1.概述

 

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局食品藥品審核查驗(yàn)中心（CFDI）于2025.1.17發(fā)布《清潔驗(yàn)證技術(shù)指南》，該指南詳細(xì)描述了清潔驗(yàn)證執(zhí)行過(guò)程中的各項(xiàng)要求，以指導(dǎo)和規(guī)范藥品上市許可持有人、藥品生產(chǎn)企業(yè)（包括原料藥登記人）等對(duì)藥品生產(chǎn)設(shè)備及部件的清潔驗(yàn)證進(jìn)行科學(xué)管理，確保患者用藥安全。確定設(shè)備清潔后殘留物是否達(dá)到規(guī)定的限度要求，離不開建立準(zhǔn)確可靠的殘留物分析方法對(duì)殘留物進(jìn)行檢驗(yàn)。筆者已在《清潔驗(yàn)證后殘留物分析方法開發(fā)與驗(yàn)證要點(diǎn)》一文中詳細(xì)論述了如何進(jìn)行殘留物分析方法開發(fā)與驗(yàn)證，而確定殘留物限度是建立分析方法的前提和必要依據(jù)，也是清潔驗(yàn)證的一項(xiàng)重點(diǎn)，本文筆者將全面介紹清潔驗(yàn)證后殘留物限度計(jì)算方式，以便為廣大研究者提供參考。

 

2.殘留物限度計(jì)算方式

 

殘留物限度關(guān)系到清潔驗(yàn)證的科學(xué)性和合理性，以及清潔方法的有效性。因此各個(gè)企業(yè)應(yīng)當(dāng)根據(jù)其生產(chǎn)設(shè)備和產(chǎn)品的實(shí)際情況，制定科學(xué)合理、能夠?qū)崿F(xiàn)且能通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒z驗(yàn)的限度標(biāo)準(zhǔn)。普遍接受的可接受標(biāo)準(zhǔn)限度計(jì)算方式有以下幾種。

 

2.1 以目視檢查為依據(jù)的限度

 

目視檢查是清潔驗(yàn)證限度的首要可接受標(biāo)準(zhǔn)，但通常不能作為單一可接受標(biāo)準(zhǔn)使用。目視檢查方法是確認(rèn)殘留去除的直觀方法，觀察時(shí)應(yīng)考慮目視檢查表面位置與特性、環(huán)境照度、觀測(cè)的距離、觀測(cè)角度以及觀測(cè)人員的視力等情況，確保目視檢查效果。同時(shí)，建議考慮使用內(nèi)窺鏡、相機(jī)或攝像頭等技術(shù)手段增加目視檢查的可靠程度。需要目視檢查的表面應(yīng)為干燥表面，如無(wú)法干燥，應(yīng)說(shuō)明理由。目視檢查標(biāo)準(zhǔn)為無(wú)可見殘留物。顯然目視檢查無(wú)法對(duì)可溶性殘留物是否達(dá)到清潔要求進(jìn)行判定，通常作為輔助的可接受標(biāo)準(zhǔn)。

 

2.2 基于殘留物濃度傳統(tǒng)默認(rèn)值

 

標(biāo)準(zhǔn)：一般殘留物濃度限度為十萬(wàn)分之一（10ppm）。

 

計(jì)算方法：通用限度為10ppm時(shí)

 

式中：

 

MACO：最大允許殘留總量，單位mg或者ml;

 

MBS：下一產(chǎn)品的最小批量，單位mg或者ml。

 

計(jì)算出MACO值后，進(jìn)一步計(jì)算擦拭樣品或淋洗樣品中的殘留限度：

 

擦拭樣品殘留限度（L）計(jì)算：

 

淋洗樣品殘留限度（L）計(jì)算：

對(duì)于中藥前處理、原料藥粗品制備、生物制品上游發(fā)酵等工序限度可適當(dāng)放寬至50ppm或100ppm，或者基于風(fēng)險(xiǎn)確認(rèn)合理的限度范圍。

 

2.3 基于藥物活性成分治療劑量

 

標(biāo)準(zhǔn)：藥物殘留限度為上批產(chǎn)品活性成分的最低日治療劑量的1/1000。

 

計(jì)算方法：

 

式中：

 

MACO：最大允許殘留總量，單位mg或者ml；

 

MDD：上一產(chǎn)品活性成分最低日治療劑量，單位mg/天或者ml/天;

 

MBS：下一產(chǎn)品的最小批量，單位mg或者ml；

 

SF：安全系數(shù)，SF 通常設(shè)置為1000；

 

LDD：下一產(chǎn)品每日最大使用劑量（注：劑量包含處方中的所有量而不僅僅是活性成分，單位和批量保持一致），單位mg/天或者ml/天。

 

計(jì)算出MACO值后，可分別通過(guò)公式（2）和（3）進(jìn)一步計(jì)算出擦拭樣品和淋洗樣品中的殘留限度。但是，此計(jì)算方法應(yīng)當(dāng)在同等用藥周期基礎(chǔ)上進(jìn)行兩個(gè)產(chǎn)品的比較，殘留限度通常設(shè)為最低日治療劑量的1/1000，對(duì)于一些風(fēng)險(xiǎn)較高的化學(xué)物質(zhì)也可選擇更加安全的系數(shù)，如最低日治療劑量的1/10000。

