本品為飲用水經(jīng)蒸餾法、離子交換法、反滲透法或其他適宜的方法制得的制藥用水備所得，不含任何添加劑。

【性狀】本品為無色的澄清液體；無臭。

【檢查】酸堿度  取本品10ml，加甲基紅指示液2滴，不得顯紅色；另取10ml，加溴麝香草酚藍指示液5滴，不得顯藍色。

硝酸鹽  取本品5ml置試管中，于冰浴中冷卻，加10%氯化鉀溶液0.4ml與0.1%二苯胺硫酸溶液0.1ml，搖勻，緩緩滴加硫酸5ml，搖勻，將試管于50℃水浴中放置15分鐘，溶液產(chǎn)生的藍色與標準硝酸鹽溶液［取硝酸鉀0.163g，加水溶解并稀釋至100ml，搖勻，精密量取1ml，加水稀釋成100ml，再精密量取10ml，加水稀釋成100ml，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于1μgNO₃）］0.3ml，加無硝酸鹽的水4.7ml，用同一方法處理后的顏色比較，不得更深（0.000 006%）。

亞硝酸鹽  取本品10ml，置納氏管中，加對氨基苯磺酰胺的稀鹽酸溶液（1→100）1ml與鹽酸萘乙二胺溶液（0.1→100）1ml，產(chǎn)生的粉紅色，與標準亞硝酸鹽溶液［取亞硝酸鈉0.750g（按干燥品計算），加水溶解，稀釋至100ml，搖勻，精密量取1ml，加水稀釋成100ml，搖勻，再精密量取1ml，加水稀釋成50ml，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于1μgNO₂）］0.2ml，加無亞硝酸鹽的水9.8ml，用同一方法處理后的顏色比較，不得更深（0.000 002%）。

氨  取本品50ml，加堿性碘化汞鉀試液2ml，放置15分鐘；如顯色，與氯化銨溶液（取氯化銨31.5mg，加無氨水適量使溶解并稀釋成1000ml）1.5ml，加無氨水48ml與堿性碘化汞鉀試液2ml制成的對照液比較，不得更深（0.000 03%）。

電導(dǎo)率  按制藥用水電導(dǎo)率測定法（通則0681）中純化水測定法測定，應(yīng)符合規(guī)定（通則0681）。

    如按制藥用水電導(dǎo)率測定法（通則0681）中注射用水測定法測定，電導(dǎo)率按判定法第一步判定符合規(guī)定，即為電導(dǎo)率符合規(guī)定，可不再進行酸堿度、重金屬、硝酸鹽、亞硝酸鹽和氨檢查。

    如按制藥用水電導(dǎo)率測定法（通則0681）中注射用水測定法測定，電導(dǎo)率按判定法第一步判定不符合規(guī)定，但按判定法第二步或第三步判定符合規(guī)定，即為電導(dǎo)率符合規(guī)定，可不再進行酸堿度和重金屬檢查。

總有機碳  不得過0.50mg/L（通則0682）。

易氧化物  取本品100ml，加稀硫酸10ml，煮沸后，加高錳酸鉀滴定液（0.02mol/L）0.10ml，再煮沸10分鐘，粉紅色不得完全消失。

　　以上總有機碳和易氧化物兩項可選做一項。

不揮發(fā)物  取本品100ml，置105℃恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重，遺留殘渣不得過1mg。

重金屬  取本品100ml，加水19ml，蒸發(fā)至20ml，放冷，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與水適量使成25ml，加硫代乙酰胺試液2ml，搖勻，放置2分鐘，與標準鉛溶液1.0ml加水19ml用同一方法處理后的顏色比較，不得更深（0.000 01%）。

微生物限度  采用下列方法，或經(jīng)充分驗證的等同或更優(yōu)方法，進行微生物監(jiān)測。

    純化水取本品不少于1ml，經(jīng)薄膜過濾法處理，采用R2A瓊脂培養(yǎng)基，30~35℃培養(yǎng)不少于5天，依法檢查（通則1105），1ml供試品中需氧菌總數(shù)不得過100cfu。可根據(jù)監(jiān)測數(shù)據(jù)適當(dāng)調(diào)整檢驗量，以能夠監(jiān)測到微生物數(shù)量變化。

