多肽藥物是由氨基酸通過肽鍵連接而成的一類化合物，具有分子結構復雜、活性高、特異性強等特點。相較于小分子藥，多肽化學藥的技術要求在各國的監管體系下尚不完善，法規文件也較少，存在監管空白。本文將結合案例，深入分析多肽化學仿制藥的質量研究技術。

一、何為多肽類藥物？

1.1 多肽類藥物概念

多肽藥物為氨基酸通過肽鍵連接而成的一類化合物，通常具有明顯生物活性的多肽都可視為多肽藥物。多肽藥物可通過從天然物質中提取、化學合成、天然微生物發酵及生物重組表達等手段制備得到。

1.2 多肽類藥物分類

根據分泌部位可分為內源性與外源性生物活性肽。從藥品注冊角度來看，各國監管部門均按照多肽的制備方法進行分類。此外，美國FDA進一步細分不超過40個氨基酸組成的多肽及41-99個全合成多肽為多肽化學藥物，41-99個非化學合成多肽或100個以上氨基酸組成的多肽為多肽類生物制品。

1.3 多肽類藥物優勢

多肽藥物兼具小分子化藥和蛋白藥物的優點。而且，研發中可通過化學修飾優化其親和力、溶解性、藥代動力學和毒性，利于快速篩選出候選藥物。

圖1 多肽藥物與傳統小分子化藥和蛋白質藥物的比較（圖源：作者自制）

1.4 多肽類藥物市場

目前全球已批準上市多肽的藥物有100種以上，并有多種藥品已在國內上市，涉及消化、內分泌等各適應證領域。

圖2 全球銷售額前25的多肽類藥物（圖源：作者自制）

二、多肽化學仿制藥的監管現狀

由于多肽藥物研發難度大、技術壁壘高，國內外企業對多肽化學仿制藥的研發熱情較高。當前，國內多肽藥物仍以仿制藥為主，但創新藥占比逐年提升，總體上呈現出仿制藥與創新藥并存的情況。多肽化學仿制藥是指通過化學合成方法制備，與原研多肽藥物在結構、質量和療效上一致的仿制藥物。然而，由于多肽主要由氨基酸（包括天然氨基酸和非天然氨基酸）構成，這使得多肽類藥物在制備方法、結構確證、質量研究等方面又有與一般藥物不同的獨特問題，且存在一定的監管空白。

2.1 國內監管現狀

國家藥品監督管理局早在2007年就出臺了《合成多肽藥物藥學研究技術指導原則》，2023年2月又發布了12號最新文件，為多肽仿制藥的研發和監管進一步提供了參考依據。

圖3 CDE文件發布（圖源：CDE官網）

2.2 國外監管現狀

美國FDA曾于1994年頒布過關于遞交合成多肽原料藥申請藥學資料的相關要求，但已失效。2021年頒布了《仿制重組DNA來源藥物的高純度合成多肽藥物指導原則》，并公布了多個復雜多肽仿制藥的個藥指南。歐盟未曾發布專門針對多肽化學藥物的指導原則，僅在抗生素藥物雜質限度指導原則及歐洲藥典藥用物質通則中提到了多肽藥物雜質控制的一般要求。

三、多肽化學仿制藥質量研究的特殊技術要求

3.1 結構確證

多肽以氨基酸為基本單元，可以形成鏈狀、分支狀或環狀結構。與結構確證的小分子化學藥相比，多肽的結構確認不僅需要依賴元素分析、光譜、質譜等常規技術，更關鍵的是要結合其獨特的結構特征，采用專門的分析方法。這些方法包括用于確定一級結構的氨基酸組成和手性分析、序列分析或肽圖測繪，以及用于確定高級結構的圓二色散、熒光光譜、光散射和X射線衍射等。

3.2 聚集特性研究

部分多肽藥物會自發形成由少數幾個分子（寡聚物）或許多分子（多聚物）組成的超分子聚集結構。這種聚集現象與藥物本身的生物活性及其在體內的吸收、分布、代謝和排泄（藥代動力學）過程密切相關。為了研究這種性質，可以采用多種分析方法，例如分子排阻色譜法、光散射法、熒光分析法、分析超速離心法、凝膠電泳法、場流分離法以及核磁共振法等。

3.3 雜質研究

雖然我們要求仿制藥在結構和物質基礎方面與參比制劑等同，并且降解雜質譜也應無太大差異，但現實的挑戰在于，仿制藥的制備工藝幾乎不可能做到與原研藥完全相同。這就使得工藝中產生的雜質，特別是結構相似的肽類雜質，可能會出現明顯不同。對這些雜質的定性和定量分析，正是決定多肽化學仿制藥質量能否得到合理控制的核心環節。

四、多肽化學仿制藥質量研究的案例分析

4.1 醋酸地加瑞克

原料藥為化學合成線性十肽，易溶于水但會自發聚集。原研公司對聚集狀態進行了結構表征，美國FDA于2021年3月提出了該品種的個藥指南草案稿，明確仿制藥需滿足與參比制劑Q1和Q2的要求，需證明原料藥一級和二級結構及聚集性質與參比制劑的一致性等。

4.2 醋酸格拉替雷

鑒于原料藥是由谷氨酸、賴氨酸、丙氨酸和酪氨酸組成的肽段共聚混合物，美國FDA專門發布了針對此類藥物的指南。該指南明確指出，評估仿制藥時，在確保其組成及理化性質與參比制劑一致的基礎上，制備工藝、起始原料、過程控制及生物活性測試結果的綜合考量也必不可少。

4.3 鮭降鈣素

原料藥是從大馬哈魚體內提取的一種由32個氨基酸組成的肽，其分子結構中含有一個二硫鍵。美國藥典建議使用高效液相色譜法來控制合成來源的鮭降鈣素原料藥中的相關雜質，但并未具體規定需要檢測哪些特定的雜質。然而，美國FDA基于其審評經驗，開發了一種液質聯用方法，并應用此方法對市面上某款鮭降鈣素鼻腔噴霧劑進行了研究，結果發現該產品中的總雜質水平遠超出了藥典推薦方法所能檢測到的水平。

總結

總之，多肽仿制藥的研究應符合仿制藥研究的一般要求，同時要考慮其技術上的特殊性，仿制藥結構和物化特性與參比制劑的等同及對雜質的合理控制是獲得成功的關鍵。隨著多肽藥物研究技術的提高和相關法規的完善，多肽化學仿制藥的質量研究技術也將不斷進步，從而為患者提供更安全、有效的藥物。

參考資料：

[1] Zeng K, Geerlof-Vidavisky I, Gucinski A, Jiang X, Boyne MT 2nd. Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry for Peptide Drug Quality Control. AAPS J. 2015 May;17(3):643-51. doi: 10.1208/s12248-015-9730-z.

[2] Gucinski AC, Boyne MT 2nd, Keire DA. Modern analytics for naturally derived complex drug substances: NMR and MS tests for protamine sulfate from chum salmon. Anal Bioanal Chem. 2015 Jan;407(3):749-59. doi: 10.1007/s00216-014-8172-2.

[3] CDE官網，https://www.cde.org.cn/

[4] FDA官網，https://www.fda.gov/