1.概述

對照品是藥品質(zhì)量控制體系的重要組成部分，對其使用貫穿于整個藥品生命周期。在藥品注冊時，申請人需要提供藥品開發(fā)中使用的對照品信息，對照品研究不充分或者信息不完整可能會導(dǎo)致藥品注冊延遲或失敗。對照品的使用過程中，對其準(zhǔn)確賦值是最重要的一環(huán)，也是藥品定性、定量測試的基礎(chǔ)，因?yàn)橹挥卸ㄖ禍?zhǔn)確的對照品，才能保證對藥品含量測定和雜質(zhì)定量的準(zhǔn)確性，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對藥品質(zhì)量的準(zhǔn)確可靠地控制。而準(zhǔn)確賦值離不開采用合理合規(guī)的方法進(jìn)行標(biāo)定。本文綜合了國內(nèi)外相關(guān)的法規(guī)指南，對關(guān)于化學(xué)藥品對照品標(biāo)定要求的異同進(jìn)行了總結(jié)，以便為廣大研究者提供參考。

2.異同和延伸

2.1 異同點(diǎn)

表1從相關(guān)法規(guī)和指南、標(biāo)定方法、計算公式（標(biāo)定項(xiàng)目）等方面總結(jié)了中國、美國、歐洲和WHO四大監(jiān)管機(jī)構(gòu)在對照品標(biāo)定方面的異同。

▲表1-國內(nèi)外在對照品標(biāo)定方面的異同

從上表可以清晰地得出一個共同點(diǎn)，即中、美、歐、WHO均提出采取經(jīng)典的標(biāo)定方法—質(zhì)量平衡法為對照品進(jìn)行定值。質(zhì)量平衡法的原理為一個化學(xué)對照品的主成分、水分、有機(jī)溶劑、無機(jī)雜質(zhì)和有機(jī)雜質(zhì)含量的總和應(yīng)為100%，其中，無機(jī)雜質(zhì)通常指熾灼殘渣，有機(jī)溶劑通常指殘留溶劑。質(zhì)量平衡法也是國內(nèi)外最常用的對照品標(biāo)定方法。雖然國內(nèi)外均提倡采用質(zhì)量平衡法，但是在對照品含量的計算方式上有所差異：《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制技術(shù)》提出的公式（1）與USP<11>提出的幾乎相同，EP 5.12.對照品章節(jié)未提及計算公式，但是EDQM在2021年培訓(xùn)教材（即表1中歐洲項(xiàng)下的法規(guī)指南（1））中提出的公式與中美基本相同。然而WHO在TRS，No.943 Annex中提出的計算公式則與中美歐的有所差異（雖然與《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制技術(shù)》提出的公式（2）基本相同，但是國內(nèi)大多采用公式（1）進(jìn)行標(biāo)定，故在此以公式（1）為主進(jìn)行論述），這樣的差異往往為廣大研究者在計算方式的選擇上帶來困擾。這種差異來源于有機(jī)雜質(zhì)的定量方式，有研究者曾將兩種計算方式做過對比，得出了各自的適用性：對照品含量計算方法應(yīng)與有機(jī)雜質(zhì)計算方法相對應(yīng)，如有機(jī)雜質(zhì)的計算方法為峰面積歸一化法，則對照品含量計算方法按照中美歐的要求；如有機(jī)雜質(zhì)的計算方法為雜質(zhì)外標(biāo)法或主成分外標(biāo)法，則對照品含量計算方法按照WHO的要求。綜上所述，選擇何種計算方式取決于有機(jī)雜質(zhì)的定量方式，由此為廣大研究者解開了疑惑。

2.2 其他標(biāo)定方法

除了常用的質(zhì)量平衡法這種標(biāo)定方法，有研究者也采用其他的標(biāo)定方法對對照品含量進(jìn)行標(biāo)定，如容量分析法、定量核磁共振法等，這些標(biāo)定方法可與質(zhì)量平衡法形成互補(bǔ)，以相互驗(yàn)證準(zhǔn)確性。容量分析法屬于高準(zhǔn)確度的絕對含量測定方法，這種方法的系統(tǒng)誤差是可估計的，相對隨機(jī)誤差水平是可以忽略不計的。測量時，要求有2個或2個以上分析者獨(dú)立進(jìn)行操作，并盡可能使用不同的試驗(yàn)裝置，有條件的需進(jìn)行量值比對[1]。對于組分單一、純度較高的對照品定值可以考慮等當(dāng)量換算、精密度高、操作簡便、測試快速的容量分析法，并與質(zhì)量平衡法比對驗(yàn)證。

