1.壓力

 

柱壓-儀器

 

常見現象

 

壓力升高、降低或不穩定

 

原因分析

 

①儀器管路堵塞；

 

②泄漏、流動相抽空、溶劑管道濾芯堵塞；

 

③系統中有氣泡；

 

應對方法

 

①從泵到檢測器做一個系統性的檢查以確定堵塞發生的部位；

 

②檢查各接口處，檢查流動相，超聲清洗或更換溶劑管道濾芯；

 

③流動相使用前超聲，排氣。

 

柱壓-色譜柱

 

常見現象

 

柱頭塌陷，反壓上升，柱效下降。

 

原因分析

 

①流速過大，會引起高柱壓或柱壓升高過快，特別是當使用粘度高的溶劑（如IPA, EtOH）；

 

②流動相或樣品溶液過濾不徹底，固體顆粒堵塞管路或柱頭，會引起柱壓過高；

 

③樣品中成分在柱頭析出或強烈吸附，會引起柱壓升高。

 

應對方法

 

①如柱子之前使用了黏度大的溶劑而引起柱壓升高，建議使用小流速先置換之前的溶劑，待柱壓下降并穩定后再進樣檢測；

 

②因柱壓問題引起的柱頭塌陷，無法恢復柱子性能，出現異常后可嘗試反接色譜柱進行實驗；

 

③每種柱子有特定的承壓范圍，請仔細參照相應的《色譜柱說明書》；

 

④更換流動相時，或者把柱子剛接上儀器的時候，逐步增加流速；

 

⑤徹底過濾流動相及樣品溶液；

 

⑥樣品預處理；

 

⑦儀器設定保護柱壓。

 

2.基線

 

常見現象

 

基線漂移、基線噪音大。

 

原因分析

 

①柱溫變化；

 

②流動相混合不均勻；

 

③流通池污染或有氣泡；

 

④色譜柱平衡慢，尤其是流動相組成發生較大的改變；

 

⑤漏液；

 

⑥色譜柱污染。

 

應對方法

 

①控制實驗室溫度及柱溫箱溫度；

 

②使用HPLC溶劑， 高純度的鹽和添加劑，流動相在使用前進行脫氣；一天以上未使用流動相，用前輕輕晃動瓶子使流動相均勻；

 

③清洗流通池，流動相在使用前脫氣；

 

④先用中等強度的溶劑沖洗柱子；

 

⑤注意壓力， 排查漏液的地方并加以排除；

 

⑥定期對柱子用強洗脫溶劑（在柱子使用范圍內）進行沖洗。

 

3. 峰形

 

常見現象：峰前沿、拖尾、肩峰等。

 

問題一：峰前沿

 

原因分析

 

①柱溫引起的峰前沿；

 

②樣品溶劑與流動相不兼容；

 

③色譜柱前端過濾篩板堵塞；

 

④柱效降低；

 

⑤柱頭塌陷。

 

應對方法

 

①提高溫度有時能消除前沿；

 

②增加流動相極性或樣品用流動相溶解；

 

③更換篩板。如前延峰很快再次出現，注意檢查顆粒物來源（樣品，流動相，泵，進樣閥）

 

④沖洗色譜柱或更換色譜柱，推薦使用保護柱；

 

⑤更換色譜柱。

 

問題二：峰拖尾

 

原因分析

 

①樣品超載；

 

②雜質峰干擾；

 

③硅羥基作用；

 

④洗脫強度不夠；

 

⑤死體積或柱外體積過大；

 

⑥柱效降低；

 

⑦柱頭塌陷。

 

應對方法

 

①減小進樣量或稀釋樣品濃度；

 

②純化樣品或調節流動相比例，使雜質不干擾主峰；

 

③硅羥基作用；

 

④在柱子可使用的溶劑范國內增加洗脫強度；

 

⑤連接點空隙降低，盡量選用細管線；

 

⑥沖洗色譜柱或更換色譜柱，推薦使用保護柱；

 

⑦更換色譜柱。

 

問題三：肩峰

 

原因分析

 

①色譜柱或保護柱入口端污染；

 

②樣品溶劑與流動相不兼容；

 

③干擾峰；

 

④色譜柱損壞。

 

應對方法

 

①使用強溶劑清洗色譜柱或更換色譜柱，必要時可以反沖，更換保護柱；

 

②用流動相稀釋樣品；

 

③可能是樣品中純在的物質與目標物未分離，需要調節方法（調節流動相或更換色譜柱）改變選擇性，可能是系統中引入的污染物，通過空白溶液進行排查；

 

④更換色譜柱。

 

4.誤進溶劑

 

常見現象

 

柱壓劇增，分離突然變差。

 

原因分析

 

①涂敷型產品（Y1-Y5）若導入錯誤的溶劑(如二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、甲苯等)，柱子會馬上被破壞；

 

②正相手性柱的保存溶液和常用流動相多數含有大比例的正己烷，而正己烷和甲醇、乙腈、水互溶性很差，如沒有經過合適的溶劑置換，誤進和柱子中原有的溶劑不互溶的溶劑，柱壓也可能被破壞。

 

應對方法

 

①一旦錯誤地使用了溶劑，重新恢復柱子性能的可能性很低；

 

②立即停泵，取下柱子，先用合適的溶劑（如乙醇）置換儀器之前的溶劑，再接上柱子低流速沖洗（至少20倍柱體積）置換柱子中誤進的溶劑。

 

5.殘留效應

 

常見現象

 

方法重現性差。

 

原因分析

 

①殘留物在普通流動相中可長時間地穩定保留，“老化”柱子；

 

②實驗后柱清洗沒做好。

 

應對方法

 

①問題出現后可嘗試進行沖洗后再使用；

 

②用“舊柱”開發的方法，必須在新柱上進行確認。