本文主要依據(jù)化藥不同注冊(cè)類別，分享涉及皮膚外用制劑4類場(chǎng)景下對(duì)應(yīng)的非臨床藥理毒理研究?jī)?nèi)容。鑒于沒有專門針對(duì)皮膚外用制劑的非臨床研究指南，本文主要以案例形式展開。4類情況分別是：1）1類皮膚外用新藥；2）2類，上市后劑型和給藥途經(jīng)同時(shí)變更，如口服固體制劑改皮膚外用制劑；3）2類，上市后劑型變更，給藥途經(jīng)不變，如皮膚外用膏劑改凝膠劑；4）3類或4類，皮膚外用仿制藥。

1類皮膚外用新藥

1類新藥自然要開展全面的藥理學(xué)和毒理學(xué)評(píng)估。皮膚外用新藥除了給藥途徑和系統(tǒng)給藥有所區(qū)別外，比較特殊的考量還包括除了考察臨床擬用途徑如經(jīng)皮給藥，通常還需要額外開展系統(tǒng)給藥途徑（如口服）的一般毒理研究。皮膚用藥有可能誤入眼睛，需要開展體外或體內(nèi)的眼刺激性試驗(yàn)。分享兩個(gè)案例。

Zelsuvmi（berdazimer外用凝膠或SB206凝膠，10.3%）是一種新化學(xué)實(shí)體藥物，由Ligand Pharmaceuticals開發(fā)，于2024年1月5日獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)，皮膚外用治療成人和1歲及以上兒童的傳染性軟疣。Berdazimer是一種一氧化氮釋放劑，一氧化氮已被證明具有抗病毒特性。盡管Zelsuvmi的確切作用機(jī)制尚不清楚，但其在臨床試驗(yàn)中顯示出顯著的治療效果。臨床擬用方案是在軟疣病灶薄層涂抹，每天1次，最長(zhǎng)持續(xù)12周。

Zelsuvmi的非臨床研究package如下表所示。正常的地方就不啰嗦了，解釋下異常的地方吧。主要藥效學(xué)沒有披露具體研究?jī)?nèi)容，本身作用機(jī)制確實(shí)就不太清楚，另外可能沒有合適的動(dòng)物模型。也可能開展了一些試驗(yàn)，F(xiàn)DA沒有總結(jié)進(jìn)來。大概率是前者。藥代方面未開展分布、代謝和排泄，可能與藥物活性成分是一氧化氮有關(guān)。不過，未開展非嚙齒類動(dòng)物的PK研究，不曉得原因是什么，用TK數(shù)據(jù)支持嗎？一般毒理開展了嚙齒（經(jīng)皮+口服）和非嚙齒類（經(jīng)皮）短期重復(fù)給藥毒理試驗(yàn)，未開展非嚙齒類系統(tǒng)給藥途徑的毒理研究。更長(zhǎng)周期經(jīng)皮給藥重復(fù)給藥毒理研究?jī)H在小型豬中開展，可能與短期經(jīng)皮給藥毒理結(jié)果嚙齒類和小型豬比較相似或者小型豬皮膚與人體更為接近有關(guān)。更長(zhǎng)周期系統(tǒng)給藥途徑毒理研究因經(jīng)皮給藥系統(tǒng)暴露量很低被豁免。系統(tǒng)給藥的致癌性研究以同樣的理由豁免。

Opzelura（Ruxolitinib）是一種JAK1/JAK2抑制劑Ruxolitinib的外用乳膏制劑，由Incyte公司開發(fā)。2021年被FDA批準(zhǔn)用于治療輕度至中度特應(yīng)性皮炎。JAK抑制可以減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，從而緩解特應(yīng)性皮炎的癥狀，如皮膚炎癥和瘙癢。每日兩次，涂抹于患處。

FDA披露的非臨床研究?jī)?nèi)容如下圖所示。整體研究非常全面。值得一提的是，一般毒理研究未見嚙齒類動(dòng)物皮膚外用毒理試驗(yàn)。小型豬也只是體現(xiàn)的9個(gè)月更長(zhǎng)周期毒理研究的內(nèi)容。結(jié)合EMA披露的信息，其實(shí)還開展了小鼠3個(gè)月經(jīng)皮給藥，小型豬3個(gè)月經(jīng)皮給藥毒理試驗(yàn)。所以有些研究，F(xiàn)DA并未在綜述中體現(xiàn)。

