在清潔消毒驗(yàn)證中采用適當(dāng)?shù)娜蛹夹g(shù)是必要的。取樣過(guò)程中涉及的技術(shù)方法應(yīng)與設(shè)備表面和研究本質(zhì)相適應(yīng)，包括使用的分析方法。這一部分討論了取樣方法的類(lèi)型，驗(yàn)證取樣回收研究以及取樣人員的培訓(xùn)及資質(zhì)。

1  、取樣方法選擇

取樣方法的選擇取決于設(shè)備性質(zhì)以及檢測(cè)殘留物的性質(zhì)。此處討論的取樣方法是直接表面取樣，擦拭取樣， 沖洗水取樣以及空白對(duì)照取樣。值得注意的是法規(guī)文件中指出擦拭被認(rèn)為是 “直接” 取樣，沖洗水取樣被認(rèn)為是“間接”取樣，所指的取樣方法如“擦拭取樣”和“沖洗水取樣”是更可取并且更好被描述的，技術(shù)上保留“直接取樣”的術(shù)語(yǔ)，比如使用目測(cè)檢查。

1、 直接取樣方法

清潔過(guò)程中應(yīng)除去設(shè)備表面上來(lái)自于生產(chǎn)工藝可見(jiàn)殘留，這一點(diǎn)是被廣泛認(rèn)可的。設(shè)備的目測(cè)檢查具有局限性，因?yàn)橐恍┰O(shè)備表面（比如管道）通常是不易觀察的。像鏡子或者內(nèi)視鏡之類(lèi)的光學(xué)儀器的使用作為輔助照明能夠幫助進(jìn)行目測(cè)檢查。

當(dāng)由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的人員由于要接觸設(shè)備表面而難以進(jìn)行目檢時(shí)或者是補(bǔ)充 “未受協(xié)助” 的目檢程序時(shí)，遠(yuǎn)程檢查技術(shù)（纖維光學(xué)探頭以及 LCD 觀察屏）被應(yīng)用。

管道內(nèi)窺鏡，纖維內(nèi)窺鏡以及光纖視鏡允許對(duì)難以達(dá)到的區(qū)域進(jìn)行目檢。管道內(nèi)窺鏡用于觀察管道內(nèi)部和水槽焊接點(diǎn)。這些范圍的典型好處是：適用于操作人員接觸不到的密閉空間；易操作，具有輔助照明并且具有選擇性放大和/或提升的能力。這些范圍的最大缺點(diǎn)是使用復(fù)雜， 控制照明/亮度，并且操作人員需要判斷該區(qū)域是否能夠清晰可見(jiàn)。

遠(yuǎn)程可視相機(jī)允許操作人員在屏幕上觀察遠(yuǎn)程區(qū)域。相機(jī)與范圍具有大部分相同的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，而更多的優(yōu)勢(shì)是操作人員能夠代表性的記錄視頻或者拍照。多個(gè)操作人員能夠同時(shí)觀察到屏幕顯示了什么。記錄視頻以及允許多個(gè)觀察者觀察屏幕的可能性可以幫助支持廠區(qū)目檢培訓(xùn)程序。來(lái)自相機(jī)的打印的圖片可能扭曲殘留的實(shí)際數(shù)量，因?yàn)椴僮魅藛T將在特殊區(qū)域內(nèi)聚焦，當(dāng)拍照時(shí)。

所有這些的技術(shù)，像是目檢，要求具有充足的培訓(xùn)程序。

2、 沖洗取樣

沖洗取樣涉及對(duì)設(shè)備取樣通過(guò)流水沖洗所有相關(guān)設(shè)備表面移除殘留，殘留將在沖洗水中進(jìn)行測(cè)量。大部分沖洗取樣技術(shù)是在清潔過(guò)程中的最終沖洗中通過(guò)從最終沖洗水中提取隨機(jī)樣品。另一個(gè)選擇是在完成清潔程序后，用水填滿(mǎn)整個(gè)設(shè)備。然后，取大部分樣品進(jìn)行分析。第三個(gè)選擇是使用單獨(dú)的 CIP 取樣沖洗定量，在最終沖洗完成后。