    純化水微生物限度標準為不大于100cfu/ml，注射用水微生物限度標準為不大于10cfu/100ml。應(yīng)在滿足限度標準的前提下，設(shè)置適當(dāng)?shù)木湎薅群图m偏限度，以監(jiān)測不良趨勢。如用于高風(fēng)險制劑或無菌工藝，可根據(jù)需要設(shè)定更嚴格的警戒限度和糾偏限度。

    除葡萄糖、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH值使加熱滅菌后在25℃的pH值為7.2±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。

    R2A瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查試驗  照非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）中“計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查”的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查方法進行，試驗菌株為銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌。應(yīng)符合規(guī)定。

【類別】溶劑、和稀釋劑。

【貯藏】密閉保存。

    注：基于風(fēng)險評估，必要時，可按下述方法測定本品的不揮發(fā)物：取本品100ml，置105℃恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重，遺留殘渣不得過1mg。

1143  細菌內(nèi)毒素檢查法凝膠檢測技術(shù)（包括方法1和方法2）

凝膠檢測技術(shù)系通過鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理進行限度檢測或定量檢測內(nèi)毒素的方法。

1.預(yù)備試驗

為保證凝膠試驗的準確性和有效性，按以下步驟開展鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗和供試品的干擾試驗。

鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗  在本檢查法規(guī)定的條件下，使鱟試劑產(chǎn)生凝集的內(nèi)毒素的最低濃度即為鱟試劑的標示靈敏度，用EU/ml表示。當(dāng)使用新批號的鱟試劑或試驗條件發(fā)生了任何可能影響檢驗結(jié)果的改變時，應(yīng)進行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗。

根據(jù)鱟試劑靈敏度的標示值（λ），將細菌內(nèi)毒素國家標準品或細菌內(nèi)毒素工作標準品用細菌內(nèi)毒素檢查用水溶解，在旋渦混合器上混勻15分鐘或參照標準品說明書中要求的混勻時間進行操作，然后制成至少包含2λ、λ、0.5λ和0.25λ 4個濃度的內(nèi)毒素標準溶液，每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混勻30秒或參照標準品說明書中要求的混勻時間進行操作。取不同濃度的內(nèi)毒素標準溶液，分別與等體積（如0.1ml）的鱟試劑溶液混合，每一個內(nèi)毒素濃度平行做4管；另外取2管加入等體積的細菌內(nèi)毒素檢查用水作為陰性對照。將試管中溶液輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入37℃±1℃的恒溫器中，保溫60分鐘±2分鐘。

將試管從恒溫器中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180°，若管內(nèi)形成凝膠，并且凝膠不變形、不從管壁滑脫者為陽性；未形成凝膠或形成的凝膠不堅實、變形并從管壁滑脫者為陰性。保溫和拿取試管過程應(yīng)避免受到振動，造成假陰性結(jié)果。

當(dāng)最低濃度管均為陰性，陰性對照管為陰性，試驗方為有效。按下式計算反應(yīng)終點濃度的幾何平均值，即為鱟試劑靈敏度的測定值（λc）。

λc=antilg（ΣX/n）

式中  X為反應(yīng)終點濃度的對數(shù)值（Ig）。反應(yīng)終點濃度是指系列遞減的內(nèi)毒素濃度中最后一個呈陽性結(jié)果的濃度；n為每個濃度的平行管數(shù)。

當(dāng)λc在0.5λ~22（包括0.5λ和2λ）時，方可用于細菌內(nèi)毒素檢查，并以標示靈敏度λ為該批鱟試劑的靈敏度。

干擾試驗  按表1制備溶液A、B、C和D，使用的供試品溶液應(yīng)為未檢驗出內(nèi)毒素且不超過最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）的溶液，按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗項下操作，并計算溶液C和溶液B的反應(yīng)終點濃度的幾何平均值。

表1  凝膠檢測技術(shù)干擾試驗溶液的制備

注：A為供試品溶液；B為干擾試驗系列；C為鱟試劑標示靈敏度的對照系列；D為陰性對照。

只有當(dāng)溶液A和陰性對照溶液D的所有平行管都為陰性，并且系列溶液C的結(jié)果符合鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗要求時，試驗方為有效。當(dāng)系列溶液B的結(jié)果在0.5λ~2λ之間（包括0.5λ和2λ）時，認為供試品在該濃度下無干擾作用。其他情況則認為供試品在該濃度下存在干擾作用。若供試品溶液在小于MVD的稀釋倍數(shù)下對試驗有干擾，應(yīng)將供試品溶液進行不超過MVD的進一步稀釋，再重復(fù)干擾試驗。

