黃曲霉毒素（AFT）是一類毒性極強的化合物，具有強致癌性，有B1、B2、G1、G2、M1、M2六種，廣泛存在于發霉糧食及其制品中，特別是花生、玉米及其制品。AFT其毒性遠遠高于氰化物、砷化物及有機農藥的毒性，其中以B1毒性最大、致癌力最強，M1、G1次之，其毒性作用主要是對肝臟的損害。如果奶牛吃了被黃曲霉毒素污染的谷物或飼料，牛奶就會被污染，國家質檢總局規定AFB1是大部分食品的必檢項目之一。

適用于牛奶、奶粉中黃曲霉毒素的檢測。

儀器、試劑與材料

主要儀器設備

高效液相色譜儀，紫外檢測器，SPE固相萃取裝置，旋轉蒸發儀，真空泵，渦旋振蕩儀，離心機。

試劑材料

市售濃縮牛奶，黃曲霉毒素B1標品，乙腈、異丙醇（均色譜純），無水乙醇、三氟乙酸、正己烷（均為分析純）。

色譜柱：ATEO-C18（5 μm，120Å，4.6×250 mm，訂貨號：152200542）

SPE柱：AE.SPE-AFT（1500 mg/12mL）

樣品提取

準確稱取2 g牛奶于50 mL離心管中，加入2 mL乙腈，充分振蕩1min；再加入4 mL乙腈，充分混合1 min；4000 r/min離心5 min，取上清液4 mL待凈化。

SPE柱凈化

（1）活化：使用前先將小柱保護液自然流出，再加10 mL乙腈進行活化，流出液棄去。

（2）上樣：將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速過柱，收集流出液。

（3）洗脫：用10 mL乙腈洗脫，收集流出液，合并步驟（2）、（3）流出液。

（4）重新溶解：流出液于40℃下減壓蒸餾至體積約2 mL，冷卻后向旋蒸瓶中加入5 mL無水乙醇，繼續減壓蒸餾至完全干燥。

（5）衍生：冷卻后，依次加入0.5 mL 正己烷和0.5 mL三氟乙酸，充分混勻衍生液，45℃靜置10 min。待衍生液揮干后，用10% 乙腈水溶液定容至0.5 mL，0.45 μm微孔濾膜過濾，供HPLC測定。

液相色譜條件

色  譜  柱：ATEO-C18（250 * 4.6 mm，5 μm）

檢  測  器：UV2996型紫外/可見光檢測器

檢測波長：UV360 nm                

流  動  相：A：B=65:35   A：100% 水   B：甲醇/乙腈（v/v=1/1）

流        速：1.0 mL/min

柱        溫：30℃

進  樣  量：20 μL

采用上述方法進行固相萃取和高效液相色譜檢測牛奶中的黃曲霉毒素，添加回收率達86.77%，表明使用AE.SPE-AFT固相萃取柱及ATEO-C18柱，可檢測乳制品中黃曲霉毒素B1。