沖洗水取樣的一個(gè)特殊情況就是小部件取樣。沖洗取樣的一種方法就是小部件提取。提取過(guò)程中，提取液（生物技術(shù)殘留的典型水）被放置在清潔的容器中。之后小部件被放置在提取液中并且在固定的時(shí)間進(jìn)行搖動(dòng)或者超聲處理。之后對(duì)樣品溶液進(jìn)行分析可能存在的殘留。對(duì)于小部件沖洗取樣的第二種方法典型的用于具有孔口的部件， 比如灌裝針頭。在這個(gè)程序中， 定量的樣品溶液 （再次，代表性的水）通過(guò)內(nèi)腔并在潔凈的收取容器中收集。勻速搖動(dòng)樣品溶液，之后對(duì)可能存在的殘留進(jìn)行分析。因?yàn)楸砻鎱^(qū)域和取樣量是精確已知的，對(duì)于這種情況，能夠精確計(jì)算限度。

3、 擦拭取樣

擦拭取樣涉及使用纖維材料擦拭表面（最一般的）。擦拭過(guò)程中，表面的殘留被轉(zhuǎn)移至纖維材料上。隨后纖維材料被放置在溶劑中，將殘留轉(zhuǎn)移至溶劑中。之后采用可接受的分析技術(shù)對(duì)溶劑進(jìn)行殘留分析。最常見(jiàn)的纖維材料是帶有塑料手柄的一些紡織物（針織的，梭織的或者無(wú)紡布的）。

大部分情況下，在對(duì)表面取樣前棉簽是濕的并且?guī)в腥軇?duì)于TOC和電導(dǎo)的方法，溶劑大部分情況下總是水。對(duì)于同樣位置的取樣，公司可能選擇取樣同樣的表面積進(jìn)行多次擦拭，以提供表面更高的殘留回收率。在這些情況下，使用的附加擦拭可以是干擦或者具有同樣溶劑的濕擦。

2 、空白對(duì)照取樣

在生物工程中，空白對(duì)照取樣通常不包括實(shí)際產(chǎn)品的空白對(duì)照，相反的，只包括注射用水或者沒(méi)有任何產(chǎn)品的水性處理緩沖液。在取樣過(guò)程中，設(shè)備被清潔。隨著清潔只用注射用水或者緩沖液進(jìn)行生產(chǎn)加工過(guò)程。隨著加工，注射用水或者緩沖液被認(rèn)為是任何其他的清潔確認(rèn)樣品，尤其是對(duì)TOC（或總蛋白），電導(dǎo)率，生物載荷以及內(nèi)毒素，作為具有這些殘留的生產(chǎn)產(chǎn)品可能存在的污染的測(cè)量。對(duì)于散裝和制劑/灌裝生產(chǎn)進(jìn)行的空白對(duì)照顯示了真實(shí)的到處理過(guò)材料的遺留。

3  、微生物以及內(nèi)毒素分析取樣

生物載荷的取樣涉及沖洗水取樣，擦拭或者接觸碟。生物載荷的沖洗水取樣必須包括無(wú)菌取樣容器的使用。一個(gè)細(xì)致的取樣技術(shù)對(duì)任何微生物方法都是被要求的，以避免取樣的外部污染。

內(nèi)毒素取樣總是采用沖洗水取樣。關(guān)于微生物評(píng)估的這些取樣技術(shù)，對(duì)于生物技術(shù)不是唯一的。

4 、取樣回收研究

取樣回收研究一般都是要求的，充分顯示如果存在在設(shè)備表面，殘留能夠通過(guò)分析方法的結(jié)合和取樣程序進(jìn)行監(jiān)測(cè)和定量。這些研究為使用檢測(cè)殘留的取樣和分析方法提供了科學(xué)依據(jù)。下面討論了三種取樣回收：擦拭取樣回收，沖洗水取樣回收以及“目檢”回收。

對(duì)于擦拭和沖洗水取樣，回收研究作為分析方法驗(yàn)證的一部分進(jìn)行，或者可以作為單獨(dú)的研究進(jìn)行，一旦決定分析方法能夠在溶液中檢測(cè)出殘留。取樣回收研究是實(shí)驗(yàn)室研究，包括不同材質(zhì)的被取樣設(shè)備的取樣片（如，不銹鋼，玻璃，PTFE和硅膠），帶有殘留以檢測(cè)。