 

2.4 基于健康的暴露限度（HBEL）

 

基于健康的暴露限度（HBEL）可接受標(biāo)準(zhǔn)通常為每日允許暴露量（PDE）或每日可接受暴露量（ADE），使用單位mg/天。PDE/ADE 值是由有資質(zhì)的毒理學(xué)家等按照體重和不同調(diào)整因子估算，由大多數(shù)相關(guān)動(dòng)物研究中的無(wú)可見作用水平（NOEL）、無(wú)可見有害作用水平（NOAEL）或觀察到作用的最低水平（LOEL）、觀察到有害作用的最低水平（LOAEL）等得出。

 

 

式中：

 

PoD：起始點(diǎn)，推薦首選NOEL，如果沒有NOEL，可用NOAEL、LOEL、LOAEL 等；

 

體重調(diào)整系數(shù)：假設(shè)任意男女成人體重為50kg，以提供額外的安全系數(shù)；

 

F1-F5：調(diào)整因子，以計(jì)入不確定度；

 

UFc：組分不確定因子，反映單個(gè)變量之間、不同品種差異、亞急性折算為急性外推、LOEL 折算為NOEL 外推、數(shù)據(jù)完整性等補(bǔ)償因素的綜合系數(shù)；

 

MF：修正因子，用于表達(dá)未被其它因子覆蓋的不確定因素；

 

PK：藥動(dòng)學(xué)調(diào)整。

 

NOEL的數(shù)值可通過(guò)下式計(jì)算得到：                  

 

式中：

 

LD50：被清潔物質(zhì)的半致死量，可通過(guò)查詢PubChem網(wǎng)站得到數(shù)值，單位為mg/kg;

 

2000：經(jīng)驗(yàn)常數(shù)。

 

計(jì)算出PDE/ADE 值后，進(jìn)一步計(jì)算殘留限度：

 

式中：

 

MACO：最大允許殘留總量，單位為mg;

 

MBS：下一產(chǎn)品的最小批量，單位為mg或者ml；

 

LDD：下一產(chǎn)品每日最大使用劑量，單位mg/天或者ml/天。

 

計(jì)算出MACO 值后，可分別通過(guò)公式（2）和（3）進(jìn)一步計(jì)算擦拭樣品和淋洗樣品中的殘留限度。

 

基于健康的暴露限度（HBEL）相較于傳統(tǒng)方法（如1/1000最低日治療劑量、10ppm等）設(shè)定的限度，其可接受標(biāo)準(zhǔn)在評(píng)估清潔殘留數(shù)據(jù)時(shí)在科學(xué)性方面更具優(yōu)勢(shì)，但因其數(shù)據(jù)來(lái)源不同、計(jì)算因子賦值不夠明確等原因，又有一定的不確切性。一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)基于毒理學(xué)計(jì)算的殘留限度值低于傳統(tǒng)限值時(shí)，應(yīng)采用基于毒理學(xué)計(jì)算的殘留限度值；當(dāng)毒理學(xué)計(jì)算的殘留限度值高于傳統(tǒng)限值時(shí)，可選擇繼續(xù)采用傳統(tǒng)限值，也可經(jīng)足夠科學(xué)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估后，采取毒理學(xué)計(jì)算的殘留限度值，企業(yè)可結(jié)合歷史數(shù)據(jù)將傳統(tǒng)限值設(shè)為警戒限。

 

2.5 專用設(shè)備（組件）限度的計(jì)算

 

專用設(shè)備組（組件）交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)很低，但需考慮到降解產(chǎn)物、清潔劑和生物負(fù)載（如適用）等其他殘留的影響。相對(duì)于共用設(shè)備，活性成分在專用設(shè)備中的殘留限度可適當(dāng)放寬，通常可基于風(fēng)險(xiǎn)設(shè)定一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，如限度設(shè)為前一批次產(chǎn)品在下一批次產(chǎn)品中殘留量不超過(guò)1/1000；如果設(shè)備組中有一部分專用于一個(gè)產(chǎn)品，那么在計(jì)算活性成分殘留限度時(shí)，應(yīng)當(dāng)分別考慮專用和共用表面積。專用設(shè)備（組件）清潔劑殘留限度的計(jì)算可參考共用設(shè)備清潔劑的殘留限度的計(jì)算方法。專用設(shè)備組（組件）殘留物限度的計(jì)算可參考2.2-2.4章節(jié)介紹的三種方法進(jìn)行。

 

2.6 中藥制劑限度的計(jì)算

 

基于中藥產(chǎn)品成分復(fù)雜、單一指標(biāo)成分低等的特殊性，應(yīng)當(dāng)評(píng)估確定指標(biāo)成分作為殘留標(biāo)記物或選擇非專屬性方法，相互結(jié)合進(jìn)行驗(yàn)證。

 

對(duì)于處方中含有某些毒性較大飲片的產(chǎn)品，其毒性成分殘留應(yīng)當(dāng)基于現(xiàn)代科學(xué)，選擇合適的殘留標(biāo)記物，并充分考慮安全性，確定其殘留限度。

