一、細胞遷移

細胞遷移實驗是研究細胞在體外條件下移動能力的一種實驗方法，廣泛應用于細胞生物學、腫瘤學和免疫學等領域。細胞遷移實驗基于細胞對環境變化的反應能力，這些變化可以是物理的（如空間間隙）或化學的（如梯度差）。實驗目的是模擬并觀察細胞如何在這些條件變化下移動，從而了解細胞遷移的機制和影響因素。

1、細胞劃痕實驗

（文獻：Cell Migration and Invasion Assays as Tools for Drug Discovery）

以下是細胞遷移實驗的基本步驟：

1）在適當的培養皿中培養細胞至約80-90%匯合。

2）用無菌移液槍頭或劃痕工具在細胞單層上劃出一道劃痕，模擬傷口。輕輕清洗培養皿以去除浮動細胞。

3）添加新的培養基，可以根據實驗需要添加不同的處理物質（如藥物、細胞因子等）。

4）使用顯微鏡觀察并拍攝劃痕后的即時圖像（0小時）。將培養皿放回培養箱。

5）定期（如6小時、12小時、24小時等）取出培養皿，觀察并拍攝細胞遷移的圖像。

6）使用圖像分析軟件（如ImageJ）測量不同時間點劃痕的寬度或遷移的細胞數。計算細胞遷移率并進行統計分析。

7）匯總實驗數據，繪制細胞遷移曲線圖。

結果圖展示：

（文獻：Stathmin通過促進偽足形成介導TNF-α誘導的皮膚成纖維細胞遷移）

2、Transwell遷移實驗

以下是基本步驟：

1）在24孔板中放置Transwell插入物。向每個Transwell上室添加適量無血清培養基（通常為100-200 µL），向下室添加含有化學誘導劑的培養基（通常為600-800 µL）。

2）用無菌PBS清洗培養的細胞。使用胰酶消化細胞，并加入含有無血清培養基的管中中止消化。計數細胞，并調整細胞懸液至適當濃度（例如1×105 cells/mL）。

3）向Transwell上室中添加適量的細胞懸液（通常為100-200 µL）。小心處理以避免氣泡形成。

4）將Transwell板放入37°C、5% CO2培養箱中孵育24-48小時，以允許細胞遷移。

5）孵育結束后，取出Transwell插入物。

6）用無菌PBS輕輕清洗上室，去除未遷移的細胞。

7）用固定液（如甲醇或4%多聚甲醛）固定下室遷移的細胞，固定時間通常為10-15分鐘。

8）用PBS清洗并染色（如0.1%結晶紫染色或DAPI染色）。

9）用棉簽擦去上室膜上的未遷移細胞。使用顯微鏡觀察下室膜上的遷移細胞，并拍攝圖像。計數多個視野中的遷移細胞數，計算平均值。

10）匯總遷移細胞數量，進行統計分析，繪制細胞遷移圖。

結果圖展示：

二、細胞侵襲

（文獻：Mutational drivers of cancer cell migration and invasion）

細胞侵襲實驗模擬體內細胞穿越基質屏障的過程，通過在Transwell插入物的膜上涂覆一層基質膠（如Matrigel）來模擬ECM。細胞在引誘劑（如趨化因子或生長因子）存在下，穿過基質膠和帶孔的膜遷移到下室。這一過程涉及細胞對基質膠的降解和穿透能力，是研究癌細胞侵襲性的重要方法。

1、Transwell細胞侵襲實驗 

以下是實驗步驟：

1）選擇合適孔徑（通常為8 µm）的Transwell插入物。在插入物的膜上均勻涂覆一層基質膠（如Matrigel），模擬ECM。

2）將插入物放置在24孔板中，讓基質膠在37°C下固化（通常需要30分鐘至1小時）。

3）用無菌PBS清洗培養的細胞。使用胰酶消化細胞，并加入含有無血清培養基的管中中止消化。計數細胞，并調整細胞懸液至適當濃度（例如1×105 cells/mL）。

4）向Transwell上室中添加適量的細胞懸液（通常為100-200 µL）。向下室添加含有化學引誘劑的培養基（通常為600-800 µL）。

5）將Transwell板放入37°C、5% CO2培養箱中孵育24-72小時，以允許細胞侵襲。

6）孵育結束后，取出Transwell插入物。用無菌PBS輕輕清洗上室，去除未侵襲的細胞。用固定液（如甲醇或4%多聚甲醛）固定下室侵襲的細胞，固定時間通常為10-15分鐘。用PBS清洗并染色（如0.1%結晶紫染色或DAPI染色）。

7）用棉簽擦去上室膜上的未侵襲細胞。

8）使用顯微鏡觀察下室膜上的侵襲細胞，并拍攝圖像。計數多個視野中的侵襲細胞數，計算平均值。

9）匯總侵襲細胞數量，進行統計分析，繪制細胞侵襲圖。

結果圖展示：

三、注意事項

1）使用基質膠時，需要在鋪膠前將槍頭和耗材置于4度冰箱中，以避免配膠時直接凝固。同時，鋪膠的厚度需要摸索，注意鋪膠過程不要產生氣泡，保持均勻，以避免影響實驗結果。

2）在制備細胞懸液前，可以讓細胞進行12-24小時的血清饑餓，以去除血清的影響。消化細胞后，用PBS洗滌1-2遍，然后用無血清培養基重懸細胞。

3）細胞懸液的量需要摸索，例如200μl加入Transwell小室，下層培養液一般加入600μl含15%FBS的培養基。注意避免在小室和下層培養液之間產生氣泡，因為氣泡會減弱趨化作用。

4）在重復使用小室時，應注意避免損傷小室膜，并在使用前檢查是否有裂縫。

5）在小室內，細胞可能呈現非貼壁形態，而是圓形聚集成團，這屬于正常現象。

6）細胞接種時應盡量均勻，建議沿著壁緩慢加入。