1、 總則

回收研究對(duì)于已知是水溶的并且低于溶解限度的某些殘留是不需要的，如，作為清潔劑的氫氧化鈉或者磷酸。

在進(jìn)行擦拭和沖洗水取樣回收研究中，帶有材質(zhì)的取樣片的數(shù)量應(yīng)代表等同于代表殘留限度的數(shù)量，這也代表了最差條件。

標(biāo)記的殘留應(yīng)是與警戒過(guò)程結(jié)束時(shí)出現(xiàn)的一樣的殘留。對(duì)于生物技術(shù)蛋白活性物，實(shí)際是降解的蛋白質(zhì)碎片。但是慣例做法是標(biāo)記主體蛋白活性物質(zhì)，因?yàn)檫@樣更簡(jiǎn)單并且代表了最差條件。對(duì)于大部分生物技術(shù)生產(chǎn)，一些生產(chǎn)只對(duì)原料藥進(jìn)行回收，其他的將使用早期階段的產(chǎn)品代表早期階段的殘留。

對(duì)于所有取樣的表面都應(yīng)建立回收值。對(duì)于擦拭和沖洗水取樣，在進(jìn)行所有表面的回收研究時(shí)完成。可替換的選擇就是在表面上進(jìn)行一個(gè)殘留研究，通過(guò)記錄的證據(jù)，等同于（術(shù)語(yǔ)是回收率）其他沒(méi)有進(jìn)行正式回收研究的表面。對(duì)于回收研究，這是本質(zhì)的分組或者家族方法。建立分組或家族等值是基于發(fā)布的研究或內(nèi)部的數(shù)據(jù)。一些公司使用的另一個(gè)方法是排除整個(gè)設(shè)備表面少于小的百分比（如 1%或 2%）取樣表面組成的正式回收研究，在這樣的情況下，用于排除表面的回收值是任何其他表面種類(lèi)的最低回收，為此進(jìn)行正式的取樣回收研究或者根據(jù)公司程序要求最低可接受回收百分比。

擦拭回收研究被進(jìn)行是在平方面積為25cm²或者100cm²。方案中取樣生產(chǎn)設(shè)備中，擦拭10cm×10cm的區(qū)域并不總是可能的（必要時(shí)擦拭5cm×20cm的區(qū)域） 。此外，精確的擦拭 100cm²實(shí)際上是不可能的（可能要求 60cm²或者128cm²，由于設(shè)備特定幾何結(jié)構(gòu)）。在這種情況下，針對(duì)這些情況基于取樣10cm×10cm應(yīng)用回收百分比。如果采用這種方法，可接受表面積范圍（如，實(shí)際取樣區(qū)域的 25%到 150%）應(yīng)該建立。但是，如果方案中設(shè)備表面的取樣區(qū)域與實(shí)際有區(qū)別，樣品的殘留限度應(yīng)基于實(shí)際的擦拭面積進(jìn)行調(diào)整。

2、 擦拭回收

對(duì)于擦拭回收研究，取樣片使用目標(biāo)殘留溶劑標(biāo)記，干燥，在清潔驗(yàn)證方案中使用擦拭程序進(jìn)行取樣。在適當(dāng)?shù)娜軇┲胁潦帽唤馕趯?shí)際樣品中測(cè)量殘留的數(shù)量。回收量與取樣片上標(biāo)記的數(shù)量進(jìn)行比較，以回收百分比的形式表示結(jié)果。因?yàn)椴潦檬鞘止こ绦颍總€(gè)人重復(fù)進(jìn)行三次回收研究。最好是至少兩個(gè)人對(duì)每個(gè)殘留結(jié)合和表面種類(lèi)進(jìn)行擦拭回收研究。研究所建立的回收百分比可以以不同的方式定義，但是代表性的被定義為任何一個(gè)分析者的最低平均回收率。一個(gè)可接受的擦拭回收率取決于如何使用擦拭回收率。如果進(jìn)行的回收率以證明取樣方法不具有限度或者分析結(jié)果的修正，要求至少70%的回收率。如果回收百分比被用于修正殘留限度或分析結(jié)果，要求至少50%的回收率。應(yīng)建立回收百分比的上限。

