一、實驗原理

蘇木精-伊紅染色法（Hematoxylin-Eosin staining）簡稱為HE染色，是組織學和組織病理學中常見的化學染色方法之一，在識別不同類型的組織及其形態變化中具有重要意義。蘇木精為天然堿性染料，能與細胞核內的核酸等酸性物質以離子鍵或氫鍵的形式結合從而將細胞核染成藍色，伊紅則為化學合成的一種酸性染料，其能在水中解離為帶負電荷的陰離子，從而與細胞質中帶正電荷的蛋白質等物質結合從而將胞質染成紅色。藍色的細胞核與紅色的細胞質形成了鮮明的對比，從而便于觀察。

二、實驗步驟

1)樣品準備

提前準備好待染色的石蠟切片或冰凍切片（注意：兩者的染色步驟基本一致，但冰凍切片省略了脫蠟這一步，且染色時間也較石蠟切片短，以下僅以石蠟切片HE染色作一介紹）。

2)脫蠟

二甲苯Ⅰ，10 min→二甲苯Ⅱ，10 min。

3)復水

100%乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇中各5 min→蒸餾水Ⅰ，2 min→蒸餾水Ⅱ，2 min。

4)蘇木精染細胞核

蘇木精，3 min，而后用蒸餾水洗去浮色。

5)分化

1%的鹽酸酒精分化液中分化30s→自來水Ⅰ，3 min→自來水Ⅱ，3min。

6)伊紅染細胞質

伊紅染液，2 min，而后用蒸餾水洗去浮色。

7)脫水

75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、100%乙醇中各1 min。

8)透明

二甲苯Ⅰ，1 min→二甲苯Ⅱ，1 min。

9)封片

在組織中央滴加適量的中性樹脂后，一手持載玻片，一手持蓋玻片，輕輕讓蓋玻片中心點接觸到中性樹脂脂滴的凸點，待其兩者接觸后，緩緩放下蓋玻片，讓中性樹脂自然地在蓋玻片下擴散開來即可，這樣可以很大程度上避免氣泡產生。

三、注意事項

1)實驗步驟中的時間需視HE染色試劑盒、組織大小、組織性質、室溫等因素而定，初次操作最好預實驗探明條件后再進行正式試驗；

2)切片的質量直接影響到染色效果的好壞，一般情況下切片厚度通常為3 μm左右，且需注意切片要厚薄均勻，鋪展平整，組織結構完整；

3)脫蠟一定要徹底，否則殘蠟會附著于組織上導致染出來的片子非常臟，甚至影響觀察；

4)梯度乙醇、二甲苯需要定期更換新的，乙醇揮發、切片進出帶來的水分均會影響試劑，達不到實驗的預期效果，這也提醒我們在每次進入下一步之前應該吸干切片上多余的水分；

5)染色過程中切勿干片，否則會導致切片收縮、變形，影響組織形態；

6)采用中性樹脂封片時需要注意選擇合適的蓋玻片，以剛好完全蓋住組織為宜；滴加中性樹脂需適量，太少不足以覆蓋整個組織，太多則會外溢（外溢后可用棉簽蘸取二甲苯對周圍進行擦拭，但一定要小心處理，片子未干前不要碰到蓋玻片）；封片時最好不要有氣泡產生，以免影響觀察。