在細胞研究中，通常需要對細胞的各個組份加以探究。其中，對細胞核蛋白和細胞漿蛋白進行分離，既能夠為研究蛋白在細胞內的位置提供幫助，也常常使得分離得到的核蛋白在轉錄調控研究中發揮作用。

以勻漿器研磨法提取貼壁細胞核蛋白為例：

一、準備試劑

1、臺盼藍染液：取臺盼藍粉劑，將其溶解在10mL的雙蒸水當中配制成質量體積比為4%（4%w/v）的臺盼藍母液。在使用時，利用PBS緩沖液將母液稀釋10倍，使其濃度達到0.4%，之后再與細胞懸液混合均勻。

2、BufferA：包含10mmol/L的HEPES（在4℃下pH值為7.9）、1.5mmol/L的氯化鎂、10 mmol/L的氯化鉀、0.5mmol/L的二硫蘇糖醇（DTT）。若擔心漿蛋白降解會對核蛋白產生影響，可以添加1mmol/L的苯甲基磺酰氟（PMSF）。

3、BufferB：含有20mmol/L的HEPES（pH值為7.9）、體積分數為25%的甘油、0.42mol/L的氯化鈉、1.5mmol/L的氯化鎂、0.2mmol/L的乙二胺四乙酸（EDTA）、0.5mmol/L的苯甲基磺酰氟（PMSF）、0.5mmol/L的二硫蘇糖醇（DTT）。

二、實驗步驟

1、使用胰酶將貼壁細胞消化下來，把這些細胞收集到1.5mL EP管中。4℃以300g的離心力離心5min。離心完成后，用PBS緩沖液對細胞進行洗滌(2次)。

2、棄上清，加入體積為細胞沉淀5倍的預冷Buffer A（每20μL的細胞沉淀加入100μL的Buffer A），之后輕輕吹打，使細胞在Buffer A中重新懸浮起來。

3、將上述細胞懸浮液在冰上放置10min，隨后再次在4℃條件下，以300g的離心力離心5min。離心結束后，加入體積為其25倍的預冷Buffer A，并通過吹打操作讓細胞重新懸浮。

4、把經過上述處理后的細胞懸液轉移勻漿器中，準備進行勻漿操作。

5、在勻漿過程中，取出少量的細胞懸液，與等體積的0.4%臺盼藍染液混合均勻，接著在顯微鏡下觀察細胞的破膜情況。如果觀察到大部分細胞都被染成了藍色，就停止勻漿操作；要是大部分細胞未被染成藍色，則繼續進行勻漿。

6、當大部分細胞的細胞膜被破壞后，將細胞懸液轉移至Eppendorf管中，然后在4℃環境下，以25000g的離心力離心20min。

7、離心完成后，此時上清液中包含的是細胞裂解物中的胞漿成分，而沉淀部分則是核蛋白。

8、收集離心后的沉淀，向其中加入與沉淀等體積的預冷Buffer B，然后輕輕地吹打，使沉淀呈現懸浮狀態。接著將懸浮液轉移到干凈的組織勻漿器中，以均勻的力度進行30次勻漿操作。

9、把經過勻漿的懸浮液轉移到Eppendorf管中，放在冰上的低速搖床上振蕩45min。

10、在4℃條件下，以25000g的離心力離心30min，收集得到的上清液即為細胞核蛋白

11、提取核蛋白后，可使用一些核蛋白（如H3蛋白、Lamin蛋白）作為對照蛋白，進行WB驗證。

內源性circ-sirt1的敲除增強了TNF-α誘導的NF-κBp65核轉位

三、注意事項

1、全部步驟均需于冰上操作。

2、第七步操作切勿觸碰沉淀，可于沉淀上方留存極少量上清液，該上清液即為抽提所得的細胞漿蛋，不然會造成細胞漿蛋白的污染狀況。