定量核磁共振法具有樣品用量少、測試快速、精密度高、分辨力高等優(yōu)點(diǎn)，近年來在對照品的標(biāo)定方面得到越來越多的應(yīng)用，如在比阿培南標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制中，研究者分別采用質(zhì)量平衡法和定量核磁共振法標(biāo)定比阿培南標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的含量，并通過對比阿培南雜質(zhì)的分析，對質(zhì)量平衡法的準(zhǔn)確性進(jìn)行了評價[2]。

用2 種或2 種以上不同原理的準(zhǔn)確可靠方法（如滴定法、DSC法、NMR法、IR法、UV法等）進(jìn)行對照品標(biāo)定，可為對照品定值提供更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)支撐[3]。標(biāo)定時，原則上應(yīng)對每種定值方法進(jìn)行系統(tǒng)的方法驗(yàn)證，研究不同原理的測量方法的精密度，對方法的系統(tǒng)誤差進(jìn)行估計。在進(jìn)行2個不同原理標(biāo)定方法的結(jié)果合并計算時，如果2個標(biāo)定結(jié)果差異較大，其中至少1個結(jié)果是不準(zhǔn)確的，此時2個結(jié)果不能合并計算; 如果2個標(biāo)定結(jié)果的平均值落在標(biāo)定方法不確定度的交集部分，則可以合并計算，2個標(biāo)定結(jié)果均值是真值的最優(yōu)估計值[1]。

另外，如可獲得法定對照品，即各國監(jiān)管機(jī)構(gòu)認(rèn)可的對照品，如來源于中檢院、USP、EP的對照品，2010年版GMP第227 條規(guī)定“每批工作標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌窇?yīng)當(dāng)用法定標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌愤M(jìn)行標(biāo)化”[4]。具體實(shí)施方法以法定對照品為基準(zhǔn)，采用外標(biāo)法對自制的工作對照品直接進(jìn)行標(biāo)定、賦值，得到的結(jié)果即為對照品絕對含量值。此種方法可有效節(jié)省標(biāo)定時對照品的用量和提高標(biāo)定效率，也可作為質(zhì)量平衡法的良好補(bǔ)充，尤其對于價格昂貴、不易獲得、制備成本高和規(guī)格小的雜質(zhì)對照品非常適用。

2.3 協(xié)作標(biāo)定

多個實(shí)驗(yàn)室對同一對照品進(jìn)行協(xié)作標(biāo)定同樣是提高對照品定值準(zhǔn)確性的一種有效的方式，尤其是申報國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或其他法定對照品，協(xié)作標(biāo)定乃是必經(jīng)之路。按照《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)協(xié)作標(biāo)定實(shí)施細(xì)則》和中國藥典四部通則0291的要求，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)定須經(jīng)3家以上國家藥品監(jiān)督管理部門認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室協(xié)作完成。參加標(biāo)定單位應(yīng)采用統(tǒng)一的設(shè)計方案、統(tǒng)一的經(jīng)過驗(yàn)證的分析方法和統(tǒng)一的記錄格式，標(biāo)定結(jié)果應(yīng)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理（需要至少5次獨(dú)立的有效結(jié)果）。國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)定結(jié)果一般采用各參加單位標(biāo)定結(jié)果的均值表示。

3.結(jié)語

本文筆者總結(jié)了國內(nèi)外在化學(xué)藥品對照品標(biāo)定要求方面的異同，并針對對照品含量計算公式的不同，在如何選擇方面提出了一點(diǎn)拙見，此外在經(jīng)典的標(biāo)定方法—質(zhì)量平衡法基礎(chǔ)上，延伸出了其他的三種標(biāo)定方法—容量分析法、定量核磁共振法、法定對照品外標(biāo)法，作為補(bǔ)充，為廣大研究者選擇對照品標(biāo)定方法提供更多參考，最后簡述了協(xié)作標(biāo)定這種提高對照品定值準(zhǔn)確性的實(shí)施方式。以上分享內(nèi)容旨在為廣大同行在進(jìn)行對照品標(biāo)定時解惑，僅作為個人見解，若有其他對照品標(biāo)定方法和實(shí)施建議，或針對本文的不足，還望廣大讀者補(bǔ)充、分享！

【參考文獻(xiàn)】

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[2] 馮艷春，劉書妤，胡昌勤. 比阿培南標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制[J]. 中國抗生素雜志，2010, 35(9): 679-683.

[3] 李翔，胡士高. 淺析化學(xué)藥品研發(fā)中對照品的有關(guān)技術(shù)要求[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,，2013(4): 420-423.

[4]馮艷春，裴文莉，寧保明，等. 化學(xué)藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制與使用[J]. 中國藥科大學(xué)學(xué)報， 55(5): 715-720.