3、 沖洗回收

沖洗回收研究解決了殘留沖洗取樣的正確性。說(shuō)明了如果表面有殘留，殘留將被有效移除并在沖洗液中進(jìn)行分析。沖洗回收研究像擦拭回收研究一樣，在標(biāo)有目標(biāo)殘留溶液的取樣片上進(jìn)行并允許干燥。對(duì)于擦拭取樣，在清潔驗(yàn)證方案中使用準(zhǔn)確的擦拭程序是必要的。對(duì)于沖洗取樣，相反的，精確的沖洗程序在實(shí)驗(yàn)室中是不能夠被復(fù)制的。但是， 在實(shí)驗(yàn)室中模擬沖洗程序是可以實(shí)現(xiàn)的。如果可能，模擬沖洗的條件應(yīng)該與設(shè)備沖洗的情況相同。這包括沖洗溶劑的選擇（典型的是水） ，以及沖洗溶劑的溫度。在其他的情況下，應(yīng)選擇與設(shè)備沖洗條件相同或者最差情況的沖洗條件。比如，取樣表面的溶劑比在回收研究中應(yīng)與設(shè)備沖洗條件相同或者低于設(shè)備沖洗條件。

模擬沖洗過(guò)程的一種方法是在清潔的收集容器之上懸掛標(biāo)記的取樣片并傾倒沖洗溶液到表面至收集容器中。另一種方法是標(biāo)記適當(dāng)材質(zhì)的燒杯底部，允許殘留干燥，加入沖洗溶液至燒杯，溫和攪拌一段時(shí)間，近似于最終沖洗的時(shí)間。沖洗溶液從燒杯中由移液管吸出或者倒出并進(jìn)行分析。第三種選擇，這種情況下使用材質(zhì)的燒杯是不合適的，在燒杯底部放入標(biāo)記的取樣片，模擬沖洗，后續(xù)如第二種方法。

因?yàn)闆_洗取樣不典型的依賴(lài)于操作者，一個(gè)操作人員重復(fù)三次以確定回收百分比是充足的。可接受的回收百分比建立在擦拭回收研究同樣的水平和條件下。

4、 目檢中的“回收”

這個(gè)過(guò)程實(shí)際上是確定定量的“目檢限度” ，在此，目檢是唯一的取樣/分析方法并且“目檢清潔”被用作給定殘留唯一可接受的標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)對(duì)殘留缺少擦拭或沖洗取樣時(shí)。如果目檢用來(lái)補(bǔ)充擦拭或者沖洗取樣，則不需要確定目檢限度。特定觀察條件下的目檢限度可通過(guò)在不同水平下（以 μg/cm²）帶有殘留溶液的設(shè)備表面材質(zhì)標(biāo)記取樣片確定并且通過(guò)受訓(xùn)觀察人員小組確定在標(biāo)記表面清楚觀察到殘留的最低水平。這種目檢限度的意義是如果設(shè)備表面被確定目檢清潔在清潔驗(yàn)證方案中同樣（或更嚴(yán)格）觀察條件下，擦流水平是低于目檢限度的。適當(dāng)?shù)挠^察條件包括距離，亮度和角度。目檢限度取決于殘留的特性以及表面的特性以及檢察人員的視覺(jué)靈敏度。文獻(xiàn)中目檢限度報(bào)告的標(biāo)準(zhǔn)值是1-4μg/cm²。

5、 生物載荷和內(nèi)毒素取樣的回收

回收研究確定表面回收百分比是不恰當(dāng)?shù)牟⑶覍?duì)于微生物取樣或者內(nèi)毒素取樣是不要求的，原因如下：

1.微生物檢測(cè)計(jì)算的問(wèn)題——“菌落形成單位”是可計(jì)數(shù)的，而個(gè)體微生物是不能計(jì)數(shù)的。

2.植物微生物將死亡或者失去生存能力當(dāng)在標(biāo)準(zhǔn)取樣回收程序中對(duì)取樣片干燥時(shí)。

3.這個(gè)菌種用于回收研究是不清晰的。

4.微生物限度的設(shè)置顯著的低于能夠引起產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題或工藝性能（如，SIP）的可能，因此，即使回收可能是低的（＜50%），產(chǎn)品質(zhì)量或工藝性質(zhì)不能受到影響通過(guò)排除回收因子。

