背景

裸鼠皮下成瘤實驗用于研究腫瘤的形成、發(fā)展以及針對腫瘤的治療方法。裸鼠是一種缺乏免疫系統(tǒng)的小鼠品種，因此能夠更容易地接受移植的異種組織，比如人類腫瘤細(xì)胞。在這種實驗中，通常會將人類腫瘤細(xì)胞注射到裸鼠的皮下組織中，形成腫瘤。然后觀察腫瘤的生長情況、病理學(xué)特征以及對治療方法的反應(yīng)。

此實驗通常用于評估潛在的抗腫瘤藥物、免疫治療方法或其他治療策略的有效性。通過在裸鼠模型中進行實驗，可以更好地理解腫瘤的生物學(xué)特性，并為臨床治療提供重要的參考依據(jù)。

實驗步驟

1、準(zhǔn)備工作：準(zhǔn)備對數(shù)期生長的、細(xì)胞密度達(dá)80-90%左右的腫瘤細(xì)胞。

2、細(xì)胞收集：棄掉舊培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞1-2次（去除細(xì)胞中的血清），使用胰酶消化細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液，離心，去上清，接著用PBS或者無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并進行細(xì)胞計數(shù)，計算所需的終濃度。通常皮下瘤接種時，使用的細(xì)胞量為每支1-5×106個細(xì)胞，接種體積為0.1毫升，因此細(xì)胞懸液的濃度約為1-5×107個細(xì)胞/ml。

3、裸鼠接種：用左手固定裸鼠后，在其左側(cè)腋窩處進行皮下注射。注射時，將針頭深入皮下約1厘米，注射體積為100微升在接種過程中，應(yīng)將細(xì)胞懸液放置在冰上，以減緩細(xì)胞凋亡。

4、接種后處理：接種完成后將裸鼠放回其籠中繼續(xù)進行飼養(yǎng)，大約1周后可以觀察到腫瘤的形成。根據(jù)實驗設(shè)計，在腫瘤體積未超過1000mm³之前，需要對裸鼠進行安樂死，并取出腫瘤進行后續(xù)處理，如取瘤子拍照或活體成像。

如圖為裸鼠成瘤實驗結(jié)果示例（對照組與處理組）：

注意事項

1、細(xì)胞在指數(shù)生長階段收集非常重要，因為細(xì)胞狀態(tài)對細(xì)胞系移植后的活力有著極大的影響。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞系在異種移植形成的腫瘤活力較差，可以考慮使用Matrigel作為注射混合物，為植入提供豐富的基質(zhì)環(huán)境。

2、在接種時，針頭應(yīng)深入皮下約1厘米，以減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出的可能性。注射時，針頭應(yīng)向前方穿行，且在注射前輕微移動針頭，以確保針頭處于皮下。如果針頭能夠移動，則表明它在皮下位置，否則可能在皮內(nèi)或肌肉內(nèi)。

3、注射前，一定要排去針管內(nèi)的空氣。

4、每天監(jiān)測裸鼠的存活和腫瘤生長是非常重要的，通常需要測量腫瘤的最大（L）和最小（W）長度。一般來說，大約一周左右就可以觀察到米粒大小的腫瘤。

5、細(xì)胞消化后應(yīng)立即移植到裸鼠皮下，最好在30分鐘內(nèi)完成。在過程中，將細(xì)胞懸液置于冰上以減緩細(xì)胞代謝。

6、在接種前，使用槍將細(xì)胞懸液充分吹散，以確保細(xì)胞均勻分散，防止細(xì)胞聚集并降低其存活率。

7、要注意倫理問題，為避免腫瘤過度生長，一般不建議超過1000 mm3。

8、取下瘤子后，將一部分凍存于液氮中，以備將來提取蛋白質(zhì)和RNA使用；另一部分則用福爾馬林固定，用于免疫組化、免疫熒光等實驗。