【問】表面微生物監測常見取樣方法有哪些？有哪些基本要求？

【答】表面微生物監測可以獲得生產區域和設備表面(非產品接觸和產品接觸)的微生物污染狀況，監測人員潔凈服和手套表面微生物，用來評估無菌生產工藝的執行情況。常見的方法有:接觸碟法、擦拭法、表面淋洗法和柔性薄膜法。

1.接觸碟法

接觸碟法使用方便并且提供定量的結果。接觸碟被灌裝充足的培養基以形成一個凸面，并能支持微生物的生長。接觸碟在使用前建議放置至室溫，從而減少由于冷凝水的原因導致的微生物生長成取樣時，將接觸碟按壓在平面-通過在取樣區域上從前0至后輕輕地旋轉按壓的方式進行，使接觸碟的瓊脂一邊緣先接觸被取樣表面，再逐漸使整個面接觸，避免瓊脂和被取樣面中間有氣泡而降低取樣效果。然后將取樣碟放置于培養箱中，按照驗證過的時間進行培養。在培養結束后對生長的菌落進行計數。

接觸碟法適用于規則平面的取樣，如地面、墻面、潔凈服和手套，取樣后必須去除取樣點殘留的培養基。

2.擦拭法

這個方法可以對不適用于接觸碟法的設備和不規則表面進行取樣，如有些企業對灌裝針使用擦拭法取樣。

擦拭法使用的拭子可以由滌綸、尼龍或藻酸鈣等物質組成，并且以棉束或紡紗材料的形式進行生產。對每根拭子進行合適的稀釋并漩渦混勻，然后進行澆平皿。擦拭法可以提供定性或定量的結果，這取決于在取樣后對拭子的處理方法。定性方法如:可以使用一個直接的擦拭方法，將一根潤濕的拭子在規定的區域進行取樣，取樣后直接將拭子放人液體培養基中培養;也可以直接劃線于瓊脂培養基平板上。定量方法如:用藻酸鈣的拭子，將拭子頭上的纖維物質溶解，從而釋放微生物至溶液中用于澆平皿。

3.表面淋洗法

這個方法推薦使用在對內表面有微生物污染水平要求的大面積的區域。此方法適用反應器、設備、軌道和罐子。通常使用無菌水與內表面進行接觸然后對其進行收集和測試。由于樣品量較大，通常使用膜過濾法對淋洗水進行測試。

4.柔性薄膜法

該方法使用較少，是使用含有培養基的柔性薄膜，與以接觸碟法類似的方式進行取樣。這些薄膜也能提供一個規定的取樣區域。將培養基薄膜的表面按壓在一個平面上，以旋轉滾動的方式，從而確保完全接觸到柔性薄膜。將薄膜放置在培養箱中按驗證過的時間進行培養。在培養結束后對生長的菌落進行計數。如同接觸樣柔性薄膜會在取樣表面上留有培養基殘留，也必須去除。

來源:藥品GMP指南第2版無菌制劑上冊(P520-522)