5 、取樣人員的培訓(xùn)和資質(zhì)

培訓(xùn)包括的步驟是幫助取樣人員學(xué)習(xí)取樣/檢查的技術(shù)。這章的目的是， “取樣”和“取樣人”也包括目測(cè)評(píng)估的“檢查”和“檢查人” 。資質(zhì)確認(rèn)包括證明的過(guò)程，預(yù)期的取樣人員能夠恰當(dāng)?shù)耐瓿扇印?/span>

培訓(xùn)總是在確認(rèn)資質(zhì)確認(rèn)前。至少，受訓(xùn)人員應(yīng)了解取樣程序并且經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的取樣人員應(yīng)說(shuō)明正確的程序。在了解和說(shuō)明的過(guò)程中，經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的取樣人員對(duì)取樣程序中的某些實(shí)踐或細(xì)節(jié)給予合理解釋。技術(shù)說(shuō)明也可以使用目測(cè)指示劑在擦拭的表面上，以幫助受訓(xùn)者觀察結(jié)果。培訓(xùn)的最后一步是由預(yù)期取樣人員對(duì)正確的程序進(jìn)行說(shuō)明。

取樣資質(zhì)確認(rèn)的過(guò)程將取決于取樣的種類(lèi)。資質(zhì)確認(rèn)只包括正確技術(shù)的說(shuō)明 （也就是培訓(xùn)過(guò)程的最后一步） 或者， 還包括一個(gè) “測(cè)試” ，挑戰(zhàn)受訓(xùn)者正確進(jìn)行活動(dòng)的能力（如，使用一些取樣片進(jìn)行目檢，包括一些是臟污的其他的不是，或者在取樣片上對(duì)已知的臟污殘留進(jìn)行擦拭取樣） 。任何一種資質(zhì)確認(rèn)都可以定期重復(fù)或者根據(jù)取樣人員在培訓(xùn)情況進(jìn)行重復(fù)。

1、 擦拭取樣培訓(xùn)的關(guān)鍵問(wèn)題

對(duì)于培訓(xùn)預(yù)期取樣人員最好有一份單獨(dú)的擦拭取樣 SOP。這將避免可能出現(xiàn)的“程序變形” ，如果擦拭程序內(nèi)容在每一個(gè)方案中重復(fù)出現(xiàn)。這也將有助于保證在回收研究中使用同樣的取樣程序，如同方案中執(zhí)行的并簡(jiǎn)化培訓(xùn)。

擦拭培訓(xùn)中一致性的4個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：

1.濕潤(rùn)擦拭頭的一致性

2.擦拭動(dòng)作的一致性（包括重疊的筆畫(huà)）

3.使用壓力的一致性

4.適當(dāng)表面擦拭的一致性

假設(shè)使用的正確的擦拭，擦拭的正確數(shù)量以及正確的潤(rùn)濕溶液，那么第五個(gè)擦拭取樣的關(guān)鍵因素包括TOC，強(qiáng)調(diào)避免擦拭的外部污染，由于到處存在的有機(jī)碳。在培訓(xùn)擦拭取樣人員時(shí)微生物取樣中強(qiáng)調(diào)采用 “無(wú)菌技術(shù)”是有好處的，尤其是取樣涉及TOC分析。相對(duì)于微生物取樣中使用的無(wú)菌技術(shù)，手套上或者在取樣前在鄰近的表面使用異丙醇的負(fù)面結(jié)果（即，人為的提高了 TOC值）應(yīng)強(qiáng)調(diào)。

因?yàn)椴潦萌硬幌肴斯で鍧嵾^(guò)程，更高的取決于人員的一致性， 應(yīng)考慮在已建立的基礎(chǔ)上對(duì)擦拭取樣人員進(jìn)行再培訓(xùn)和/或再確認(rèn)。再培訓(xùn)可能包括與初始培訓(xùn)同樣的過(guò)程，或者只包括原始培訓(xùn)的一部分。再確認(rèn)通常包括對(duì)初始確認(rèn)的重復(fù)。再培訓(xùn)和/或再確認(rèn)的需求應(yīng)作為擦拭程序變更控制的一部分進(jìn)行處理并且作為補(bǔ)救措施，當(dāng)調(diào)查不合格結(jié)果時(shí)，懷疑發(fā)生擦拭取樣“操作失誤” 。

