，通過(guò)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)來(lái)證明實(shí)驗(yàn)室的操作能力和證明系統(tǒng)符合方法要求，但是方法確認(rèn)僅僅做系統(tǒng)適用性試驗(yàn)還不夠，完整的方法確認(rèn)相當(dāng)于對(duì)方法的適用性進(jìn)行考察，就是實(shí)驗(yàn)人員根據(jù)對(duì)方法的理解，除了系統(tǒng)適用性試驗(yàn)外，還要選擇幾個(gè)認(rèn)為對(duì)該方法來(lái)說(shuō)最為關(guān)鍵的方法學(xué)參數(shù)進(jìn)行考察。方法驗(yàn)證、方法轉(zhuǎn)移和方法確認(rèn)的聯(lián)系與區(qū)別見(jiàn)表3。

2003 年日本藤澤公司申請(qǐng)注冊(cè)進(jìn)口他克莫司軟膏劑( 2種規(guī)格: 30g:0.03%支－1 和30g:0.1%支－1) ，用于治療過(guò)敏性皮炎。筆者所在實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)了進(jìn)口注冊(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核工作。按照要求，藤澤公司報(bào)送2 個(gè)規(guī)格各3 批樣品、空白軟膏基質(zhì)、含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)測(cè)定所需標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并提交了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、方法學(xué)驗(yàn)證資料及3 批樣品的出廠檢驗(yàn)結(jié)果。

下面以他克莫司軟膏劑的含量測(cè)定為例來(lái)說(shuō)明方法驗(yàn)證、方法轉(zhuǎn)移和方法確認(rèn)的整個(gè)過(guò)程。

4.1 方法驗(yàn)證

本品采用HPLC 法進(jìn)行含量測(cè)定。鑒于軟膏樣品的特殊性和本品含量測(cè)定方法的復(fù)雜性，復(fù)核實(shí)驗(yàn)室決定在重現(xiàn)企業(yè)分析方法的基礎(chǔ)之上按照企業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草進(jìn)口注冊(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。由于含量測(cè)定方法由企業(yè)建立，因此企業(yè)在提供質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的同時(shí)也提供了完整的HPLC 法含量測(cè)定的方法學(xué)驗(yàn)證資料和數(shù)據(jù)。復(fù)核實(shí)驗(yàn)室對(duì)企業(yè)的方法學(xué)驗(yàn)證資料和數(shù)據(jù)進(jìn)行了審核，認(rèn)為企業(yè)的含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明該法對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量可控。

4. 2 方法轉(zhuǎn)移

鑒于該品種處方和含量測(cè)定方法的復(fù)雜性，復(fù)核實(shí)驗(yàn)室決定起草的進(jìn)口注冊(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定方法按照企業(yè)方法制定，不做改動(dòng)。復(fù)核實(shí)驗(yàn)室根據(jù)企業(yè)提供的含量測(cè)定方法，對(duì)企業(yè)提供的2個(gè)規(guī)格6 批樣品進(jìn)行了檢驗(yàn)，并將檢驗(yàn)結(jié)果與企業(yè)提供的出廠檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了比對(duì)，見(jiàn)表4。

這個(gè)過(guò)程就是一個(gè)完整的方法轉(zhuǎn)移過(guò)程，方法建立實(shí)驗(yàn)室是日本藤澤公司研發(fā)實(shí)驗(yàn)室，方法接收實(shí)驗(yàn)室是復(fù)核實(shí)驗(yàn)室，檢驗(yàn)結(jié)果的比對(duì)結(jié)果表明，2個(gè)規(guī)格共6 批樣品，復(fù)核實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)結(jié)果與企業(yè)出廠檢驗(yàn)結(jié)果之間的誤差均在1. 5% 之內(nèi)，滿足了預(yù)先設(shè)定的該品種含量測(cè)定方法差異的限度( 誤差不得過(guò)2%) ，說(shuō)明復(fù)核實(shí)驗(yàn)室有能力正確操作方法建立實(shí)驗(yàn)室建立的含量測(cè)定方法，方法轉(zhuǎn)移成功。在此基礎(chǔ)上，復(fù)核實(shí)驗(yàn)室根據(jù)企業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草了他克莫司軟膏劑含量測(cè)定進(jìn)口復(fù)核質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并上報(bào)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)。

4.3 方法確認(rèn)

該品種注冊(cè)申請(qǐng)成功后，由某口岸進(jìn)口，口岸藥品檢驗(yàn)所所根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的進(jìn)口藥品注冊(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行通關(guān)檢驗(yàn)。在檢驗(yàn)過(guò)程中，鑒于含量測(cè)定方法的復(fù)雜性，該口岸藥品檢驗(yàn)所經(jīng)常就檢驗(yàn)細(xì)節(jié)和注意事項(xiàng)與方法起草單位( 復(fù)核單位) 進(jìn)行溝通交流，雙方一致認(rèn)為: 由于含量測(cè)定供試品溶液制備過(guò)程中涉及到較為復(fù)雜的軟膏前處理過(guò)程( 軟膏稱量、有機(jī)溶劑提取、水浴、冰浴和離心等步驟) ，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果影響最大的一個(gè)關(guān)鍵方法學(xué)參數(shù)是精密度( 包括中間精密度) ，因此，口岸藥品檢驗(yàn)所在根據(jù)進(jìn)口注冊(cè)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)他克莫司軟膏劑進(jìn)行通關(guān)檢驗(yàn)時(shí)，除了系統(tǒng)適用性之外，還要對(duì)方法的精密度進(jìn)行考察，以充分保證口岸藥品檢驗(yàn)所能夠正確地按照進(jìn)口注冊(cè)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行通關(guān)檢驗(yàn)。以上過(guò)程就是一個(gè)典型的方法確認(rèn)過(guò)程，首先口岸藥品檢驗(yàn)所根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的進(jìn)口注冊(cè)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，也就是說(shuō)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)是法定標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)口檢驗(yàn)時(shí)需要進(jìn)行方法確認(rèn)。根據(jù)方法的特點(diǎn)，確定關(guān)鍵的方法學(xué)參數(shù)并對(duì)其進(jìn)行考察，以保證方法的正確操作。

藥品分析方法驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移和確認(rèn)的目的是證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)檢測(cè)要求和目的，被測(cè)樣品質(zhì)量可控，保證得到一致的、可靠的和準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果，同時(shí)也證明檢驗(yàn)人員有能力成功地操作分析方法。一個(gè)好的分析方法，對(duì)于獲得準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于分析方法驗(yàn)證的指導(dǎo)原則和技術(shù)文件很多，但是關(guān)于方法轉(zhuǎn)移和確認(rèn)的內(nèi)容很少; 同時(shí)，由于國(guó)內(nèi)很多技術(shù)文件都是由英文翻譯過(guò)來(lái)，而譯者的工作背景、語(yǔ)言用詞以及在理解程度上的不同，也造成國(guó)內(nèi)對(duì)方法驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移和確認(rèn)概念不清，理解不到位; 另一方面，現(xiàn)有的文件和指導(dǎo)原則大都是闡述原則性和定義的內(nèi)容，很少有具體實(shí)例，廣大藥檢工作者在實(shí)際工作中形成了“指導(dǎo)原則每個(gè)字都認(rèn)識(shí)，但是實(shí)際工作還是不知道如何做”的局面。希望通過(guò)本文的介紹，能幫助國(guó)內(nèi)藥品質(zhì)量控制人員理清概念，在實(shí)際工作中做到理論結(jié)合實(shí)際，并加以具體應(yīng)用。