主要區(qū)別：

固定相差別，輸液設(shè)備和檢測手段。

1.LC：僅作為一種分離手段；

①柱內(nèi)徑1~3cm，固定相粒徑>100μm且不均勻；

②常壓輸送流動相；

③柱效低（H↑，n↓）；

④分析周期長；

⑤無法在線檢測；

2.HPLC：分離和分析；

①柱內(nèi)徑2~6mm，固定相粒徑<10μm（球形，勻漿裝柱）；

②高壓輸送流動相；

③柱效高（H↓，n↑）；

④分析時間大大縮短；    

⑤可以在線檢測；

相同：

兼具分離和分析功能，均可以在線檢測；

主要差別：

分析對象的差別和流動相的差別；

1.分析對象

GC：

①能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點較低的樣品；

②高沸點、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品不可檢測，占有機物的20%；

HPLC：

①溶解后能制成溶液的樣品；

②不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制；

③分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及高分子；

④和離子型樣品均可檢測；

⑤用途廣泛，占有機物的80%；

2.流動相差別

GC：

①流動相為惰性氣體；

②組分與流動相無親合作用力，只與固定相作用；

HPLC：

①流動相為液體；

②流動相與組分間有親合作用力，為提高柱的選擇性、改善分離度增加了因素，對分離起很大作用；

③流動相種類較多，選擇余地廣；

④流動相極性和pH值的選擇也對分離起到重要作用；

⑤選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相；

⑥可以增大分離選擇性；

3.操作條件差別

GC：

加溫操作；

HPLC：

①室溫；

②高壓；（粘度大，峰展寬小）

1.固定相與裝柱方法的選擇：

選粒徑小的、分布均勻的球形固定相（dp≤10μm）；

首選化學(xué)鍵合相，勻漿法裝柱；

2.流動相及其流速的選擇：

選粘度小、低流速的流動相—甲醇，1mL/min；

3.柱溫的選擇：

選室溫25℃左右；

（一)液固吸附色譜法（LSC）      

 流動相為液體，固定相為固體吸附劑；
1．分離機制：

利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定相表面吸附活性中心能力差異； 
分離前提：

K不等或k不等；
2．固定相：

與LC比，固定相粒徑不同（<10μm）； 
3．流動相：

底劑（烷烴）+有機極性調(diào)節(jié)劑；   
※例：正己烷或庚烷+氯仿。。。
4．影響K的因素：

與固定相性質(zhì)和流動相性質(zhì)有關(guān)；
溶質(zhì)分子極性↑，洗脫能力↓，k↑，tR↑；
溶劑系統(tǒng)極性↑，洗脫能力↑，k↓，tR↓；
注：調(diào)節(jié)溶劑極性，可以控制組分的保留時間；
5．出柱順序：

強極性組分后出柱，弱極性組分先出柱；
6．硅膠吸水量↑，LSC→LLC
硅膠含水量較小，吸附色譜，硅膠極性較大；
硅膠含水量>17% ，分配色譜，硅膠失活→載體；
吸附的水→固定液
(二)液-液分配色譜法（LLC）
1．分離機制：

利用組分在兩相中溶解度的差異
2．固定相：

載體+固定液（物理或機械涂漬法）
缺點：

系統(tǒng)內(nèi)部壓力大，易流失，不實用
固定液-極性→NLLC

固定液-非極性→RLLC
3.①正相色譜-固定液極性>流動相極性（NLLC）
極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱：適于分離極性組分；
②反相色譜-固定液極性<流動相極性（RLLC）

極性大的組分先出柱，極性小的組分后出柱：適于分離非極性組分；
(三)化學(xué)鍵合相色譜法（BPC）
1.化學(xué)鍵合相 
（1）分離機制：

分配+吸附（以LLC為基礎(chǔ)）；
（2）特點：
 1）不易流失；
 2）熱穩(wěn)定性好；
 3）化學(xué)性能好；
 4）載樣量大；
 5）適于梯度洗脫；
2.反相鍵合相色譜
（1）分離機制：

疏溶劑理論； 
正相-流動相與溶質(zhì)排斥力強，作用時間↑，K↑，組分tR↑；
反相-流動相與溶質(zhì)排斥力弱，作用時間↓，K↓，組分tR↓；
（2）固定相：

極性小的烷基鍵合相；
C8柱，C18柱（ODS柱-HPLC約80%問題）；
（3）流動相：

極性大的甲醇-水或乙腈-水；
流動相極性>固定相極性；
底劑+有機調(diào)節(jié)劑（極性調(diào)節(jié)劑）；
例：水+甲醇，乙腈，THF；
（4）流動相極性與k的關(guān)系：

流動相極性↑，洗脫能力↓，k↑，組分tR↑
（5）出柱順序：

極性大的組分先出柱；

極性小的組分后出柱；
（6）適用：

非極性~中等極性組分（HPLC 80%問題）

3.正相鍵合相色譜
(1)分離機制：

溶質(zhì)分子與固定相之間定向作用力、誘導(dǎo)力、或氫鍵作用力
(2)固定相：

極性大的氰基或氨基鍵合相；
(3)流動相：

極性小（同LSC）；底劑+有機極性調(diào)節(jié)劑； 
例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇；
(4)流動相極性與K的關(guān)系：
流動相極性↑，洗脫能力↑，組分tR↓，k↓；
(5)出柱順序：

結(jié)構(gòu)相近組分，極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱；
(6)適用：
氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似（極性稍小），分離物質(zhì)也相似；
氨基鍵合相與硅膠性質(zhì)差別大，堿性，分析極性大物質(zhì)、糖類等；
4.離子對色譜和離子抑制色譜
反相離子對色譜法（IPC或PIC） 
反相色譜中，在極性流動相中加入離子對試劑，使被測組分與其中的反離子形成中性離子對，增加K和tR，以改善分離；
(1)離子對試劑：

烷基磺酸鈉→分析堿
四丁基季胺鹽→分析酸
(2)影響K的因素:
a．與m的極性有關(guān)（同反相色譜）；
b．與R的鏈長有關(guān)：R↑長，極性↓小，tR↑，k↑；
(3)適用：

較強的有機酸、堿；

反相離子抑制色譜；
在反相色譜中，通過加入緩沖溶液調(diào)節(jié)流動相pH值，抑制；
組分解離，增加其K和tR，以達到改善分離目的；
1）離子抑制劑：

弱酸、弱堿性物質(zhì)；

 pH一定的緩沖溶液；
2）K的影響因素：

與流動相極性有關(guān)，還與pH值有關(guān)；
選擇流動相：

應(yīng)同時考慮極性及pH值； 
酸性物質(zhì)-加入酸HAc，tR↑，K↑； 
堿性物質(zhì)-加入堿NH3·H2O，tR↑，K↑；  
調(diào)節(jié)pH范圍：

3.0~8.0；
pH>8.0破壞鍵合相與載體的結(jié)合；
pH<3.0腐蝕柱子；
3）適用：

極弱酸堿物質(zhì)；
pH=3~7弱酸；

pH=7~8弱堿；

兩性化合物。