 

對(duì)于處方中含有礦物類或其他含重金屬中藥材的產(chǎn)品，需科學(xué)評(píng)估對(duì)后續(xù)產(chǎn)品影響，如檢測(cè)以毒理學(xué)數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，結(jié)合殘留物的暴露情況和臨床用藥劑量，確定重金屬及有害元素殘留限度。

 

需要注意的是，含有某些毒性較大飲片的產(chǎn)品如不能使用專用設(shè)備，其毒性成分殘留與組內(nèi)清潔最差產(chǎn)品殘留均需考慮。

 

中藥制劑限度的計(jì)算同樣可參考2.2-2.4章節(jié)介紹的三種方法進(jìn)行。

 

2.7 生物制品限度的計(jì)算

 

生物制品的清潔過(guò)程通常是將產(chǎn)品接觸的設(shè)備表面暴露于極端pH和/或加熱條件下，此時(shí)活性成分會(huì)發(fā)生降解和變性，并可能變得無(wú)藥理活性，因此基于毒理學(xué)的評(píng)估來(lái)設(shè)定產(chǎn)品殘留限度可能不再適用。活性成分的降解和失活情況可以在實(shí)驗(yàn)研究中證實(shí)，如果研究數(shù)據(jù)表明活性成分未完全降解或失活，仍需要使用基于健康的暴露限度（HBEL）來(lái)計(jì)算活性成分的殘留限度。

 

對(duì)于抗體偶聯(lián)藥物（ADC）等產(chǎn)品，除關(guān)注生物活性成分的殘留，還要考慮所偶聯(lián)的小分子等其他藥物的殘留，其限度計(jì)算方式可參照化學(xué)藥品所用的方法，即2.2-2.4章節(jié)介紹的三種方法。

 

2.8 微生物和細(xì)菌內(nèi)毒素限度

 

微生物和細(xì)菌內(nèi)毒素限度的確定與活性成分、清潔劑等殘留物有較大差異：對(duì)于非無(wú)菌生產(chǎn)，可將下一個(gè)產(chǎn)品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)作為可接受水平。基于微生物的其他來(lái)源（如來(lái)自下一產(chǎn)品的原料）、下一產(chǎn)品特性對(duì)微生物的影響、清潔效期內(nèi)影響微生物增殖的其他因素等，通常采用安全因子對(duì)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行調(diào)整，以使微生物可接受殘留水平更為嚴(yán)謹(jǐn)。一般的微生物限度，如擦拭取樣法采用1-2cfu/cm2，通常取樣面積25cm2，其淋洗取樣法采用純化水限度100cfu/ml。值得注意的是，當(dāng)下一產(chǎn)品的微生物限度較嚴(yán)時(shí)，應(yīng)當(dāng)使用下一產(chǎn)品的微生物限度進(jìn)行控制，或者經(jīng)評(píng)估不低于取樣環(huán)境級(jí)別微生物的要求；采用注射用水淋洗取樣時(shí)一般限度設(shè)定為10cfu/100ml，也可采用其他經(jīng)評(píng)估的限度值或者采用活性物質(zhì)殘留計(jì)算方法確定微生物限度。

 

對(duì)于有細(xì)菌內(nèi)毒素限度要求的產(chǎn)品，通常檢測(cè)最終淋洗水，其限度可采用注射用水標(biāo)準(zhǔn)（0.25EU/mL）。對(duì)于使用革蘭氏陰性細(xì)菌（如大腸桿菌）發(fā)酵的生物制品，在發(fā)酵和收獲步驟可不進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素限度設(shè)置，或者設(shè)置更高的細(xì)菌內(nèi)毒素限度，如5-25EU/mL。

 

3.結(jié)語(yǔ)

 

本文筆者以《清潔驗(yàn)證技術(shù)指南》為基礎(chǔ)，總結(jié)了八種清潔驗(yàn)證后殘留物限度計(jì)算方式，其中主要方式為2.2-2.4章節(jié)介紹的3種—基于傳統(tǒng)默認(rèn)值、基于活性成分治療劑量和基于健康的暴露限度，基于傳統(tǒng)默認(rèn)值和基于健康暴露限度這兩種方式普適性較強(qiáng)，幾乎適用于所有類型殘留物，包括活性成分、清潔劑、輔料、中間體，基于活性成分治療劑量?jī)H適用于活性成分殘留物限度計(jì)算。以上三種計(jì)算方式可以聯(lián)合使用，如果3種方式的計(jì)算結(jié)果不同，則應(yīng)該取3種方式計(jì)算中的最小值作為殘留量的標(biāo)準(zhǔn)；目視檢查法確定的限度通常只作為輔助可接受標(biāo)準(zhǔn)，不作為唯一標(biāo)準(zhǔn)；專用設(shè)備（組件）、中藥制劑和生物制品的限度確定各自有其特殊之處，但是計(jì)算方式仍以2.2-2.4章節(jié)介紹的3種為基礎(chǔ)；微生物和細(xì)菌內(nèi)毒素限度可直接引用已有的數(shù)值進(jìn)行確定。