可通過對供試品進行更大倍數(shù)的稀釋或通過其他適宜的方法（如過濾、中和、透析或加熱處理等）排除干擾。為確保所選擇的處理方法能有效地排除干擾且不會使內(nèi)毒素失去活性，要使用預(yù)先添加了標準內(nèi)毒素再經(jīng)過處理的供試品溶液進行干擾試驗。

當(dāng)進行新藥的內(nèi)毒素檢查試驗前，或無內(nèi)毒素檢查項的品種建立內(nèi)毒素檢查法時，須進行干擾試驗。

當(dāng)鱟試劑、供試品的處方、生產(chǎn)工藝改變或試驗環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗結(jié)果的變化時，須重新進行干擾試驗。

2.凝膠限度法（方法1）

步驟 按表2制備溶液A、B、C和D。使用稀釋倍數(shù)不超過MVD并且已經(jīng)排除干擾的供試品溶液來制備溶液A和B。按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗項下操作。

結(jié)果判斷 保溫60分鐘±2分鐘后觀察結(jié)果。若陰性對照溶液D的平行管均為陰性，供試品陽性對照溶液B的平行管均為陽性，陽性對照溶液C的平行管均為陽性，試驗有效。

表2  凝膠限度試驗溶液的制備

注：A為供試品溶液；B為供試品陽性對照；C為陽性對照；D為陰性對照。

若溶液A的兩個平行管均為陰性，判定供試品符合規(guī)定。若溶液A的兩個平行管均為陽性，判定供試品不符合規(guī)定。若溶液A的兩個平行管中的一管為陽性，另一管為陰性，需進行復(fù)試。復(fù)試時溶液A需做4支平行管，若所有平行管均為陰性，判定供試品符合規(guī)定，否則判定供試品不符合規(guī)定。

若供試品的稀釋倍數(shù)小于MVD而溶液A結(jié)果出現(xiàn)不符合規(guī)定時，可將供試品稀釋至MVD重新實驗，再對結(jié)果進行判斷。

3.凝膠定量法（方法2）

步驟  本方法系通過確定反應(yīng)終點濃度來量化供試品中內(nèi)毒素的含量。按表3制備溶液A、B、C和D。按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗項下操作。

表3  凝膠定量試驗溶液的制備

注：A為不超過MVD并且通過干擾試驗的供試品溶液。從通過干擾試驗的稀釋倍數(shù)開始用檢查用水稀釋如1倍、2倍、4倍和8倍，最后的稀釋倍數(shù)不得超過MVD。

B為含2λ濃度標準內(nèi)毒素的溶液A（供試品陽性對照）。

C為鱟試劑標示靈敏度的對照系列。

D為陰性對照。

計算及結(jié)果判斷 若陰性對照溶液D的平行管均為陰性，供試品陽性對照溶液B的平行管均為陽性，系列溶液C的反應(yīng)終點濃度的幾何平均值在0.5λ~2λ，試驗有效。

系列溶液A中每一系列平行管的終點稀釋倍數(shù)乘以λ，為每個系列的反應(yīng)終點濃度。如果檢驗的是經(jīng)稀釋的供試品，則將終點濃度乘以供試品進行定量試驗的初始稀釋倍數(shù)，即得到每一系列內(nèi)毒素濃度c。

若每一系列內(nèi)毒素濃度均小于規(guī)定的限值，判定供試品符合規(guī)定。每一系列內(nèi)毒素濃度的幾何平均值即為供試品溶液的內(nèi)毒素濃度[按公式CE=antilg（Σlgc/2）]。若試驗中供試品溶液的所有平行管均為陰性，應(yīng)記為內(nèi)毒素濃度小于λ（如果檢驗的是稀釋過的供試品，則記為小于λ乘以供試品進行定量試驗的初始稀釋倍數(shù)）。

若任何系列內(nèi)毒素濃度不小于規(guī)定的限值時，則判定供試品不符合規(guī)定。當(dāng)供試品溶液的所有平行管均為陽性，可記為內(nèi)毒素的濃度大于或等于最大的稀釋倍數(shù)乘以λ。