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嘉峪檢測網(wǎng) 2024-08-26 13:03
樣品過濾,旨在進(jìn)樣前除去樣品中的顆粒物,該過程普遍存在于樣品制備工作流程中,我們應(yīng)當(dāng)對我們使用的過濾器給予足夠的關(guān)注。過濾器主體和過濾器材料有許多種,使用的樣品性質(zhì)和溶劑種類將決定我們?nèi)绾芜x擇。下圖總結(jié)了典型的過濾材料及其應(yīng)用(溶劑和pH相容性),以表明選擇正確過濾材料的重要性。
以上所述的濾膜材料僅是品類繁多的濾膜材料中的一部分,有關(guān)過濾器材料的化學(xué)相容性和各種應(yīng)用類型適用性的更多信息,可以進(jìn)一步咨詢供應(yīng)商,但是必須指出的是濾膜與待研究的目標(biāo)化合物之間的相容性供應(yīng)商可能是缺乏相關(guān)數(shù)據(jù)的,需要研究者自行設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。
當(dāng)使用有機(jī)溶劑或更極端的pH水平時,必須確保濾膜不會發(fā)生降解或溶解,一般最常見的情況是濾器組件中相關(guān)成分浸出到濾液中。任何浸出成分均可作為色譜圖中的干擾物,影響分析的定性和定量,特別是使用質(zhì)譜檢測器、CAD檢測及RID檢測器等通用型檢測器時,當(dāng)然,紫外檢測器的低波段也可能出現(xiàn)干擾物的峰,甚至在250nm、280nm這類非低波長下某些項(xiàng)目中我們也觀察到了干擾峰。對這類干擾峰的排除,可使用等分試樣(對于大多數(shù)注射器式過濾器,1~2 ml一般足夠)慢速沖洗過濾器進(jìn)行預(yù)清洗。這種方法可以在許多應(yīng)用中顯著地改善色譜圖中的未知峰。極端情況下,可以先采用10ml左右的空白溶劑緩慢沖洗濾器,再使用前述方式?jīng)_洗,一般均可解決。更極端的情況是以上辦法均不行,那么一般認(rèn)為該品牌或該材質(zhì)的濾器與本次過濾的樣品溶液并不相容,需要更換濾膜材質(zhì)或品牌。
分析物吸附是有時會遇到的問題,它會嚴(yán)重影響方法的定量性能,因?yàn)椴煌^濾器的吸附程度不同,它會受到樣品基質(zhì)變化的影響。在應(yīng)用方面,尼龍和玻璃纖維材料對蛋白質(zhì)和多肽表現(xiàn)出非常高的結(jié)合性,聚偏二氟乙烯(PVDF)或聚醚砜(PES)過濾器一般要合適得多。親水性膜(如PVDF和聚四氟乙烯(PTFE))對低分子量分析物的非特異性結(jié)合相比之下最低。在方法開發(fā)過程中,應(yīng)始終通過評估過濾和未過濾樣品(除微粒含量最高的樣品外,通常可能使用所有樣品)中各分析物的儀器響應(yīng)值,進(jìn)行過濾器與分析物的結(jié)合研究。
對于顆粒非常多或分布不均的分析物,如固體制劑樣品溶液及含固體催化劑/非均相反應(yīng)監(jiān)控液等的過濾,增加預(yù)過濾器(如垂熔漏斗及更大孔隙的濾膜等)或采取先離心再過濾的方式可以避免堵塞較低孔隙率的膜,這樣操作一般至少可以實(shí)現(xiàn)高于直接過濾5倍以上的樣品通過。需注意的是,大多數(shù)預(yù)過濾器為玻璃纖維,與蛋白質(zhì)過濾不相容,應(yīng)確定使用PVDF或PES預(yù)過濾器材料的過濾器。
關(guān)于過濾器尺寸的選擇,實(shí)踐中往往會忽視,選擇正確的過濾器尺寸是一個權(quán)衡的過程。大直徑過濾器允許樣品在較低壓力下快速通過,且較少堵塞。然而,接觸面積的增大使得它們具有較高水平的浸提物、較高的非特異性分析物結(jié)合和較大的滯留體積的風(fēng)險(xiǎn)。對于小于2ml的樣品量,可使用4 mm過濾器;對于大于2ml的樣品,可使用13 mm過濾器。建議對樣品需求量不高的情況下,盡量使用直徑較小的過濾器,以避免不必要的污染和吸附,關(guān)于過濾器孔隙,有條件的建議均使用0.22μm及以下,0.45μm孔徑也可以用于常規(guī)液相色譜,但不建議用于管路更細(xì)、壓力更高的液相色譜系統(tǒng)(如UHPLC等)。
來源:藥知曉