劑型和給藥途徑同時(shí)變更

FDA在劑型變更產(chǎn)品非臨床研究指南中提到，對(duì)于變更為皮膚外用制劑的藥物，需考慮遲發(fā)型超敏反應(yīng)、光毒性評(píng)估。如果之前未開展過眼部刺激，則皮膚用藥有可能誤入眼睛，需要開展體外或體內(nèi)的眼刺激性試驗(yàn)。如果藥物活性成分未經(jīng)歷過經(jīng)皮給藥路徑，則需要開展在一種非嚙齒類動(dòng)物（推薦小型豬）中的局部重復(fù)給藥毒性研究，給藥周期與臨床擬用周期一致（最長(zhǎng)不超過9個(gè)月），且需要伴隨局部和系統(tǒng)暴露量的評(píng)估。另外，如果皮膚給藥劑量比系統(tǒng)途徑給藥后折合的皮膚劑量高出幾個(gè)數(shù)量級(jí)，且臨床擬用適應(yīng)癥為慢性病，即使系統(tǒng)給藥途徑開展過致癌試驗(yàn)，也需要考慮開展皮膚給藥的致癌性研究。當(dāng)然，如果經(jīng)皮給藥的慢性重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中未觀察到癌前病變，且無其他致癌擔(dān)憂，如藥物無基因毒性、藥物系統(tǒng)給藥途徑致癌性結(jié)果提示無風(fēng)險(xiǎn)，則可以豁免皮膚給藥途徑的致癌性研究。

今天分享的這個(gè)案例是AMZEEQ（minocycline，米諾環(huán)素），一個(gè)濃度為4%的局部皮膚外用泡沫劑。臨床擬用于成年患者及9歲以上兒科非結(jié)節(jié)性中重度痤瘡患者的炎癥性病變的治療。每天一次，涂抹于病變區(qū)域。在泡沫劑上市前，米諾環(huán)素的膠囊、片劑和靜脈注射制劑已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)上市。所以，本次申請(qǐng)屬于上市后的劑型變更，從系統(tǒng)給藥制劑改為皮膚外用制劑，按照505b2途徑提交，橋接的批準(zhǔn)藥品（Listed drug, LD）為鹽酸米諾環(huán)素緩釋片（SOLODYN），即主要橋接該產(chǎn)品開展的非臨床數(shù)據(jù)。剖析下這個(gè)案例，看下這類劑型變更需要開展哪些非臨床橋接工作。

主要藥效學(xué)：米諾環(huán)素對(duì)許多革蘭氏陽性和陰性菌有活性，包括痤瘡丙酸桿菌。但具體治療痤瘡的機(jī)制未完全闡明。AMZEEQ和SOLODYN均未開展體內(nèi)藥效學(xué)試驗(yàn)。

次要藥效學(xué)：AMZEEQ和SOLODYN均未開展。

安全藥理學(xué)：AMZEEQ未開展安全藥理學(xué)研究。橋接的緩釋片劑SOLODYN的安全藥理試驗(yàn)結(jié)果。SOLODYN開展了大鼠Irwin神經(jīng)藥理研究、比格犬心血管藥理研究（遙測(cè)技術(shù)）、大鼠呼吸系統(tǒng)作用研究。結(jié)果顯示大鼠最高給予1000mg/kg未見神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)不良反應(yīng)。比格犬給予100mg/kg未見血壓、心率和ECG等心血管毒性。

藥代動(dòng)力學(xué)：AMZEEQ未開展藥代動(dòng)力學(xué)研究。不過，在3周、12周和39周小型豬重復(fù)經(jīng)皮給藥毒理試驗(yàn)中伴隨考察了毒代動(dòng)力學(xué)。主要考察指標(biāo)是系統(tǒng)暴露量AUC、Cmax，及達(dá)峰時(shí)間Tmax。

一般毒理試驗(yàn)：AMZEEQ開展了3周、12周、39周小型豬經(jīng)皮給藥毒理試驗(yàn)。

遺傳毒性試驗(yàn)：AMZEEQ未開展遺傳毒性試驗(yàn)。橋接的SOLODYN的AMES、體外染色體畸變和體內(nèi)微核試驗(yàn)。

致癌性試驗(yàn)：AMZEEQ的39周小型豬經(jīng)皮重復(fù)給藥毒理試驗(yàn)未見癌前病變和異常增生性改變，豁免了經(jīng)皮給藥致癌試驗(yàn)。SOLODYN開展了大鼠和小鼠經(jīng)口給藥2年致癌性研究。

生殖毒性試驗(yàn)：AMZEEQ未開展生殖毒性試驗(yàn)。

其它毒理試驗(yàn)：AMZEEQ開展了豚鼠；開展了牛角膜渾濁度和滲透性試驗(yàn)（即眼刺激研究）；

總結(jié)：米諾環(huán)素從片劑SOLODYN改為皮膚外用制劑AMZEEQ，大部分非臨床研究采用的橋接數(shù)據(jù)，AMZEEQ僅開展了5項(xiàng)試驗(yàn)，3周、12周、39周小型豬經(jīng)皮重復(fù)給藥毒理試驗(yàn)、豚鼠AMZEEQ和眼刺激性試驗(yàn)。經(jīng)皮給藥致癌性試驗(yàn)因低風(fēng)險(xiǎn)而被豁免。與FDA指南要求基本一致，唯一沒看到皮膚局部藥物暴露檢測(cè)。所以，如果LD制劑的非臨床研究還算完整，這類變更需要補(bǔ)充的非臨床研究主要包括新給藥途徑的不同給藥周期一般毒+制劑安全性，光毒和致癌研究則視情況而定。