2、 沖洗取樣培訓(xùn)的關(guān)鍵問(wèn)題

對(duì)于培訓(xùn)預(yù)期的取樣人員最好有單獨(dú)的沖洗取樣SOP。對(duì)于CIP 系統(tǒng)，沖洗取樣程序可能與水系統(tǒng)取樣是相同的程序，適當(dāng)?shù)男拚愿采w工藝設(shè)備的取樣。

沖洗取樣中精確度的最大問(wèn)題是避免對(duì)沖洗樣品產(chǎn)生污染，由于取樣口和取樣口周?chē)沫h(huán)境。這包括充分的沖洗或者清潔取樣點(diǎn)，在取樣之前，以及避免由于在手套上使用異丙醇或者使用異丙醇清潔取樣口（在取樣之前）而對(duì)樣品產(chǎn)生污染。正如在擦拭取樣培訓(xùn)中，在培訓(xùn)沖洗取樣人員過(guò)程中強(qiáng)調(diào)微生物取樣中使用“無(wú)菌技術(shù)”是有好處的，尤其取樣涉及TOC 分析。在培訓(xùn)沖洗水取樣人員從CIP 循環(huán)系統(tǒng)的最終沖洗水取樣時(shí)，取樣的時(shí)間是至關(guān)重要的。一般的是沖洗水的最后一部分用來(lái)取樣，但是，如果取樣能夠代表最差條件，在此之前進(jìn)行取樣也是可接受的。然而，一旦沖洗過(guò)程完成，就沒(méi)有辦法返回和收集沖洗水樣品。（除非進(jìn)行一個(gè)單獨(dú)的沖洗水取樣）

由于沖洗水取樣的一致性較少的依賴(lài)于操作人員，再培訓(xùn)和再確認(rèn)的需求作為沖洗水取樣程序變更控制的一部分進(jìn)行處理，并在不合格結(jié)果調(diào)查中疑似取樣操作失誤時(shí)進(jìn)行。

3、 目檢培訓(xùn)

目檢的培訓(xùn)取決于目檢是否作為執(zhí)行程序的一部分或者目檢是否是實(shí)驗(yàn)室“檢測(cè)限度”的決定。在任何一種情況下，最好有目檢的SOP，以便根據(jù)SOP 進(jìn)行培訓(xùn)。任何目檢的檢察人員都應(yīng)有適當(dāng)?shù)囊暳y(cè)試。

執(zhí)行方案中關(guān)于目檢人員的培訓(xùn)，關(guān)鍵點(diǎn)是：

1.進(jìn)入地點(diǎn)查看

2.適當(dāng)?shù)墓庠?/span>

3.識(shí)別表面殘留和表面缺陷之間差異的能力

目檢培訓(xùn)的一個(gè)重要元素是知道什么時(shí)候要求進(jìn)一步的分析以確定殘留的性質(zhì)。比如，如果設(shè)備上發(fā)現(xiàn)變紅，應(yīng)注意殘留的存在。確定是否是殘留導(dǎo)致清潔過(guò)程失敗是一個(gè)單獨(dú)的決定。實(shí)驗(yàn)室“檢測(cè)限度”確定的目檢程序通常與執(zhí)行方案中的目檢不同，因?yàn)槟康氖遣煌摹Ｄ康臎Q定了在什么水平上某一種殘留能夠始終被觀察到跨過(guò)標(biāo)記的表面以關(guān)聯(lián)已知?dú)埩羲降哪繖z檢測(cè)限度低于標(biāo)記水平。這個(gè)程序可以在單獨(dú)的 SOP 中，或者整合到目檢的 SOP中。除了包括在執(zhí)行方案培訓(xùn)中的相同元素外，這個(gè)程序中培訓(xùn)的關(guān)鍵，涉及觀察標(biāo)記的取樣片，是仔細(xì)區(qū)別目測(cè)清潔的表面，部分臟污的表面（標(biāo)記區(qū)域的一部分有明顯的殘留）以及完全臟污的表面。