劑型變更、給藥途經(jīng)不變

與上一章節(jié)的區(qū)別是，這類藥物的活性成分前期經(jīng)歷過經(jīng)皮給藥途徑，給藥途徑未發(fā)生變化。更多的是不同皮膚外用之間制劑處方的調(diào)整。這類藥物開展的非臨床研究應(yīng)該更少一些。分享3個(gè)案例。

FABIOR泡沫是一種局部用藥制劑，其主要活性成分為他扎羅汀，這是一種類維生素A的化合物，具有調(diào)節(jié)皮膚細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的作用。2012年被FDA批準(zhǔn)上市，用于治療12歲及以上患者的尋常痤瘡。FABIOR的非臨床研究主要橋接的2001年上市的Tazorac (tazarotene) cream, 0.1%，1996年上市的tazarotene gel。FABIOR開展的主要試驗(yàn)內(nèi)容包括：1）大鼠1個(gè)月經(jīng)皮給藥毒理研究；2）大鼠3個(gè)月經(jīng)皮給藥毒理研究；3）小型豬1個(gè)月經(jīng)皮給藥毒理研究；2）體外人體皮膚滲透性試驗(yàn)；3）制劑安全性研究（過敏、眼刺激、皮膚刺激）。

Arazlo是一種含有他扎羅汀，0.045%的外用乳液，活性成分與FABIOR類似，用于治療9歲及以上患者的尋常痤瘡。2019年被FDA批準(zhǔn)上市。Arazlo的非臨床研究主要橋接的Tazorac (tazarotene) cream, 0.1%。Arazlo開展的主要試驗(yàn)內(nèi)容包括：1）3個(gè)月小型豬經(jīng)皮給藥毒理研究；2）制劑安全性研究（過敏、眼刺激）；3）動(dòng)物光毒性研究；4）hERG試驗(yàn)（可能考慮到處方中含有halobetasol propionate）。備注下，光毒也算制劑安全性一種，此處單列。

TWYNEO是一種創(chuàng)新的復(fù)方乳膏制劑，由過氧化苯甲酰和維A酸組成，具有0.1%維A酸和3%過氧化苯甲酰的固定劑量組合。2021年獲批上市，用于治療9歲及以上患者的尋常痤瘡。過氧化苯甲酰和維A酸均有皮膚外用制劑上市，TWYNEO主要橋接的兩個(gè)單藥組分的非臨床研究數(shù)據(jù)。TWYNEO開展的主要試驗(yàn)內(nèi)容包括：1）14天小型豬經(jīng)皮給藥毒理研究；2）3個(gè)月小型豬經(jīng)皮給藥毒理研究；3）動(dòng)物光毒性研究；4）制劑安全性（過敏、眼刺激）。

總結(jié)：相較于劑型和給藥途經(jīng)同時(shí)變更的產(chǎn)品，只變更劑型，如果不涉及輔料風(fēng)險(xiǎn)，少了致癌試驗(yàn)。一般毒理研究的給藥周期也短。FABIOR獲批時(shí)間早，大鼠和小型豬的短周期配合大鼠更長(zhǎng)周期的策略，不如Arazlo、TWYNEO的思路科學(xué)。所以，對(duì)于不同皮膚局部外用制劑調(diào)整的藥物，非臨床研究以3個(gè)月小型豬一般毒+制劑安全性為主，光毒性則視情況而定。

仿制藥

先看下藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則中與皮膚給藥制劑相關(guān)的描述：

刺激性試驗(yàn)是觀察動(dòng)物的血管、肌肉、皮膚、粘膜等部位接觸受試物后是否引起紅腫、充血、滲出、變性或壞死等局部反應(yīng)。

通常局部給藥發(fā)揮全身作用的藥物（如注射劑和透皮吸收劑等）需考察Ⅰ型過敏反應(yīng)，如透皮吸收劑需進(jìn)行主動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)（Active Cutaneous Anaphylaxis, ACA）。

經(jīng)皮給藥制劑（包括透皮劑）應(yīng)進(jìn)行IV型過敏反應(yīng)試驗(yàn)，包括豚鼠最大化試驗(yàn)（Guinea-Pig Maximization Test, GPMT）或豚鼠封閉斑貼試驗(yàn)（Buehler Test）或其他合理的試驗(yàn)方法如小鼠局部淋巴結(jié)試驗(yàn)（Murine Local Lymph Node Assay, LLNA）等。

那么對(duì)于仿制已經(jīng)上市的藥物，劑型和處方均未變化，非臨床研究是刺激+Ⅰ型過敏+IV型過敏嗎？這個(gè)組合是比較保險(xiǎn)的。不過，咨詢業(yè)內(nèi)朋友也有反饋可以只做刺激+Ⅰ型過敏的。